Лада ч: LADA XRAY кроссовер — Официальный сайт LADA

Содержание

LADA XRAY | официальный дилер Лада Х Рей (Икс Рей) в Санкт-Петербурге


 

«ЛАДА-ЦЕНТР» – это крупнейший официальный дилер АО «АВТОВАЗ» в России с большим складом авто в наличии. Почти каждый третий автомобиль LADA покупают у нас.

Наши дилерские центры осуществляют продажу, сервисное гарантийное и постгарантийное техническое обслуживание всех моделей LADA. В отделе кредитования и страхования Вы можете оформить покупку автомобиля в кредит на индивидуальных условиях в соответствии со всеми Вашими требованиями и пожеланиями.

Наши преимущества

 

Кредит от 0%!
Без первого взноса

Ключи от авто
в день покупки

Более 1500 автомобилей
в наличии с ПТС

3 дилерских центра
в Санкт-Петербурге

Материнский капитал
на покупку автомобиля

Дилерские центры в 10
городах России

Бесплатная оценка
Вашего авто за 30 минут в
день обращения

Все модели LADA
доступны для тест-драйва

Сертифицированные сотрудники
сервисных центров

В дилерских центрах сети действуют специальные предложения, благодаря которым можно выбрать и купить LADA любой модели по самой привлекательной цене. Для знакомства с модельным рядом у нас представлена вся линейка автомобилей для тест-драйва.

«ЛАДА-ЦЕНТР» – дилер № 1 в России!

 

Салонов в России

Положительных отзывов

Авто в наличии

 

Продажа LADA XRAY в Санкт-Петербурге

Новый LADA XRAY – компактный кроссовер, обеспечивающий максимальный комфорт от вождения, высокий уровень безопасности и уверенность при маневрировании. Он адаптирован к любым дорожным условиям и суровому климату. Концепцию модели нового поколения полностью отражает её название: «X» – кроссовер, «R» – отдых, «A» – активность, «Y» – молодость.

Модельный ряд LADA XRAY 2020-2021 года представлен базовой моделью и версией Cross с расширенными возможностями. Каждая модификация кроссовера создана для активного ритма жизни, для смелых и решительных людей, для покорения бескрайних просторов нашей страны.

Официальный дилер «ЛАДА-ЦЕНТР» предоставляет возможность купить автомобили XRAY в кредит, в лизинг и по системе «трейд-ин» на максимально выгодных условиях. Кроме того, мы осуществляем техническое и сервисное обслуживание, предлагаем индивидуальные программы кредитования и страхования, скидки и подарки в рамках действующих акций, а также широкий ассортимент оригинальных аксессуаров и дополнительного оборудования.

Записаться на тест-драйв кроссовера, уточнить варианты комплектации и цены на LADA XRAY 2020-2021 года в Санкт-Петербурге в наличии или задать любой другой интересующий вопрос можно, позвонив специалистам отдела продаж по многоканальному телефону или лично посетив один из наших дилерских центров.

XRAY в наличии
Спецпредложения

 

Автоодеяло «АВТОТЕПЛО» для Lada X-Ray

Сохранит тепло двигателя.

Автотепло я купил осенью для утепления подкапотного пространства Ховера Н5. На предыдущей машине пользовался тёплым войлоком. После просмотра одного из сравнительных тестов по телевизору решил заменить войлок и купить Автотепло. Именно для моего автомобиля нет модификации, однако в Интернете помогли подобрать подходящий по размеру. С наступлением морозов начал его использовать. Двигатель действительно остывает значительно медленнее, да и снег на капоте не тает. К тому же, поднимая капот, значительно приятней видеть белое одеяло, чем грязный войлок. В общем, нисколько не жалею потраченных средств и рекомендую всем!

http://irecommend.ru/content/sokhranit-teplo-dvigatelya

Нужная вещь, для тех чья работа связана с машиной.

Работаю мерчендайзером. Всем известно, что это работа на своей машине-поиск новых клиентов, заключение договоров, привожу мелкий товар сама к клиентам, раскладываю товар на полки и т. д. Время-деньги. А зимой очень тяжеловато уложится в график, постоянно нужно прогревать машину, т. к. остывает, когда ухожу по работе. И родители решили мне помочь, и подарили эту чудо-вещь. Прогреваю машину только с утра, а весь мой рабочий день машина «теплая», сажусь и еду дальше. Больше 2х часов не задерживаюсь нигде, а капот на ощупь все-равно теплый. Рекомендую всем, у кого работа аналогичная моей. Очень экономит время и топливо.

http://otzovik.com/review_489121.html

ОЧЕНЬ ПОЛЕЗНАЯ ШТУКА.

Решил купить автотепло для своей Honda Civic 4D. Получил посылку и сразу пошел устанавливать. Укладывается без всяких проблем, размер подошел идеально, так что не понимаю, как у кого-то возникают трудности с установкой. Езжу по городу я довольно часто. Экономия почувствовалась сразу, процентов на 15. Немного, но все же. Цены-то на бензин не опускаются. Еще очень порадовала шумоизоляция. Знаю, что многие покупают этот продукт из-за этого. В общем пока нареканий нет, пройдет время посмотрим на его износоустойчивость.

http://otzovik.com/review_2589268.html

Сейчас буду пользоваться автотеплом третью зиму. О покупке не пожалел. Минусов нет от него. Двигатель действительно быстрее нагревается и дольше не остывает, также перестала образовываться ледяная корка на капоте. Лучше, чем мастерить самодельное покрывало, которое может загореться. Так что рекомендую к покупке.

http://www.lkforum.ru/showthread.php?t=52773

Купил. Уложил. Прогрев утром занимает 4-6 минут (пока нет сильных морозов), сильно не отличается от прогрева ранее без одеяла. Главный и жирный плюс, что на краткосрочных стоянках по 2-3 часа, двигатель абсолютно не надо греть. Прыг и поехал. Что касается спора выше о попадании одеяла на крутящиеся элементы двигателя, то могу сказать, что одеяло довольно жесткое и четкой геометрической формы, никаких прогибов и провисов не наблюдается. Так что должно быть все хорошо.

http://www.autopeople.ru/forum/hyundai/getz/exploitation/139479.html

Купил для своего автомобиля подарочек, уж хорошо про него отзываются. И реально при температуре в -11 градусов машина греется 6 минут, на бортовике 57 показывает. Остывает так же дольше. Плюс шумоизоляция, движка не слышно) Двигался по трассе в -9, температура двигателя 89-91 была, по городу 95 не ниже. В общем я не жалею этих денег, и хватит его не на одну зиму.

Лада Х код/XCode фото, технические характеристики, цена и дата выхода

{loadposition direct5}

Незадолго до Московского автосалона появилась информация о новом кроссовере от АвтоВАЗа под именем Lada XCODE, производитель даже показал несколько тизеров перед премьерой. И вот 24 августа 2016 года фото Lada XCODE Concept были опубликованы, а живой автомобиль предстал на мотор-шоу.

Экстерьер новинки чем то схож по дизайну с первым концептом Lada XRAY (см. фото ниже). У того же прототипа Икс Рея, показанного в 2012 году, позаимствована и трехдверная конструкция кузова. Однако от своего концептуального предшественника новый Х код отличается большей агрессивностью дизайна, а также двухцветностью окраски (как видно на фото Лада Х код корпус и крыша машины разных цветов). Понятно что серийный автомобиль будет пятидверным и лишен ряд дизайнерских изысков, но увидим мы его только через пару лет.

{loadposition adsense2}

По размерам новый кроссовер будет чуть больше нынешнего Икс Рея и Весты, но меньше Рено Дастер.

Дата выхода Lada XCODE обозначена не ранее 2019 года, цена: дороже Икс Рея, полный привод под большим вопросом.

На какой платформе и какие технические характеристики будут у нового кроссовера пока нет ясности, по одной версии базой станет разработка Nissan B0, уже используемая в Renault Duster, Kaptur и конечно же в Икс Рее. В этом случае Лада Икс Код может получить полный привод.

По другой неофициальной информации предполагается что автомобиль будет построен на другой платформе (объединенная Веста-Калина) и полного привода не будет. В пользу этой версии указывают уклончивые комментарии руководства АвтоВАЗа.

Ранее сообщалось, что, по словам Олега Груненкова, возглавляющего проект Lada XRAY, АВТОВАЗом действительно разрабатывается полноприводная версия Икс Рея. В Интернете даже начались появляться фото рендеры этого кроссовера, получившего имя XRAY Cross, отличающегося от обычного варианта увеличенным клиренсом и пластиковыми накладками на пороги и бамперы. Но на Московском автосалоне представили концепт XRAY Cross без полного привода (его производство намечено на 2018 год) и не ясно получил ли его и XCODE, который увидит свет не ранее 2019 года.

Фото Лада Х Код

Фотографии с презентации нового кроссовера на Московском автосалоне-2016:

Фото интерьера Lada XCODE Concept, салон серийного кроссовера конечно будет отличаться:

Видео

Официальное промо видео:

Дата выхода Lada XCODE

Старт продаж, если верить ранее рассекреченному плану развития АвтоВАЗа, вряд ли состоится ранее 2019 года. До этого момента должны прояснить и вопрос с платформой и представить уже серийную версию.

В 2016 году сообщалось, что компакт-кроссовер собираются выпустить в ближайшие пять лет, который в модельной гамме производителя должен расположиться между Калиной Кросс и XRAy (по размерам, по цене он будет дороже Икс рея). Сообщается, что выпуском Lada XCODE АвтоВАЗ ознаменует переход к следующему поколению автомобилей под брендом Лада.

Пока не сообщается, какая платформа будет использоваться в конструкции XCODE, однако упоминается о планах по использованию для полноприводной модификации специальной платформы и пары вариантов шасси. Кроме того, компания будет постепенно переходить к модульному шасси CMF-B – новой разработки альянса Renault-Nissan, призванной сменить архитектуру B0.

На протяжении последующих семи лет, АвтоВАЗ рассчитывает представить восемь новинок и, похоже, производителю это удастся. Например, осенью 2017 года началась реализация универсалов Веста, а в этом году состоится премьера серийного XRAY во внедорожном исполнении.

Модель Lada XCODE в виде прототипа показали в прошлом году в рамках Московского автосалона. Представители производителя отметили, что в машине может применяться фирменная телематическая платформа Connect, полноприводная трансмиссия, турбированный мотор и другие перспективные решения.


На фото салон концепта Лада Икс Код. Хочется надеяться что серийная версия позаимствует хотя бы часть дизайнерских решений

Цены и комплектации

До начала продаж о цене и комплектациях Лада Х Код (Lada XCODE) говорить пока рано. Явно что его стоимость будет больше Икс Рея.

Технические характеристики

Все что пока известно, это то что кроссовер построят либо на платформе B0, на которой базируется как Лада Икс Рей так и Renault Duster. Можно предположить что по техническим характеристикам Лада Х Код будет схожа с этими автомобилями, но размером больше чем у Икс Рея и попадет уже в сегмент среднеразмерных внедорожников.  Есть вероятность что Икс Код получит полный привод, но с этим на автогиганте еще не определились

Правда есть другая версия – кроссовер построят на объединенной платформе Веста-Калина и полного привода не будет. По последним данным, скорее всего так и будет.

Надежные авто, но со странностями. Британцы протестировали «Москвич» и Lada

Британский журнал Classic & Sports Car, который пишет только об автомобилях-раритетах, провел сравнительный тест трех некогда популярных моделей из Восточного блока — это советские Lada 1200 (ВАЗ-2101) и Moskvitch 1500 (АЗЛК-2140), а также ГДРовский Wartburg Knight (Wartburg 353).

Все эти машины в 70-е официально поставлялись на рынок Великобритании, спустя полвека журналисты решили сопоставить их между собой. Примечательно, что для теста нашли праворульные «Вартбург» и Lada. «Москвичей» в спецификации для Англии дожило до наших очень мало, поэтому изданию пришлось взять леворульный экземпляр в версии для континентальной Европы.

Как пишет автор статьи, Саймон Хакнелл, на Туманный Альбион поставляли только «Москвич-412», а его поздняя модернизированная версия с индексом 2140 не была доступна. «Москвич» журналиста удивил громоздкими непривлекательными деталями в салоне и вместе с тем щедрым оснащением — помимо прочего, есть ампметр, указатель температуры масла, двухскоростные дворники, крючки для одежды, запирающийся лючок бензобака, фонарь заднего хода.

Модель характеризуется отличной обзорностью с места водителя и высокой плавностью хода. Мягкая подвеска позволяет быстро ездить по разбитым дорогам. Однако рычаг КП — нечеткий и тугой. 1,5-литровый бензиновый мотор развивает 80 л.с., конструкция шасси — заднеприводная, с зависимой задней подвеской и неразрезным ведущим мостом. Особо отмечается резвый характер «Москвича» — с 0 до 60 миль/ч разгоняется за 15,3 секунды, для своего времени и своей цены очень неплохо.

Lada 1200 имела усовершенствованную конструкцию относительно Fiat 124. Здесь верхневальный двигатель и тормозные барабаны на задней оси (менее прихотливые, чем родные дисковые у Fiat). Мощность двигателя — 62 л.с., что британский автор считает недостаточным для семейного автомобиля. Рулевое управление у Lada — очень «тяжелое» на низких скоростях, а при наборе скорости приходится постоянно корректировать направление движения, потому что у механизма — большой люфт. Сцепление Хакнелл охарактеризовал как легкое, а переключение передач — короткое и точное. Торможение нужно планировать заранее, избегая экстренных ситуаций — система не очень эффективная. Шасси у Lada — также заднеприводное, с зависимой подвеской.

«Вартбург 353» 1967 года выпуска оснащен 1,0-литровым двухтактным бензиновым мотором мощностью 45 л.с. и передним приводом. Несмотря на небольшие размеры, седан имел рамную конструкцию — с лонжеронами периметрического типа. Еще одна его особенность — независимая задняя подвеска на продольных рычагах. Двигатель — вибронагруженный и шумный, однако обеспечивает плавную характеристику разгона. Коробка передач — слабое место восточногерманского автомобиля, механизм переключения одновременно «нечеткий, упругий и зазубренный», однако благодаря обгонной муфте не нужно выжимать сцепления, то есть это полуавтомат. Ход у «Вартбурга» — мягкий, но руль расположен низко и требует больших усилий.

Classic & Sports Car отмечает, что машины производства стран Варшавского договора в свое время в Западной Европе продавались по демпинговым ценам, поэтому конкурировали в первую очередь между собой, а также с европейскими автомобилями на два класса ниже. Так, в начале 70-х седан Moskvitch новым стоил в Британии всего 717 фунтов стерлингов, в то же время цены на субкомпактный Mini 1000 стартовали от 784 фунтов стерлингов.

По мнению автора статьи, автомобили из соцблока — «честные, надежные, дешевые и неприхотливые в обслуживании», благодаря им потребители в западных странах могли избегать рынка подержанных автомобилей, делая выбор в пользу новых.

Концепт Lada 4×4 Vision предсказал будущий внедорожник — ДРАЙВ

В пропорциях концепта угадывается классическая Нива, которая будто увеличилась в размере и приобрела фирменный X во фронтальной части, оптике, а также весьма спорные подштамповки на боках.

Классическая Нива, уже много лет скромно именуемая Ладой 4×4, до сих пор пользуется спросом. Но готовить ей что-то на замену нужно. Внедорожник нового поколения слишком далёк от премьеры, проект только развивается. Зато шеф-дизайнер компании Стив Маттин создал шоу-кар, предвещающий реинкарнацию легенды.

Ручки задних дверей спрятаны, так что издали концепт похож на трёхдверку. Именно в таком типе кузова настоящая Нива появилась более сорока лет назад. Сходство есть и в вентиляционных прорезях на задних стойках.

Модель Lada Xray Cross словно вернулась на Московский автосалон повторно. В отличие от 2016-го, теперь это не концепт, а серийная машина, пополнившая обширную семью кроссов от Лады. В нём вазовцы внедрили несколько новшеств. Впервые на машинах марки появился вращающийся селектор режимов движения. Помимо основного, это Sport, в котором ослаблена хватка системы стабилизации, а чувствительность педали газа повышена. Второй — полное отключение электронной стабилизации и противобуксовочной системы (переходит в обычный режим по достижении 54 км/ч). Два других рассчитаны на бездорожье: «Снег, Грязь» и «Песок».

Внешность Xray Cross сюрпризом не стала. Зато авторы машины порадовали некоторыми техническими подробностями. Обещана энергоёмкая подвеска (передняя на мощном подрамнике) и клиренс аж в 215 мм.

В салоне приподнятого «икс-рея» поселился мультируль. Ещё одна полезная деталь — складывающееся переднее пассажирское сиденье, позволяющее перевозить длинномеры. Кресла, кстати, пересмотрены, а длина салона увеличена на 25 мм.

В обоих внедорожных режимах сообразно покрытию меняется программа работы системы стабилизации, АБС и электронной имитации межколёсных блокировок. Всё это позволяет увереннее преодолевать трудные участки трассы. Но оба внедорожных режима автоматически деактивируются на скорости выше 54 км/ч.

Оснащается пятидверка мотором 1.8 (122 л.с., 170 Н•м), пятиступенчатыми «механикой» или «роботом» на выбор.

Помимо этих двух ярких машин, на Московском автошоу компания представила обновлённое семейство Granta, модели Lada Vesta Sport и Vesta Cross тоже пополнили ассортимент продукции АвтоВАЗа.

Нанобиосенсоры на основе FRET для визуализации внутриклеточных микродоменов Ca²⁺ и H⁺

Рисунок 1

Датчики красных ионов на основе FRET: ( A ) Принцип. Соединение квантовой точки с зеленым светом…

Рисунок 1

Датчики красных ионов на основе FRET: ( A ) Принцип. Связывание квантовой точки, излучающей зеленый цвет (QD: здесь CANdot ® 565), донора с излучающим в красный цвет сенсором ионов на основе родамина, акцептором, дает зависимый от анализируемого вещества сигнал FRET при возбуждении донора на длине волны 405 нм.В качестве специальных датчиков ионов, излучающих красный цвет, используются индикаторы Ca 2+ (альтернативно H + ), излучение которых подавляется ПЭТ в отсутствие их лиганда. Связывание аналита приводит к сильной флуоресценции с пиком при 602 нм; ( B D ) Химическая структура сенсоров: все сенсоры построены на расширенной части родамина (синий). Два семейства сенсоров Ca

2+ включают фрагмент BAPTA (зеленый) без ( B ) и с ( C ) кислородом, введенным в одно из ароматических колец BAPTA для семейств с более низким и высоким сродством: CaRuby1 (диапазон мкМ-мМ) и CaRuby2 (диапазон ниже мкМ), соответственно.Замены (Z 1 , Z 2 красного цвета с Z 1 = Cl, Z 2 = H для хлоридных производных и Z 1 = H, Z 2 = F для производных фтора , Z 1 = H, Z 2 = Me для CaRu1-Me) дают соединения с точно настраиваемым связыванием K D для Ca 2+ . Семейство датчиков pH (HRubies, ( D )) основано на добавлении фенола вместо BAPTA. Обратите внимание, что все соединения несут азидо / алкиновые боковые ответвления для химии щелчков и, как следствие, возможности для реакций сочетания с высоким выходом.Азид-несущий линкер вводится в мостик между двумя ароматическими кольцами BAPTA для CaRubies1 и в дополнительный кислород для CaRubies2. HR-PiAC несет алкиновую группу в орто-положении фенола через карбаматную связь пиперазина; ( E G ) Спектральные свойства оставшихся донорно-акцепторных пар ( E ), нормализованные спектры поглощения и излучения (пунктирные и сплошные линии соответственно) QD565 (зеленый) и CaRu-Me (красный). Поскольку при переключении с EGTA- на 2 мМ Ca 2+ -содержащий раствор имеет лишь небольшую чувствительность Ca 2+ к поглощению CaRu-Me, K D s CaRu-Me и QDCaRu-Me были аналогичными. , как и ожидалось.Аналогичные свойства ожидаются от CaRu2-F и HR-PiAC, поскольку их абсорбция соответственно Ca 2+ и нечувствительность к pH, как показано на панелях ( F ) и ( G ), где синие и красные следы отсутствуют. и присутствие аналита соответственно.

Новый анализ пептида FRET выявляет эффективное ингибирование HtrA Helicobacter pylori посредством связывания цинка и меди

Новый анализ пептида FRET для определения активности

H.pylori HtrA

До сих пор активность H. pylori HtrA (HpHtrA) в основном исследовалась с помощью казеиновой зимографии или вестерн-блоттинга фрагментов субстрата, которые являются трудоемкими, медленными и малопроизводительными методами 28,34 . Технология FRET представляет собой новейшую методологию и позволяет проводить непрерывные анализы активности протеаз и высокопроизводительный скрининг ингибиторов протеаз. Для разработки анализа пептида FRET, содержащего оптимизированный сайт короткого расщепления для HtrA, мы выполнили глобальный профиль специфичности для HtrA с использованием прямого анализа профиля протеазной специфичности в геле (DIPPS) 35 .Анализируя HtrA-нацеленные протеомные пептиды, полученные из клеток MKN-28, мы обнаружили 2479 пептидов, которые были обработаны HtrA. Эти пептиды обычно расщеплялись после алифатических аминокислотных остатков V, I и A в положении P1, в то время как предпочтение отдается основным аминокислотным остаткам, таким как R и K, в положении P2. Специфичность других участков связывания, не являющихся первичными, была менее выраженной, при этом R показал наибольшее обогащение в положении P3, а A в положении P4. Было показано, что среди первичных сайтов аминокислоты A и K обогащены в положении P1 ‘и Y в положении P2’ (рис.1A, левая панель, фиг. S1). Обнаруженный характеристический профиль специфичности AR / QRV ↓ AY хорошо соответствует сайту сигнатуры [VITA] ↓ [VITA] -xxD- [DN], ранее идентифицированному в субстрате HtrA E-кадгерине, и подтверждает предпочтение HpHtrA расщеплять между гидрофобными аминокислотами 11 . Интересно, что последовательность AR / QRV ↓ AY напоминает линкерную область AQPVEA между EC5 и TMD E-кадгерина, которая уже была предложена в качестве предпочтительного сайта расщепления в E-кадгерине для HpHtrA во время процесса инфицирования 11,12 , но еще не подтверждено экспериментально (рис.1А, правая панель). На основании этого уточненного паттерна сайта расщепления был получен пептид FRET, состоящий из оптимизированной последовательности AQRVAF, N-концевого флуорофора 2-аминобензоила (2-Abz) и C-концевого гасителя 3-нитротирозина Y (NO 2 ). синтезированы (рис. S2). Он одинаково хорошо расщеплялся трипсином и HpHtrA с R и V, соответственно, в положении P1 (фиг. 1B и фиг. S3 и S4). Тушение внутримолекулярной флуоресценции пептида FRET было высокоэффективным (рис. S3), а расщепление с использованием трипсина и HtrA дикого типа (wt) выявило сильное усиление испускаемой флуоресценции, тогда как неактивный мутант HtrA (SA) не влиял на субстрат FRET ( Инжир.1С). Масс-спектрометрический анализ продемонстрировал HtrA-специфическое расщепление с V в положении P1 (рис. S4). Кинетика протеолитической активности увеличения концентраций HpHtrA wt продемонстрировала эффективное расщепление пептида FRET уже при низких концентрациях по сравнению с неактивным мутантом HtrA SA (рис. 1D).

Рисунок 1

Новый пептидный анализ FRET для обнаружения активности HtrA H. pylori . ( A ) Профиль специфичности расщепления HpHtrA, полученный при профилировании DIPPS, представлен в виде iceLogo со значительно обогащенными и недостаточно представленными аминокислотами выше и ниже оси x , соответственно.Раздвижная пептидная связь между P1 и P1 ‘показана серой пунктирной линией на iceLogo. Модель справа представляет доменную структуру человеческого E-кадгерина (hCdh2), которая состоит из внеклеточного домена (EC1 – EC5), трансмембранного домена (TMD) и внутриклеточного домена (IC). Сайты расщепления HtrA были идентифицированы (красные стрелки) в сайтах связывания Ca ++ , расположенных между отдельными областями EC. Согласно iceLogo, дополнительный сайт расщепления для HtrA присутствует в линкерной области между доменом EC5 и TMD.( B ) Последовательность AQRVAF, содержащая 2-аминобензоил (2-Abz) в качестве флуорофора и 3-нитротирозин Y (NO 2 ) в качестве гасителя, гидролизуется трипсином с аргинином (R) в положении P1 и HpHtrA. с валином (V) в позиции P1. ( C ) 5 мкМ пептида FRET инкубировали с 250 нМ HpHtrA дикого типа (wt), его изогенно неактивным мутантом (SA) или 125 нМ трипсином в течение 180 мин в 50 мМ буфере HEPES (pH 7,4) при 37 ° C. ° C. Данные представляют собой относительные флуоресцентные единицы (RFU) ± S.D. с флуоресцентным сигналом, полученным от обработанного трипсином пептида FRET, установленного за 100%. Звездочки указывают на статистически значимые различия (**** p <0,0001). ( D ) 4 мкМ пептида FRET инкубировали с указанными концентрациями HpHtrA wt или SA в течение 180 мин при 37 ° C в 50 мМ буфере HEPES (pH 7,4). Данные представляют собой РФС ± С.Д. с флуоресцентными сигналами, полученными от пептида FRET, обработанного 400 нМ HpHtrA wt в течение 180 мин, установленным как 100%.

Двухвалентные катионы Zn

++ и Cu ++ блокируют HpHtrA-опосредованное расщепление E-кадгерина.

Пептидный анализ FRET является подходящим подходом для скрининга лекарств для выявления и оптимизации ингибиторов HpHtrA.Zn ++ может ингибировать широкий спектр неметаллопротеиназ, включая трипсин, калликреин и тромбин 33,36,37 . После нашего наблюдения, что ионы кальция эффективно предотвращают отшелушивание эктодомена E-кадгерина, покрывая HpHtrA-целевые сайты сигнатуры в субстрате 11,12 , мы провели подробное исследование влияния двухвалентных ионов на активность HtrA H. pylori и расщепление субстрата. В первом подходе рекомбинантный HpHtrA инкубировали с казеином, состоящим из α S1 -, α S2 — и β-казеина в качестве субстрата, и анализировали расщепление в белковых гелях, окрашенных Кумасси (рис.2А). HpHtrA эффективно расщепляет β-, α S1 — и, в меньшей степени, α S2 -казеин (рис. 2A, дорожка 3). Среди протестированных ионов металлов Zn ++ и Cu ++ сильно ингибировали активность HtrA, что указывает на прямое влияние этих двухвалентных катионов на протеолитическую активность HpHtrA (фиг. 2A, дорожки 7 и 9). Хелатирующие агенты EDTA и EGTA добавляли в качестве контролей, и они не влияли на HtrA-опосредованную деградацию казеина (фиг. 2A, дорожки 12 и 13). Эти данные предполагают, что двухвалентные переходные металлы могут по-разному влиять на активность HpHtrA.Расщепление казеина под действием HtrA, экспрессируемого Borrelia burgdorferi (BbHtrA), аналогичным образом ингибируется Zn ++ и Cu ++ , а также наблюдали для DegP из E. coli и HtrA1 человека 38 . Интересно, что кристаллическая структура гомолога HtrA A (HhoA) из фотосинтетической цианобактерии Synechocystis sp. PCC 6,803 показал, что гексамерная структура содержит ион Zn ++ в центральном канале, который инактивирует HhoA в анализе расщепления казеина 39 .Эти данные подтверждают наши выводы о том, что HpHtrA можно ингибировать путем прямого связывания Zn ++ и Cu ++ .

Рисунок 2

Двухвалентные катионы модулируют активность HpHtrA. ( A ) 10 мкг казеина, состоящего из α S1 -, α S2 — и β-казеина, инкубировали с 250 нг HpHtrA в течение 16 ч при 37 ° C в 50 мМ буфере HEPES (pH 7,4). Где указано, добавляли 1 мМ различных двухвалентных ионов, EDTA или EGTA. Белки разделяли с помощью SDS-PAGE и окрашивали кумасси бриллиантовым синим G250.( B ) 50 нг hCdh2 инкубировали с 250 нг HpHtrA в течение 16 ч при 37 ° C в 50 мМ буфере HEPES (pH 7,4). Где указано, добавляли 1 мМ различных двухвалентных ионов, EDTA или EGTA. Полноразмерный hCdh2 (Cdh2 FL , 125 кДа) и фрагменты расщепления hCdh2 детектировали вестерн-блоттингом с использованием антитела, распознающего домен EC5 hCdh2. HpHtrA и автоматически обработанный HpHtrA (HpHtrAs) детектировали с использованием поликлональных антител к HpHtrA.

Чтобы определить, вызвано ли это ингибирование прямым воздействием на протеазу HtrA или вмешательством в субстрат казеина HtrA, мы дополнительно проанализировали влияние ионов металлов на HtrA-опосредованное расщепление E-кадгерина.Рекомбинантный человеческий E-кадгерин (hCdh2) инкубировали с рекомбинантным HpHtrA в течение 16 часов в присутствии различных двухвалентных катионов, как указано. Фрагменты hCdh2 были обнаружены с помощью вестерн-блоттинга с использованием антитела, распознающего домен EC5 E-кадгерина. На эффективное HpHtrA-опосредованное расщепление hCdh2 указывало наличие характерного HtrA-индуцированного паттерна фрагментации 11 (фиг. 2B, дорожка 3). Добавление Ca ++ значительно блокировало расщепление hCdh2, в то время как хелатирующие агенты EDTA и EGTA значительно усиливали фрагментацию hCdh2 по сравнению с одним только HpHtrA wt, как сообщалось ранее 12 (рис.2B, дорожки 4, 12 и 13). Резкий ингибирующий эффект наблюдался после добавления Zn ++ и Cu ++ , поскольку HpHtrA-опосредованная фрагментация hCdh2 была сильно снижена (фиг. 2B, дорожки 7 и 9). Это согласуется с экспериментами по расщеплению in vitro с использованием казеина в качестве субстрата (рис. 2А). Эти данные предполагают, что Zn ++ и Cu ++ мешают активности HpHtrA, а не связываются с субстратом. Это явно контрастирует с Ca ++ , который связывается с мотивами связывания Ca ++ , расположенными между отдельными доменами EC.Связывание Ca ++ необходимо для функциональных межмолекулярных взаимодействий в цис и транс между внеклеточными доменами E-кадгерина на соседних эпителиальных клетках. В частности, эти связывающие Ca ++ мотивы были ранее идентифицированы как сайты расщепления для HtrA. Следовательно, связывание Ca ++ маскирует мотивы и предотвращает дальнейшую фрагментацию растворимого внеклеточного домена 90 кДа E-кадгерина при инфицировании H. pylori 11,12 .

Для дальнейшего уточнения ингибирующего действия Zn ++ и Cu ++ мы провели эксперименты по титрованию для определения концентраций Zn ++ и Cu ++ , которые необходимы для ингибирования HtrA, используя анализ пептида FRET (фиг. 3A). Важно отметить, что добавление только Zn ++ и Cu ++ не гасило флуоресцентный сигнал (фиг. S5), подтверждая специфичность измерения и предполагаемое широкое применение пептида FRET для будущего скрининга лекарств.Относительная флуоресценция через 15 и 180 минут продемонстрировала, что возрастающие концентрации Zn ++ и Cu ++ значительно снижают активность HtrA (фиг. 3A). Значения половины максимальной ингибирующей концентрации (IC 50 ), рассчитанные для Zn ++ , составили 649,5 нМ (95% доверительный интервал 560–746,1 нМ) через 15 минут и 2,57 мкМ (95% доверительный интервал 2,382–2,774 мкМ) через 180 минут. мин. Cu ++ показал IC 50 295,4 нМ (95% доверительный интервал 255.8–342,7 нМ) через 15 мин и 937,5 нМ (95% доверительный интервал 890,9–980,4 нМ) через 180 мин, что указывает на эффективную инактивацию HpHtrA. Ингибирование HpHtrA wt, обнаруженное в анализе пептида FRET, также сравнивали с экспериментами по расщеплению in vitro с использованием hCdh2 или казеина в качестве субстратов. В качестве контроля мы включили протеолитически неактивный мутант HpHtrA (SA) 4,40 , который не обрабатывает hCdh2 или казеин. Zn ++ явно ингибировал HpHtrA-опосредованную фрагментацию hCdh2 в концентрации 50 мкМ (рис.3B, дорожка 4) и более высокие концентрации Zn ++ блокировали расщепление hCdh2 еще более эффективно (рис. 3B, дорожки 5-8). В отличие от расщепления hCdh2, на казеинолитическую активность HpHtrA не влияли низкие концентрации Zn ++ или Cu ++ (рис. 3C), что позволяет предположить, что казеин может поглощать Zn ++ и Cu ++ в виде ранее сообщалось 41 и, следовательно, мешает активности расщепления. Небольшой ингибирующий эффект можно было обнаружить при использовании 250 мкМ Zn ++ или Cu ++ , который усиливался при увеличении концентраций (рис.3С, дорожки 6–8). Для полного ингибирования расщепления казеина требовалось увеличение до 500–1000 мкМ (рис. 3C, дорожки 7–8). Различные концентрации, необходимые для эффективного ингибирования HpHtrA, обнаруженного в анализе пептида FRET и в эксперименте по расщеплению in vitro, могут быть связаны с повышенной доступностью пептида FRET, который содержит единственный консенсусный сайт расщепления, не зависящий от конформации, а не сложенные комплексные белки. Таким образом, мы пришли к выводу, что использование пептида FRET в качестве субстрата для HpHtrA является высокочувствительным и надежным подходом для количественной оценки активности HtrA.

Рисунок 3

ZnCl 2 и CuCl 2 ингибируют активность HpHtrA в зависимости от концентрации. ( A ) 5 мкМ пептида FRET инкубировали с 250 нМ HpHtrA и возрастающими концентрациями ZnCl 2 (левая панель) или CuCl 2 (правая панель) в течение 15 минут (черные столбцы) и 180 минут (серые столбцы). при 37 ° C в 50 мМ буфере HEPES (pH 7,4). Данные представляют собой относительные единицы флуоресценции (RFU) ± S.D. с флуоресцентными сигналами, полученными от пептида FRET, обработанного HpHtrA wt, установленным за 100%.Звездочки указывают на статистически значимые различия (**** p <0,0001; нс, недостоверно). ( B ) 50 нг hCdh2 инкубировали с 250 нг HpHtrA wt или неактивным мутантом (SA) и увеличивающимися концентрациями ZnCl 2 (левая панель) или CuCl 2 (правая панель) в течение 16 часов при 37 ° C в 50 мМ буфер HEPES (pH 7,4). Полноразмерный hCdh2 (Cdh2 FL ) и фрагменты расщепления были обнаружены с помощью вестерн-блоттинга с использованием антитела, распознающего домен EC5 hCdh2.HpHtrA и автообработанный короткий HpHtrA (HpHtrAs) детектировали с использованием поликлональных антител. ( C ) 10 мкг казеина, состоящего из α S1 -, α S2 — и β-казеина, инкубировали с 250 нг HpHtrA wt или неактивным мутантом (SA) и с возрастающими концентрациями ZnCl 2 (левая панель ) или CuCl 2 (правая панель). После инкубации при 37 ° C в течение 16 часов белки были разделены с помощью SDS-PAGE и визуализированы путем окрашивания кумасси бриллиантовым синим G250.

Значения IC 50 ингибирования Zn ++ и Cu ++ не находятся в пределах физиологических концентраций (концентрации в свободной плазме составляют ~ 10 -9 моль / л для Zn ++ и ~ 1.6 × 10 −11 моль / л для Cu ++ ) 42 . Однако в комбинации с ингибиторами сериновой протеазы цинк, как сообщается, является мощным усилителем умеренных низкомолекулярных ингибиторов 33,37,43 . Хотя не все сериновые протеазы содержат типичные сайты связывания Zn ++ , которые характеризуются двумя остатками гистидина с их имидазольными боковыми цепями в качестве лигандов для Zn ++ , было высказано предположение, что Zn ++ и Cu ++ связывается в активных карманах тромбина 33 , трипсина 33 и калликреина 36 и связывает ингибитор с активным центром, что приводит к эффективному ингибированию.Эти исследования продемонстрировали, что более низкие концентрации как ингибитора, так и Zn ++ были достаточны для сильного усиления ингибирующих эффектов. Поскольку мы обнаружили, что Zn ++ блокирует активность HpHtrA, есть соблазн предположить, что умеренные ингибиторы HtrA в сочетании с низкой концентрацией ионов Zn ++ могут синергетически действовать как высокоэффективные цинк-опосредованные ингибиторы сериновой протеазы.

Zn

++ и Cu ++ по-разному взаимодействуют с HpHtrA

Олигомеризация необходима для активации E.coli , гомолог HtrA DegP, который превращается в протеолитически активные олигомеры при связывании субстрата 44 . Протеазы HtrA несут несколько доменов, которые критически важны для сборки и активности. Протеазы DegP / HtrA содержат сигнальный пептид (SP), расположенный на N-конце, за которым следует протеазный домен, который характеризуется каталитической триадой гистидина (H), аспарагиновой кислоты (D) и серина (S). Расположенные на С-конце домены PDZ1 и PDZ2 важны для распознавания субстрата и олигомеризации 44 .Несколько регуляторных петель (например, LA, LD и петли L1 – L3) были исследованы для E. coli DegP, которые имеют сходство последовательностей с HpHtrA (рис. 4A, рис. S6A и рис. S6B). «Сиротский» аллостерический карман (I 161 –S 169 ), расположенный между доменом PDZ1 и доменом сериновой протеазы, был идентифицирован в рентгеновской структуре HpHtrA 2,6 Å, которая функционирует как важный межбелковый интерфейс ( Рис. 4B и Рис. S6B) 45,46 . Этот аллостерический карман содержит аминокислотный мотив S 164 , D 165 , S 166 и D 168 , который необходим не только для стабильности и активности олигомеров HtrA 45 , но и для связывания низкомолекулярные ингибиторы, которые блокируют активность HtrA 46 .Хотя типичные связывающие Zn ++ — или Cu ++ мотивы, характеризующиеся богатыми гистидином участками, не присутствуют в этой области, HpHtrA и, в частности, аллостерическая петля могут содержать дополнительные Zn ++ — и Cu ++ -сайты связывания, состоящие из аспарагиновой кислоты (D), глутаминовой кислоты (E) или цистеина (C), которые могут одинаково хорошо связывать Zn ++ или Cu ++ 47 . Поэтому мы хотели исследовать, могут ли Zn ++ и Cu ++ нацеливаться на аспарагиновые кислоты, экспонируемые в этой петле, которые ранее были предложены как лиганд-связывающие мотивы 47,48 .Отдельные аминокислоты S 164 , D 165 , S 166 и D 168 были мутированы на аланин и проанализированы на стабильность олигомера (фиг. 4C). В то время как HpHtrA S 164 A показал увеличение стабильности олигомера при зимографии казеина и SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях, олигомерные HpHtrA D 165 A, HpHtrA S 166 A и HpHtrA D 168 A были полностью распался (рис. 4C, левая и средняя панель), подтверждая, что эта петля играет важную роль в аллостерической регуляции HpHtrA.Протеолитически неактивный HpHtrA S 221 A был включен в качестве отрицательного контроля, и чистота рекомбинантных белков HpHtrA была продемонстрирована в SDS-PAGE в денатурирующих условиях (фиг. 4C, правая панель). Основываясь на этих данных, мы предполагаем, что D 165 , S 166 и D 168 в HpHtrA не требуются для протеолитической активности, а скорее для стабилизации активной конформации. Затем протеолитическую активность мутантов HpHtrA анализировали в экспериментах по расщеплению in vitro.Несмотря на то, что стабильность всех трех олигомеров HpHtrA была явно снижена, казеин (фиг. 5A) и гидролиз E-кадгерина (фиг. 5B) изменились лишь незначительно по сравнению с HpHtrA wt. Мы предполагаем, что ограниченная активность HtrA достаточна для расщепления субстратов в течение 16 ч инкубации. Кроме того, кинетику гидролиза субстрата мутантами HtrA исследовали с использованием пептидного анализа FRET. Количественная оценка показала, что мутация S 164 или S 166 приводила к снижению протеолитической активности примерно на 30%.Мутация D 165 или D 168 вызывала еще большую потерю активности HpHtrA (фиг. 5C), предполагая, что мутации в петле серьезно влияют на стабильность, образование олигомеров и / или активность. Это наблюдение согласуется с нашими предыдущими данными, подчеркивая важность этой аллостерической области. Биоактивный лиганд, который был разработан для связывания с аллостерическим карманом, эффективно блокировал активность HtrA H. pylori и Campylobacter jejuni и, следовательно, трансмиграцию бактерий через эпителиальный барьер 46 .

Рисунок 4

Петля, связывающая аллостерический лиганд, важна для стабилизации олигомера HtrA. ( A ) Модель HtrA, демонстрирующая структуру домена, показывающую сигнальный пептид (SP), расширенную линкерную область, содержащую петлю LA, домен протеазы с каталитической триадой гистидина (H), аспарагиновой кислоты (D) и серина ( S), а также домены PDZ1 и PDZ2. Домен протеазы также содержит регуляторные петли LD, L1, L2 и L3. Положение лиганд-связывающей петли выделено красным.( B ) Рентгеновская структура протеазного домена HpHtrA 46 с S 164 , D 165 , S 166 и D 168 , указанными в лиганд-связывающей петле. S 221 в активном центре выделен пурпурным цветом. ( C ) Олигомеризация и активность HpHtrA wt, HpHtrA S 164 A, HpHtrA D 165 A, HpHtrA S 166 A, HpHtrA D 168 A и HpHtrA S 22, проанализированных на примере1 зимография (дорожки 1–6), невосстанавливающий SDS-PAGE (дорожки 7–12) и восстанавливающий SDS-PAGE (дорожки 13–18).

Рисунок 5

Протеолитическая активность мутантов петли HpHtrA. Для анализа протеолитической активности HtrA wt и его изогенных мутантов HpHtrA S 164 A, HpHtrA D 165 A, HpHtrA S 166 A, HpHtrA D 168 A и неактивных HpHtrA S 221 10 мкг казеина ( A ) или 50 нг E-кадгерина (hCdh2) ( B ) инкубировали с 250 нг вариантов HtrA, как указано, в течение 16 ч при 37 ° C в 50 мМ буфере HEPES (pH 7,4). Расщепление казеина анализировали с помощью окрашенного кумасси SDS-PAGE, а расщепление hCdh2 определяли с помощью вестерн-блоттинга с использованием антитела, распознающего домен EC5 hCdh2.HpHtrA и автоматически обработанные HpHtrA были обнаружены, как указано. ( C ) Активность мутантов лиганд-связывающей петли анализировали с использованием пептида FRET в качестве субстрата. Пептид FRET 5 мкМ инкубировали с 250 нМ HpHtrA wt (черный кружок), HpHtrA S 164 A (красный квадрат), HpHtrA D 165 A (зеленый треугольник), HpHtrA S 166 A (желтые перевернутые треугольники), и HpHtrA D 168 A (синий ромб) в течение 180 мин при 37 ° C в 50 мМ буфере HEPES (pH 7,4). Данные представляют собой относительные флуоресцентные единицы (RFU) ± S.D. с флуоресцентными сигналами, полученными от пептида FRET, обработанного HpHtrA wt в течение 180 мин, установленного как 100%.

Поскольку аллостерическая петля важна для регуляции HpHtrA и связывания лиганда, мы дополнительно исследовали, влияют ли Zn ++ и Cu ++ на олигомеризацию HpHtrA через эту петлю. Белки HpHtrA обрабатывали Zn ++ и Cu ++ , и олигомеризацию анализировали в белковых гелях, окрашенных Кумасси, в невосстанавливающих условиях. По сравнению с необработанным HpHtrA wt, мы наблюдали зависящий от концентрации эффект добавления Zn ++ на олигомеризацию HpHtrA.Концентрация Zn ++ , равная 50 мкМ, была достаточной для усиления олигомеризации или стабильности HpHtrA (фиг. 6A, левая панель, дорожка 2), что свидетельствует о прямом связывании Zn ++ с HpHtrA. Используя анализ теплового сдвига, мы сначала определили температуру плавления около 75 ° C для HpHtrA wt, которая довольно высока и указывает на повышенную стабильность, которая позволяет выжить в стрессовых условиях. 30,49 . Мутации D 165 и S 166 приводили к увеличению термической денатурации HpHtrA, в то время как мутации S 164 и D 168 не влияли на стабильность (рис.S7). Затем мутанты HpHtrA инкубировали с Zn ++ . HpHtrA wt был стабилизирован при концентрации приблизительно 10 мкМ Zn ++ . Аналогичный эффект был продемонстрирован для HpHtrA S 164 A, что указывает на то, что Zn ++ не мешает S 164 . Однако Zn ++ не стабилизировал HpHtrA, несущий мутации D 165 , S 166 или D 168 (фиг. 6A, правая панель). Это может быть объяснено либо наблюдением, что мутанты HpHtrA D 165 A, HpHtrA S 166 A и HpHtrA D 168 A не могут образовывать стабильные олигомеры в целом, либо предположением, что Zn ++ не имеет прямого связываются с аллостерической петлей, а скорее с активным карманом HpHtrA, как это было предложено для других сериновых протеаз 33,36,37 .Чтобы ответить на этот вопрос, связывание Zn ++ дополнительно анализировали с помощью термофореза на микромасштабах (MST) (таблица 1 и фиг. S8). Связывание Zn ++ может быть обнаружено для HpHtrA wt ( K d = 23 мкМ) и HpHtrA S 164 A ( K d = 55 мкМ) с сигналом до -шумность 6,3 и 6,0 соответственно. Хотя кривые связывания также были подогнаны для HpHtrA D 165 A, S 166 A и D 168 A (рис.S8), отношения сигнал / шум были слишком низкими, чтобы доказать связывание Zn ++ с белками (таблица 1). Cu ++ также исследовали, но он сильно гасил флуоресцентный сигнал при высоких концентрациях, и поэтому анализ данных был невозможен (данные не показаны). Таким образом, наши результаты подтверждают гипотезу о том, что HpHtrA D 165 и D 168 участвуют во взаимодействии с Zn ++ в качестве предполагаемого сайта связывания. Поскольку механизм активности HpHtrA еще интенсивно не исследован, до сих пор неизвестно, требуется ли олигомеризация для протеолитической активности или HpHtrA образует активные олигомеры в зимограмме после ренатурации.Но на основании наших данных в этом отчете мы пришли к выводу, что аллостерическая петля важна для стабильности олигомерного HpHtrA. Взаимодействие с Zn ++ может резко изменить конформацию HpHtrA, что приведет к увеличению стабильности олигомера, но также и к эффективному ингибированию протеолитической активности или распознавания субстрата. Подробный механизм олигомеризации и активности HpHtrA будет дополнительно исследован в будущем.

Рис. 6

Ионы Zn ++ и Cu ++ мешают стабильности HpHtrA через аллостерическую петлю.Чтобы исследовать влияние ZnCl 2 и CuCl 2 на стабильность и активность олигомеров HpHtrA, HpHtrA wt инкубировали с возрастающими концентрациями ZnCl 2 ( A ) и CuCl 2 ( B ). и затем анализировали с помощью окрашенного кумасси SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях (левые панели). 4 мкМ рекомбинантного HpHtrA wt (черные кружки), HpHtrA S 164 A (красные квадраты), HpHtrA D 165 A (зеленые перевернутые треугольники), HpHtrA S 166 A (желтые треугольники) и HpHtrA D 168 A (синий ромб) инкубировали с SYPRO Orange и возрастающими концентрациями ZnCl 2 и CuCl 2 при повышении температуры от 25 до 95 ° C (увеличение на 0.5 ° C в минуту). Изменения температуры плавления ΔT m представлены нормализованными к внутреннему T m индивидуального мутанта HtrA (правые панели).

Таблица 1 Взаимодействие HpHtrA с Zn ++ .

Данные, полученные в результате экспериментов с Cu ++ , значительно отличаются от данных, полученных с Zn ++ . HpHtrA wt был лишь незначительно стабилизирован при низких концентрациях Cu ++ , как было проанализировано с помощью окрашенного Кумасси SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях (рис.6Б, левая панель). Сравнивая мутанты HpHtrA в чувствительном анализе теплового сдвига, наблюдали два режима регуляции. При низких концентрациях Cu ++ стабилизировал мутанты HpHtrA wt и HpHtrA S 164 A, но не HpHtrA D 165 A, HpHtrA S 166 A и HpHtrA D 168 A (рис. 6B, правая панель), напоминающие эффекты, обнаруженные в ответ на Zn ++ (фиг. 6A, правая панель). Более высокие концентрации Cu ++ окончательно дестабилизировали HpHtrA wt и HpHtrA S 164 A.Интересно, что мутанты HpHtrA D 165 A, HpHtrA S 166 A и HpHtrA D 168 A были более сильно дестабилизированы Cu ++ (рис. 6B, правая панель), что указывает на то, что эти сайты в HpHtrA не только участвуют в стабильности олигомера, но и непосредственно нацелены на Cu ++ . В заключение мы предполагаем, что Cu ++ имеет два связывающих мотива в молекуле HpHtrA. Первый — это активный сайт, который представляет собой сайт связывания с высоким сродством для Zn ++ и Cu ++ и может связывать металлы уже в более низких концентрациях.Это было предложено для ряда сериновых протеаз, которые связывают Zn ++ и Cu ++ через гистидин в своих карманах 33,36,37 . Второй мотив в молекуле HpHtrA представляет собой сайт связывания с низким сродством, образованный аллостерической петлей, связывание которой приводит к дестабилизации HpHtrA. Однако подробный механизм интерференции Zn ++ и Cu ++ с HpHtrA требует дальнейшего внимания и будет изучен в будущих исследованиях.

Базовые гитарные ладовые интервалы — Как работают интервалы

Этот урок об интервалах гитарных ладов хорошо следует от обучения записи на грифе и примечание отношения.

Сейчас мы собираемся посмотреть, как интервалы поработайте на грифе вашей гитары.

Интервалы можно рассматривать как пробел или расстояние между две высоты / ноты. Чем больше расстояние между точками, тем больше интервал.

Так, например, интервал между нотами A и C больше, чем интервал между A и B .

Набор интервалов из одной и той же начальной ноты создает аккорд (когда они играются вместе) или шкалу (когда играют один за другим).Так что интервалы можно рассматривать как строительные блоки музыки. Мы рассмотрим это подробнее в следующей части. Но сначала …

Полушаги и целые шаги

Если вы углубитесь в теорию гитары, вы услышите, как люди говорят около целых шагов (также называется полных тонов , сокращенно W или Т ) и полутонов (также называется полутонов , сокращенно H или S ).

Ну, что они имеют в виду интервалов — расстояние между двумя нотами.

Половина и целые шаги — это наименьшие интервалы / движения на грифе.

См. Схемы ниже, чтобы узнать, как эти интервальные «ступеньки» появятся на шее …

Вот как полшага и целый шаг интервалы появятся на один строка . Это тот же интервал, на какой бы струне вы ни играли:

  • Полушаги эквивалентны на одном ладу между начальной нотой и нотой назначения.
  • Целые шаги эквивалентны двум ладам между начальной и конечной нотой.

Итак, если бы мы переехали из 3-й лад на целую ступень мы бы оказались на 5-м ладу.

Если бы мы переехали из 5-й лад на полшага мы закончили бы на 4-м ладу.

Если вы видите такую ​​шкалу …

… вы знаете, что означают буквы W и H, и ты должен в хотя бы уметь визуализировать масштаб по одной строке, используя всю и полушаговые ладовые интервалы.

Вы также можете увидеть шкалы, написанные с использованием последовательностей единиц и двоек.Это 1 для полушага и 2 для всего шага (как 2 полшага составляют единое целое!).

Например, приведенная выше последовательность может быть записана как: 2 2 1 2 2 2 1

Или как: W Ш В Ш Ш Ш В

Или как: T Т С Т Т Т С (T = весь тон, S = полутон)

Теперь мы хотите использовать эти интервалы более чем в одной строке, поэтому нам нужно знать, как эти интервалы появляются по вертикали, от строки к строке, а также по горизонтали.

Половина / целые шаги через более чем одну строку

Давайте посмотрим на несколько схем чтобы увидеть, как эти же интервалы целого и половинного шага появляются между двумя соседние струны.

Грейфер твоя гитара и играй эти позиции, чтобы вы могли слышать звук интервала, перемещая оба вверх и вниз.

Посчитайте, сколько ладов в ширину интервал появляется. Зачем это нужно? Потому что зная, где интервалы появятся в нескольких местах на грифе сделают гамму и аккорд импровизация проще.

Полушаг между 6-й и 5-й струнами

Весь шаг между 6-й и 5-й строками

Оба эти отношения такие же для нижних четырех струн: E A , А Д и D G .

Однако, поскольку струна B настроена по-разному относительно G строку, мы должны компенсировать, регулируя соотношение на накладка грифа:

Полушаг между 3-й и 2-й струнами

Весь шаг между 3-ей и 2-й строкой

Тогда вернемся к тот же интервал ладов, что и раньше, между струнами си и высокой ми…

Целые и половинки Шаговые интервалы — это строительные блоки гамм и движений между аккордами, поэтому возможность видеть эти отношения по всем шести строкам очень полезны, даже если они сейчас не кажется таким уж большим делом. Это своего рода визуальные ссылки, которые помогут вам ориентироваться на грифе в музыкальном плане и без промедления.

Вдоль с помощью шаблонов нот, которые вы изучили на предыдущем уроке, вы сможете переключаться между позициями нот в зависимости от интервальные отношения, которые вы наметите на грифе.Это, в свою очередь, означает, что будет меньше времени тратиться на проб и ошибок и больше взаимосвязи между различными концепциями, которые мы рассмотрим в будущих уроках.

H. Лады и скрипты

H. Лады и скрипты >> << Usr Pri JfC ЖЖ Phr Dic Вокал !: Помощь Словарь

H. Лады и скрипты

Хост-системы обычно используют «перевод строки» или «возврат каретки» символы 10 {а. или 13 {а. (или оба вместе) как лад для обозначения делений на отдельные строки .Список символов, содержащий ноль или более ладов, будет называться скрипт .

Как указано в Приложении A, сценарий t может быть подан и извлекается выражениями вида t 1!: 2 <'abc' и t =: 1!: 1 <'abc', и может быть выполнено выражением 0!: 11 <'abc'.

Удобный ввод скриптов обеспечивает фраза 0: 0; последующие нажатия клавиш принимаются как буквальные символы; введите ключ , который обычно прекращение записи принимается как лада; и запись оканчивается единственной правой круглой скобкой, которая принимается в качестве последнего лада.Например:

   s =: 0: 0
г *%: у
:
х *! у
)

   а. я. s Символ с индексом 10 отмечает конец каждой строки
121 46 42 37 58121 46 10 58 10 120 46 42 33 121 46 10
 
Штучные и табличные представления сценария могут быть получены следующим образом:
   ] b =: <; ._ 2 s Обрежьте последний лад и исключите лады
+ ----- + - + ---- +
| y *%: y |: | x *! y |
+ ----- + - + ---- +

   ] t =:> b
г *%: у
:
х *! у
 
Любое из этих представлений r может использоваться как правильный аргумент явного определения конъюнкции, чтобы произвести наречие (1: r), союз (2: r) или глагол (3: r или 4: r).Например:
   f =: 3: s
   f 9 Двоеточие в скрипте разделяет монадический и диадический падежи
27

   3 f 4 x и y относятся к левому и правому аргументу
72
 
Фразы a =: 1: 0 и c =: 2: 0 и v =: 3: 0 обеспечивают прямой ввод наречий, союзы и глаголы.

Файлы сценариев могут определять функции и другие объекты. которые могут служить дополнением к праймериз J . Их обычно называют вторичным или высшим функции в соответствии с их относительной общностью.


>> << Usr Pri JfC ЖЖ Phr Dic Вокал !: Помощь Словарь

Понимание размеров ладов — большие лады против средних джамбо против узких высоких

При покупке гитар вы часто встретите упоминания о размере ладов гитары — «гигантские лады» или «средние гигантские лады» и т. Д.

В чем разница? Почему у меня разные размеры ладов?

Ищете гитару для начинающих? Наш интерактивный гид по снаряжению FindYour.Fender.com подберет для вас идеальную модель, узнав о вашем звуке и стиле.Вы будете на правильном пути к поиску гитары, которая вам подойдет.

Во-первых, давайте разберемся с терминологией. Когда мы говорим лады, мы имеем в виду тонкие проволочные полоски, расположенные с очень точными интервалами по всей длине грифа; а не промежутки между тонкими проволочными полосками, в которых на самом деле проходят ваши пальцы, когда вы нажимаете на струны (или натягиваете их).

Лады нарезаются из проволоки для ладов, которая изготавливается в виде длинных рулонов и обычно изготавливается из нейзильбера, сплава, который на самом деле не содержит серебра.Анатомически лады состоят из закругленной «короны» (или «бусинки») поверх более тонкого «хвостовика» с зазубринами с обеих сторон, как видно в поперечном сечении. Отдельные лады обрезаются по ширине грифа гитары и забиваются (точнее, нежно постукивают) в прорези, предварительно вырезанные на грифе. Заводная головка проходит на ширину прорези; хвостовик немного короче ширины прорези. Зубцы по обе стороны от хвостовика помогают удерживать лад в прорези, хотя также часто используется клей.

Мы только что объяснили анатомию ладов, потому что, когда мы говорим о размерах ладов, мы говорим только о ширине и высоте короны.

Основной производитель ладовой проволоки, калифорнийская компания Dunlop Manufacturing Inc., производит лады пяти основных размеров. Они перечислены по номеру детали, имени (если применимо), ширине и высоте короны, от наименьшего к наибольшему:

6230: Самая маленькая лада на грифах старых Fender (0,078 ″ x 0,043 ″).
6150: Винтажный джамбо. Намного шире, но не такой высокий, как 6230 (0,102 x 0,042 дюйма).
6105: Современные узкие и высокие; в настоящее время очень популярны (0,090 ″ x.055 ″).
6100: Джамбо. Самая большая лада из доступных (0,110 ″ x 0,055 ″).
6130: Средний jumbo (0,106 x 0,036 дюйма).

Какой размер вам нравится, это вопрос ваших предпочтений, хотя он может повлиять на ваш стиль игры. Если вы хотите, чтобы ваши пальцы касались грифа при нажатии на струны, лады не такие высокие, как у 6130, 6150 или 6230. С другой стороны, лада jumbo 6100 может обеспечить более легкую игру с лучшим сустейном, тоном и изгибом, потому что вам не нужно нажимать так сильно, чтобы натянуть струны, но ваши пальцы, вероятно, даже не коснутся грифа, что может занять некоторые привыкают, если вы привыкли к меньшим ладам.

Хотите узнать больше о ладах? Посмотри это видео. А если вы не являетесь участником Fender Play, щелкните здесь, чтобы получить бесплатную пробную версию.

Произошла ошибка при установке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Стул без подлокотников Fret Knot | Караколе

Стул без подлокотников Fret Knot
UPH-019-AC1-B

КОЛЛЕКЦИЯ: ОБИВКА ИЗ КАРАКОЛА

Размеры в дюймах: 31W x 36,5D x 30,5H

Размеры в сантиметрах: 78.74 Ш x 92,71 Г x 77,47 В

Создайте зону отдыха своей мечты с возможностью настройки этих элегантных сегментов сиденья с изысканной резьбой. Исключительные снаружи внутри, эти вдохновляющие изделия украшены вставками из резных ладовых панелей, вставленных на их внешнюю сторону спины. Этот единственный в своем роде рисунок ладов был вдохновлен узким окном замка и решеткой, пропускающей воздух и свет.Обитое изысканной тканью, оно предлагает безупречный стиль и удобное сиденье, завязанное вручную в восьми направлениях. Мягкая серебряная краска добавляет мерцания деталям, отделанным панелями, и ножкам с канавками.

ФУНКЦИИ:
  • Конические ножки с коническими канавками.
  • Раскидывающая подушка плотная спинка.
  • Свободная подушка сиденья.
СТРОИТЕЛЬСТВО:
  • Подушка пружины.
  • Сиденье с ручным креплением в 8 направлениях.
  • Подушки перьевые

ОТДЕЛКА:

Мягкая серебряная краска

ТКАНЬ:

Ткань корпуса: 2778 71CC Ткань подушки: 1 подушка 20 x 20 дюймов 8379 71CC 1 подушка 19 дюймов x 19 дюймов 3231 74CC

Из-за различий, присущих мониторам и браузерам, образцы цветов могут отличаться на разных мониторах.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *