Скачет температура: Книга «Куда скачет температура?», Катасонов Федор

Содержание

Врачи назвали изменения в симптоматике COVID-19 с начала пандемии

Температура при коронавирусной инфекции стала меняться более «волнообразно», нежели в начале пандемии, считает главврач больницы им. Филатова Валерий Вечорко. За время пандемии симптомы ковида постоянно видоизменялись, к тому же расширялся их список. И в будущем он будет только расти, предупреждают врачи. О том, как за год изменилась клиническая картина COVID-19, рассказывает «Газета.Ru».

Клиническая картина течения коронавирусной инфекции у пациентов изменилась с начала пандемии, заявил главный врач столичной клинической больницы №15 имени О. М. Филатова департамента здравоохранения Москвы Валерий Вечорко.

Главное изменение, по наблюдением медика, заключается в температуре. «Если раньше у нас поступал пациент с лихорадкой, она была стойкая, в течение какого-то периода времени, а потом наступало улучшение.

То сейчас течение болезни — волнообразное. Поступает пациент, допустим, с температурой 38°C, потом она снижается, потом опять поднимается до 38°C»,

— сказал врач РИА «Новости».

Температура тела всегда была «волнообразной» при COVID-19, заявил «Газете.Ru» инфекционист и вакцинолог Евгений Тимаков. Однако список симптомов коронавирусной инфекции действительно расширился с начала пандемии, признал эксперт.

«Я поэтому и называю коронавирус подлой инфекцией, потому что он дает повышение температуры день-два, потом состояние нормализуется и, следом, резко ухудшается с повышением температуры. Просто в начале пандемии первую температуру вряд ли связывали с коронавирусом. Но за время наблюдения за инфекцией новые симптомы действительно появились», — сказал врач.

Дело в том, что информации о SARS-CoV-2 благодаря научным исследованием и сбору статистических данных стало больше. В связи с этим врачи начали связывать различные недомогания, возникающие у человек в ходе заболевания COVID-19, с коронавирусной инфекцией.

«Например, в последние месяцы мы узнали, что появляется нарушение слуха при коронавирусной инфекции. Летом присоединились головные боли, нарушение сна, выраженная усталость. Дополнительно стали известны различные психологические тревожные состояния, нарушения кровотока, тромбозы. Потом появились симптомы нарушения памяти из-за того, что идет нарушение кровотока», — перечисляет Евгений Тимаков.

Также по мере работы врачи фиксировали у больных легочно-дыхательную недостаточность и гиперимунную реакцию. По словам эксперта, определение коронавирусной инфекции вообще кардинально изменилось за время пандемии.

«Если в январе мы говорили, что это ОРВИ с атипичной пневмонией, то сейчас мы говорим, что это полиорганное заболевание (совокупность недомоганий нескольких функциональных систем и органов. – «Газета.Ru») с вовлечением почти всех органов и систем с выраженными воспалениями», — резюмировал Тимаков.

Он прогнозирует, что новые симптомы и осложнения продолжат появляться в ходе наблюдений за SARS-CoV-2. Врачи из «красных зон» подтверждают: каждый день им приходится фиксировать все новые и новые проявления коронавирусной инфекции.

«Периодически возникают новые проявления у разных пациентов — неврологические, кишечные и другие осложнения. Лабораторные анализы указывают на то, что коронавирус поражает практически все системы и органы», — рассказала сайту kp.ru хирург Гаянэ Давидян городской клинической больницы Пятигорска.

Но основная клиническая картина останется неизменной, считает инфекционист Тимаков. С ним согласился врач-пульмонолог ГБУЗ МО МОНИКИ им. Владимирского, член Европейского и Российского респираторного общества Алексей Никишенков.

«На мой взгляд, нет никаких изменений ярко выраженных. Лихорадка, в принципе, индивидуальна у каждого, но, как правило, мы наблюдаем длительное время небольшой субфебрильный подъем температуры после заболевания. А информация о новых симптомах появляется, потому что коронавирус еще изучается», — сказал медик «Газете.Ru».

Сейчас симптомы коронавируса нового типа, чаще всего наблюдающиеся у пациентов, таковы: усталость, повышенная температура, потеря обоняния, боль в горле и кашель, подытожил вакцинолог Евгений Тимаков.

«В самом начале появляется усталость. Когда вирус начинает размножаться в организме, он вызывает выраженную усталость. Многие бессимптомные больные ее не замечают. Далее температура, потеря обоняния, но не сразу, а когда уже будет поражена обонятельная область. Потом присоединение кашля или боли в горле – это типичные симптомы для коронавируса», — заключил врач.

Иммунолог указала на отличия гриппа от коронавируса — РБК

Фото: Кирилл Зыков / АГН «Москва»

При заболевании коронавирусной инфекцией высокая температура держится дольше, чем при гриппе. Об этом заявила врач-аллерголог, иммунолог Ирина Ярцева, передает «Вечерняя Москва».

«Классически мы привыкли, что при гриппе температура высокая, до 39 градусов, держится дней шесть. При ковиде она может держаться до 10–12 дней, и это считается легкой формой», — указала эксперт.

Роспотребнадзор назвал отличия симптомов COVID-19 от гриппа и простуды

Ярцева отметила, что, несмотря на это, организм больного с коронавирусом может справляться с инфекцией, поддерживая уровень кислорода в крови на достаточном уровне. Однако у пациента будет более выраженная интоксикация, чем при гриппе.

Еще одним отличительным знаком, добавила врач, может служить боль в горле. У зараженных коронавирусом она обычно отсутствует. Кашель иммунолог назвала непредсказуемым симптомом, отметив, что он появляется у больных COVID-19 при поражении легких.

Врач назвала опасную для жизни температуру тела | Новости | Известия

Температура тела индивидуальна у каждого человека и зависит от разных особенностей организма, однако в некоторых случаях пониженная или повышенная температура может свидетельствовать о серьезных проблемах. Об этом в четверг, 2 сентября, «Известиям» рассказала заведующая поликлиническим отделением клинической больницы МЕДСИ № 1 в Отрадном, врач-терапевт-онколог Наталия Толстых.

По словам специалиста, на температуру тела могут влиять такие показатели, как особенности метаболизма, работа эндокринных желез или вегетативная нервная система. При этом у каждого человека в течение дня температура колеблется в небольших пределах, оставаясь в диапазоне от 35,5 до 37,2 градуса для здорового человека.

Также температура может меняться в зависимости от активности (при высокой активности температура может незначительно повышаться) и от времени суток. Нормальные суточные колебания температуры составляют 0,5–0,7 градуса. Когда человек засыпает, все процессы в теле замедляются и температура тела немного снижается, становится ближе к 35–36 градусам, объяснила Толстых.

«Важно понимать, что пониженная (по сравнению с популяционной нормой) температура тела, то есть менее 35,5 градуса, может являться индивидуальной особенностью некоторых людей, и далеко не всегда свидетельствует о наличии заболеваний. Низкая температура тела, или так называемая гипотермия (ниже 35,2 градуса), может быть вызвана переохлаждением, интоксикацией, проблемами с эндокринной системой (сниженная функция щитовидной железы — гипотиреоз, или недостаточность надпочечников)» — рассказала онколог.

Гипотермия также встречается при тяжелом течение инфекции среди пожилых людей, при переохлаждении. Часто температура может быть понижена в течение нескольких дней после того, как человек переболел инфекцией, — так называемый астенический след.

«Это сигнал о том, что организм справился с инфекцией, но еще слаб и есть риск заболеть снова», — пояснила эксперт.

Помимо этого, к незначительному изменению температуры могут привести воздействие тепла и холода, физическая активность, употребление острых блюд и/или плотный прием пищи, а также состояние беременности (в таком случае часто встречается температура тела до 37,4 градуса).

«37,1–38 градусов — это так называемая субфебрильная температура. Она может сохраняться в течение двух недель после инфекции с лихорадкой. При отсутствии других симптомов такое состояние не требует дополнительного обследования и лечения. Достаточно часто в стертой форме протекают простудные заболевания, а выявление температуры является случайной находкой», — добавила Толстых.

Говоря о повышенной температуре, она подчеркнула, что такая реакция организма является его ответом на внедрение патогенного микроорганизма. При хорошей переносимости лихорадку до 38,6 лучше не сбивать приемом жаропонижающих средств, так как бактерии и вирусы хуже размножаются при повышенной температуре окружающей среды, рекомендовала врач, уточнив, что это касается здорового молодого организма без сопутствующей патологи.

Однако из этого общего правила есть исключения. К температуре тела следует относиться внимательнее в ряде случаев.

«Во-первых, при патологии сердечно-сосудистой системы (в частности, ишемической болезни сердца, сердечной недостаточности) повышение температуры вызывает высокую нагрузку на сердце, учащение пульса, поэтому в таких случаях порог снижения температуры может быть снижен до 38 градусов. Во-вторых, при неинфекционной причине лихорадки (паранеопластическая, то есть опухолевых заболеваниях, лихорадка, лихорадка при ревматоидных заболеваниях) уже смысла выдерживать высокую температуру нет», — рассказала специалист.

По словам Толстых, дети обычно нормально переносят температуру до 39 градусов, но врач отметила, что есть люди, чувствительные к фебрильным судорогам, то есть их развитию при повышении температуры тела.

Обычно речь идет про лихорадку выше 40 градусов, однако судороги индивидуально могут развиваться и при температуре 39 градусов и даже ниже. В таких случаях важно помнить об этой особенности ребенка и не допускать подобного повышения температуры.

«При температуре 41 градус и выше белок начинает денатурировать везде, по сути, организм варится — такая температура опасна для жизни», — обращает внимание эксперт. В таком случае температуру нужно снизить — помогут жаропонижающие, охлаждение холодным одеялом и обтирания.

Ранее, 30 июня, врач-дерматолог, косметолог, трихолог Татьяна Егорова рассказала, какая температура воды является оптимальной для принятия душа. По словам специалиста, температура воды в 38 градусов является комфортной и полезной для принятия душа. Допустимо увеличить температуру до 39 градусов — это будет максимумом.

Чем опасен постковидный синдром, что ждет через шесть месяцев тех, кто перенес коронавирус, комментарий медика — Город — Новости Санкт-Петербурга

После ковида нужно максимально защитить бронхолегочную системуФото: Артем Устюжанин / E1.RUПоделиться

По данным международных исследований, постковидный синдром встречается у 10–20% пациентов, перенесших инфекцию. Жалобы и беспокойство могут сохраняться на протяжении нескольких недель или месяцев.

О последствиях СОVID-19 и о том, на какие изменения в собственном здоровье нужно обратить внимание после болезни, нам рассказал руководитель мультидисциплинарной бригады врачей Центра диагностики и лечения последствий новой коронавирусной инфекции, врач-пульмонолог «Новой больницы» Алексей Кривоногов.

— Сейчас специалистами используется собирательный термин «длительный COVID». Он подразумевает, что определенные симптомы у человека сохраняются через длительный промежуток времени после вирусологического выздоровления SARS-CoV-2, — говорит Алексей Кривоногов.

По словам медика, симптомы могут сохраняться непрерывно или рецидивировать, среди них могут появляться новые. Главное — человек должен находиться под наблюдением врачей, потому что сам он может неверно интерпретировать происходящие с ним изменения или вовремя их не заметить.

Когда начинается постковидный синдром

Сегодня врачи всего мира относят все симптомы COVID-19 в первые четыре недели заболевания к острой фазе коронавирусной инфекции.

— Только лишь вирусологическое выздоровление не является маркером, который говорит о выздоровлении пациента, — объясняет пульмонолог. — Острая фаза инфекции и отдаленные реакции, которые связаны с COVID-19 (в первую очередь это поражение легких, сердца и тромбоэмболические осложнения), могут продолжаться и после того, как ПЦР-тесты станут отрицательными. Подъем температуры у пациента на второй-третьей неделе болезни может говорить, например, об увеличении зоны поражения легких. Это еще не постковидный синдром, а острая фаза, которую нужно соответствующим образом лечить.

Продолжающийся симптоматический COVID-19 — это то, что происходит с перенесшим инфекцию человеком на 4–12-й неделе от начала заболевания. Но только в том случае, когда патологические признаки не могут быть объяснены другими причинами, ведь болезни могут появиться у любого человека как до заражения вирусом, так и после этого.

О постковидном синдроме говорят, если симптомы, которые беспокоили больного во время острой фазы или появились после нее, продолжаются 12 и более недель.

  • Проявления постковидного синдрома очень разнообразны. Это усталость, забывчивость, депрессия, головная боль, боли в грудной клетке, потеря обоняния, стойкий кашель, одышка, учащенное сердцебиение, боли в мышцах, сыпь, боли в животе и нарушения стула в виде диареи. Редко — рецидивирующая лихорадка. Всё это говорит о последствиях системного воздействия вируса на организм человека.
  • Причина появления этих симптомов — непосредственное нарушение работы органов или нервной системы, в первую очередь вегетативной, которая отвечает за работу внутренних органов и терморегуляцию.
  • Частота, с которой проявления постковидного синдрома беспокоят пациентов, снижается с 4-й до 12-й недели от начала заболевания. Самыми частыми жалобами в этот промежуток являются патологическая усталость и респираторные симптомы — нарушения обоняния, кашель и одышка.
Алексей Кривоногов руководит мультидисциплинарной бригадой врачейФото: МО «Новая больница»Поделиться

У кого чаще развивается постковидный синдром

Врачи выделили группу риска, у которой постковидные изменения бывают тяжелее и проходят дольше. В число факторов риска входят:

  • пожилой возраст;
  • ожирение или избыточный вес;
  • наличие астмы или других сопутствующих заболеваний;
  • развитие множественных симптомов COVID-19 в острой фазе инфекции;
  • отсутствие положительного результата на коронавирус (пациенты не получили своевременного лечения и наблюдения).

Какой врач должен вести пациента после COVID-19

Список врачей может быть очень длинным из-за множества проявлений постковидного синдрома. Инфекция повышает риск развития болезней сердца и сосудов, легких, кожи и суставов, нервной системы и даже психиатрических заболеваний.

— Оптимально, когда первичный прием при появлении признаков постковидного синдрома проводят терапевт и пульмонолог, — говорит Алексей Кривоногов. — Они определяются с дальнейшей тактикой ведения пациента и необходимыми исследованиями. При необходимости проводится медицинский консилиум, на котором мы принимаем решение, как будет обследоваться и лечиться пациент — стационарно или амбулаторно. Непосредственно лечением может заниматься специалист мультидисциплинарной бригады, в которую входят терапевт, пульмонолог, невролог, кардиолог, гастроэнтеролог, ревматолог, лор-врач и клинический психолог.

После выписки пациент в любом случае должен получить рекомендации по диспансерному наблюдению, образу жизни и вакцинации — от пневмококковой инфекции, сезонного гриппа, новой коронавирусной инфекции и т. д. Важно понимать, что «заинтересованность» легочной ткани в постковидном периоде сохраняется на значительное время. Ей требуется восстановление, поэтому нужно максимально защитить бронхолегочную систему пациента.

У роста температуры после COVID-19 могут быть разные причиныФото: Артем Устюжанин / E1.RUПоделиться

Почему нельзя себя жалеть после перенесенного COVID-19

— Несмотря на обилие клинических проявлений, постковидный синдром в подавляющем большинстве случаев успешно лечится, — объясняет медик. — При этом есть одна серьезная проблема: люди, отмечая даже небольшое недомогание, начинают себя ограничивать в физической активности. В результате толерантность (устойчивость. Прим. ред.) к физической нагрузке у них снижается еще больше.

Реабилитация, которая начинается еще в отделении реанимации, должна продолжаться и после выписки. То же самое касается и пациентов, которые перенесли инфекцию в легкой или среднетяжелой форме. Всем им очень важно двигаться — это способствует нормализации дыхательной активности легких и восстановлению мышечного тонуса.

Почему после ковида повышается температура

— Скачкообразное или постоянное повышение температуры до субфебрильного уровня (до 37,5 °C. — Прим. ред.) в течение одной-двух недель после острой фазы новой коронавирусной инфекции может быть не связано с поражением легких или воспалительными процессами в других органах, — говорит Алексей Кривоногов. — Такой подъем температуры может говорить о нарушении работы вегетативной нервной системы.

При этом наш эксперт отмечает, что стойкий рост температуры выше 38 °C после COVID-19 может быть вызван более серьезными причинами.

Первая — это различные бактериальные осложнения, от пневмонии до других возможных инфекций.

Вторая — развитие миокардита (воспаления сердечной мышцы), который также может проявлять себя слабостью, потливостью, сердцебиением или «перебоями» в работе сердца. Этот диагноз требует серьезного обследования и лечения у кардиолога.

Третья — это обострения имевшихся ранее заболеваний. В их числе — воспаление почек (например, пиелонефрит), болезни суставов, аутоиммунные заболевания и т. д.

Поэтому списывать длительную лихорадку только на ковид неверно. Тем более неправильно самостоятельно назначать себе дополнительные курсы антибиотиков и бесконтрольно принимать противовоспалительные препараты. Всё это может замаскировать симптомы болезни и затруднить диагностику.

После ковида нужно максимально защитить бронхолегочную системуФото: Артем Устюжанин / E1.RUАлексей Кривоногов руководит мультидисциплинарной бригадой врачейФото: МО «Новая больница»У роста температуры после COVID-19 могут быть разные причиныФото: Артем Устюжанин / E1.RU

Врач рассказал, что делать, если после COVID-19 не падает температура

https://ria.ru/20211106/temperatura-1757843793.html

Что делать, если после коронавируса не падает температура

Врач рассказал, что делать, если после COVID-19 не падает температура — РИА Новости, 06.11.2021

Что делать, если после коронавируса не падает температура

У выздоровевших от COVID-19 людей температура тела может превышать 36,6 градуса еще несколько месяцев. Как на это нужно реагировать, рассказал в интервью радио… РИА Новости, 06.11.2021

2021-11-06T02:08

2021-11-06T02:08

2021-11-06T02:08

распространение коронавируса

общество

коронавирус covid-19

александр будик

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/06/16/1738076700_0:98:1920:1178_1920x0_80_0_0_e9660b04722f39b6417b187b45c8fe0f.jpg

МОСКВА, 6 ноя — РИА Новости. У выздоровевших от COVID-19 людей температура тела может превышать 36,6 градуса еще несколько месяцев. Как на это нужно реагировать, рассказал в интервью радио Sputnik врач-нейрофизиолог Александр Будик.Когда температура поднимается во время болезни – это нормальное явление, оно показывает, что организм борется с инфекцией. Если же отклонение фиксируется после выздоровления, то это может быть признаком дисбаланса в организме, считает нейрофизиолог.По его словам, после COVID-19 повышение температуры до 37-37,5 градуса может сохраняться довольно долго. Такую картину, отметил врач, дают многие вирусные заболевания, после них температура может оставаться повышенной в течение нескольких недель или даже месяцев.Повышение температуры до 37,5 градуса само по себе не несет опасности. Но если оно сопровождается и иными симптомами, то это повод для похода к врачу, продолжил нейрофизиолог.»Например, если у человека повышенная температура и болит голова или болят суставы, то это знак, что надо обратиться к врачу. Если к незначительному повышению температуры добавляются необъяснимые боли, то это повод обратиться к врачу», – добавил Александр Будик в интервью радио Sputnik.Если дополнительных симптомов нет, то температура, по словам врача, через какое-то время должна нормализоваться.

https://ria.ru/20211105/koronavirus-1757820211.html

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2021

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/06/16/1738076700_110:0:1811:1276_1920x0_80_0_0_670cf5c8984298bc7dfd58886acbf774.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

общество, коронавирус covid-19, александр будик

Врач рассказал, что делать, если после COVID-19 не падает температура

МОСКВА, 6 ноя — РИА Новости. У выздоровевших от COVID-19 людей температура тела может превышать 36,6 градуса еще несколько месяцев. Как на это нужно реагировать, рассказал в интервью радио Sputnik врач-нейрофизиолог Александр Будик.

Когда температура поднимается во время болезни – это нормальное явление, оно показывает, что организм борется с инфекцией. Если же отклонение фиксируется после выздоровления, то это может быть признаком дисбаланса в организме, считает нейрофизиолог.

По его словам, после COVID-19 повышение температуры до 37-37,5 градуса может сохраняться довольно долго. Такую картину, отметил врач, дают многие вирусные заболевания, после них температура может оставаться повышенной в течение нескольких недель или даже месяцев.

«Банальные ОРВИ и грипп могут давать такую симптоматику. После заболевания COVID-19 тоже возможно нарушение терморегуляции – как проявление вегетативного дисбаланса», – пояснил Александр Будик.

Повышение температуры до 37,5 градуса само по себе не несет опасности. Но если оно сопровождается и иными симптомами, то это повод для похода к врачу, продолжил нейрофизиолог.

«Например, если у человека повышенная температура и болит голова или болят суставы, то это знак, что надо обратиться к врачу. Если к незначительному повышению температуры добавляются необъяснимые боли, то это повод обратиться к врачу», – добавил Александр Будик в интервью радио Sputnik.

Если дополнительных симптомов нет, то температура, по словам врача, через какое-то время должна нормализоваться.

5 ноября 2021, 19:15Распространение коронавирусаУченые нашли способ защититься от тяжелой формы COVID-19

Как отличить ОРЗ, ОРВИ, аллергию и коронавирус COVID-19 : ПОЗИТИВМЕД

Что скрывается за аббревиатурой ОРЗ

ОРЗ в быту означает состояние, при котором есть насморк, кашель, боль в горле и повышение температуры тела. ОРЗ расшифровывается как острое респираторное заболевание.

Острое — значит, возникающее внезапно или в короткий промежуток времени.

Респираторное — имеется ввиду место локализации воспаления, дыхательные пути.

Заболевание — означает наличие болезни у конкретного человека.

Но стоит учитывать, что заболеваний имеющих схожие симптомы как при ОРЗ, десятки и сотни. Соответственно столько же и будет диагнозов. И поэтому ОРЗ — это термин, объединяющий в себе многочисленные болезни со схожими симптомами. Но требующие различный подход к лечению каждого из них.

Наиболее частыми причинами ОРЗ являются:

  1. Вирусы — тогда ставится диагноз ОРВИ
  2. бактерии
  3. переохлаждение / простуда
  4. аллергия

Расскажу подробнее, как отличить одно от другого.

ОРЗ и ОРВИ — в чем разница

99% всех ОРЗ — это именно ОРВИ. 99% ОРВИ не требует лечения в больницах и не требует использования каких-либо специфических препаратов, воздействующих на вирус. Лечение ОРВИ почти всегда симптоматическое, т.к. нет дешевых и эффективных противовирусных средств. А те что известны имеют свои показания и противопоказания. Да и особой нужды в них нет, поскольку человеческий организм при создании определенных условий и небольшой помощи успешно справляется с респираторными вирусами.

Известно более 200 видов вирусов вызывающих симптомы ОРВИ. Наиболее распространены вирусы гриппа (А,В,С, птичий, свиной), парагриппа, аденовирусы, коронаровирусы, риновирусы, РС-вирусы, энтеровирусы, ВЭБ и др. Эти возбудители вызывают более или менее схожие симптомы. Поэтому они объединены в ОРВИ, т.е. источником инфекции является больной человек.

Симптомы ОРВИ:

  • Повышение температуры тела
  • Озноб
  • Головная боль
  • Общее недомогание
  • Потеря аппетита
  • Поражение слизистой дыхательных путей: ринит, тонзиллит, фарингит, ларинготрахеит, бронхит, конъюнктивит
  • Также могут возникать бактериальные осложнения в виде синусита, отита, пневмонии

Пару слов о том, сколько держится температура при ОРВИ. Обычно симптомы ОРВИ сохраняются 3-7дней. Инкубационный период 1-10дней. Период заразности 3-5-7дней. Как говорилось выше, в большинстве случаев лечение ОРВИ — симптоматическое и проводится в домашних условиях. Но отсутствие улучшений на 4-ый день, а также, если температура при ОРВИ сохраняется выше нормальной на 7-й день — это однозначный повод для встречи с врачом.

Про бактериальные ОРЗ и про антибиотики

Часто пациенты формулируют вопрос про «бактериальные ОРВИ». Но учитывая вышесказанное — правильнее говорить не бактериальные ОРВИ, а бактериальные ОРЗ. Т. к. мы уже выяснили, что ОРВИ — это вирусное ОРЗ и к бактериям отношения не имеет.

Каковы симптомы бактериального ОРЗ:

  • Вялость
  • Слабость
  • Снижение аппетита
  • Несоответствие выраженности конкретных симптомов реальной тяжести состояния. Т.е. вроде бы и температура тела невысокая, насморк несильный и кашель нечастый, а лежит пластом.
  • Жажда. При ОРВИ она наблюдается редко, но жажда в сочетании с бледностью кожи — признак бактериальной инфекции
  • Боль. В принципе, не характерна для ОРВИ, поэтому если вдруг сильно заболело ухо, горло, нос, лоб, и это очень волнует ребенка, то это всегда повод, чтобы подумать о бактериальной инфекции. Например, при ангине симптомы тонзиллита есть, а признаков ОРВИ нет.
  • Гной. Гнойная мокрота, гнойные выделения из носа, гнойные налеты на миндалинах – признак бактериальной инфекции.
  • Кашель. Частый, как правило сухой, не приносящий облегчения, усиливающийся при физической нагрузке и плаче, с отдышкой.
  • Лихорадка. При бактериальной ОРЗ характерно, что при повышении температуры тела практически не помогают или очень ненадолго помогают жаропонижающие средства.
  • Лимфаденопатия. Увеличение и болезненность подчелюстных и переднешейных лимфоузлов.

В случае бактериального ОРЗ лечение назначает врач. Обычно, это антибиотики. Ни в коем случае не стоит заниматься самолечением. Так как неверно выбранный медикамент может только усугубить ситуацию.

ОРЗ при переохлаждении или простуде

Верхние дыхательные пути являются источником жизни для огромного количества разных микроорганизмов (мирные, патогенные и условно-патогенные), прежде всего бактерий. Их существование и размножение сдерживается и регулируется силами местного иммунитета. В результате резкого переохлаждения происходит резкий спазм сосудов и нарушается кровоснабжение слизистой оболочки дыхательных путей, что приводит к снижению активности местного иммунитета, из-за чего активизируется патогенная и условно-патогенная флора т.к. нет сдерживающих сил.

Насколько сильно будут или вовсе не будут выражены симптомы простуды — зависит от индивидуальных особенностей каждого конкретного человека. Например:

  • от количества и видового разнообразия патогенной и условно-патогенной флоры
  • насколько сильно произошел спазм сосудов и нарушилось кровоснабжение
  • состояние местного иммунитета до переохлаждения
  • длительность и интенсивность простудного фактора.

Т.е. признаки простуды у разных людей могут быть разной степени выраженности.

Принципиальная особенность простудных болезней — их незаразность. Ведь бактерии начали размножаться лишь потому, что ослаб местный иммунитет. Т.е. когда вы с ребенком сидели дома, и вдруг у него появился насморк и кашель, и при этом никто к вам в гости не приходил, можно, проанализировав ситуацию, понять что это-простуда. Простудиться сидя дома можно разными путями: окна были везде открыты, после купания недостаточно укутали, ребенок мог выпить/съесть холодного из холодильника и т.д.

Лечение простуды обычно является симптоматическим. Т.е. назначается доктором в зависимости от проявившихся симптомов.

Как отличить аллергию от ОРЗ

Традиционно аллергическая реакция возникает примерно так. Некое вещество извне — аллерген — при попадании в организм воспринимается нашим иммунитетом как чужеродный агент-антиген. В защиту от антигена, вырабатываются антитела. При повторном попадании этого же антигена в организм и его взаимодействие с уже выработанными антителами и возникает аллергическая реакция.

В зависимости от способа контакта с аллергеном выделяют разные типы аллергии:

  • аллерген можно съесть, что провоцирует пищевую аллергическую реакцию
  • аллерген может вступить в контакт с кожей, тогда возникает контактная аллергия
  • аллерген может содержаться во вдыхаемом воздухе, что провоцирует аллергическую реакцию в слизистой дыхательных путей — респираторный аллергоз, аллергический ринит, аллергический риносинусит и т.д.

С ОРЗ часто путают именно третий вариант аллергии. Как же отличить аллергию от ОРЗ? Принципиальной диагностической особенностью респираторного аллергоза являются выраженные симптомы поражения респираторного тракта, когда есть насморк и/или кашель, проявляющиеся очень быстро, но при этом отсутствуют признаки общего инфекционного токсикоза (не нарушено общее самочувствие, сохранена активность, сохранен аппетит, нормальная температура тела).

Лечение при аллергическом рините, риносинусите, аллергозе и пр. назначает врач. Доктор подберет подходящие противоаллергические препараты и даст необходимые рекомендации. По возможности постарайтесь избавиться от источника аллергена.

Как отличить ОРВИ от коронавируса

О том, как отличить ОРЗ и ОРВИ я рассказала выше. А как же отличить ОРВИ от коронавируса? COVID-19 — напасть, которая, словно цунами, неожиданно обрушилась на население нашей страны этой весной, заставило даже самых равнодушных жителей этой планеты заглянуть в интернет и поинтересоваться, каковы же симптомы коронавируса и как отличить его от обычного ОРЗ. Радует, что дети все же по статистике реже болеют коронавирусом.

Covid-19 чаще всего проявляется высокой температурой, сухим кашлем и затруднением дыхания. На сегодняший день всеми медиками рекомендацуется обратиться к врачу, если имеется хотя бы один из этих симптомов.

Температура и кашель, кроме COVID-19, также являются основными признаками бактериального ОРЗ или гриппа. А вот затруднение дыхания при этих заболеваниях встречается реже. Т.е. самое важное различие, которое наблюдается при коронавирусе и реже встречается при других ОРЗ – затруднение дыхания.

Приведу вам в помощь замечательную табличку, которая попалась мне в интернете

Когда нужно обращаться за медицинской помощью

При любом состоянии, не укладывающемся в привычную картину ОРЗ, рекомендуется обратиться к врачу. Если у больного ОРЗ, вдруг возникли симптомы:

  • потеря сознания,
  • судороги,
  • признаки дыхательной недостаточности (затрудненное дыхание,отдышка)
  • интенсивная боль где угодно, явно беспокоющая ребенка или взрослого
  • даже просто умеренная боль в горле при отсутствии насморка
  • умеренная головная боль в сочетании с рвотой
  • отечность шеи
  • сыпь — любая
  • температура тела выше 39 градусов, которая не снижается через 30минут после применения жаропонижающих средств
  • любое повышение температуры тела в сочетании с ознобом и бледностью кожи
  • обезвоживание — сухой язык, плач без слез, отсутствие мочи более 6 часов, рвота, отказ от питья.

Срочно обратитесь к врачу!

Напомню, что в клинике Позитивмед в Санкт-Петербурге можно сдать анализ на антитела к коронавирусу SARS-CoV-2

Меры профилактики ОРЗ

Профилактика ОРЗ помогает значительно снизить заболеваемость среди детей и взрослых. Одной из самых действующих мер является создание специфического иммунитета посредством вакцинации с учетом индивидуальны особенностей организма.

Постарайтесь поддерживать оптимальную влажность и температуру в доме.Частая влажная уборка помещений помогает поддерживать местный иммунитет. Обязательно регулярно проветривайте своё жилище.

В целом, следование рекомендациям профилактики ОРЗ, также станут профилактикой многих других заболеваний. Закаляйтесь в пределах разумного, занимайтесь спортом, соблюдайте диету, чаще гуляйте, ведите здоровый образ жизни и болезни отступят надолго, если не навсегда.

Здоровья вам и вашим малышам! А в случае недомоганий или возникновения вопросов — жду вас у себя на приеме в ПОЗИТИВМЕД.

Врач рассказала, в каком случае повышение температуры не является причиной для паники

Очередной выпуск программы «Скажите, доктор» посвятили теме «Профилактика и лечение ОРВИ». Понятно, что в случае заболевания важно как можно быстрее обратиться к врачу, чтобы вовремя начать лечение и избежать тяжёлых последствий.

Но что делать, если температура повышается ежедневно без симптомов простуды? И как быть, если после лечения антибиотиками человек продолжает чувствовать недомогание? Об этом и многом другом в очередном выпуске программы НТ «Скажите, доктор» рассказала терапевт и лор-врач Олеся Ким.

Одна из телезрительниц рассказала специалисту, что три дня назад у нее начало «гореть» лицо, а к вечеру температура поднялась до 37,3 градусов. По словам женщины, теперь температура скачет каждые полчаса. Иногда она опускается до 36.7 градусов, но через время вновь поднимается до 37.3.

«Нормальная человеческая температура у взрослого человека располагается на отметке от 36.3 до 37,2 градусов. Здесь пациент, возможно, рассказывает о физиологических скачках температурного режима человеческого тела. Просто она начала измерять температуру и контролировать её. Температура тела может меняться в утреннее время, так как она немного снижается после сна. Если говорить про небольшое увеличение температуры, то это может произойти после занятий спортом или приема горячего душа», – заявила врач.

По словам Олеси Ким, более высокая температура может являться сигналом серьезных заболеваний:

«Если температура идет вверх и переходит в субфебрильную фазу от 37 до 38 градусов, то это уже свидетельствует о каком-либо вирусном заболевании. Также это может быть связано с проблемами на гормональном фоне или же хроническими заболеваниями, которые прогрессируют в организме».

В этом случае специалист посоветовала обратиться к врачу, чтобы тот провел необходимые исследования и выявил причину повышения температуры.

Другая телезрительница рассказала специалисту, что пропила курс антибиотиков, но теперь температура не падает ниже 38 градусов. Сбить ее получается только таблетками, но только до отметки 37,5 градусов.

«Скорее всего, курс антибактериального препарата пациентка назначила сама себе. Дело в том, что в первые дни течения такого заболевания, как ОРВИ, антибактериальные препараты не назначаются. В этот период специалист назначает противовирусные препараты, которые могут подавлять рост вирусных частиц, тем самым, снижая температуру. Повышенная температура чаще свидетельствует о вирусной интоксикации организма. Наш собственный организм выдает особые вещества — пирогены. Человек сам себя защищает от вирусных частиц. Поэтому температура до 38.5 градусов считается совершенно нормальной физиологической реакцией организма на патогенные микроорганизмы», – заявила Олеся Ким.

Врач отметила, что если температура повышается у ребенка или же пожилого человека с хроническими заболеваниями, то ее можно немного сбить до 37.7 – 37.8 градусов.

Смотрите программу «Скажите, доктор!», которую ведет Светлана Стерлигова:

← Поведение Станислава Черчесова удивило болельщиков

метод релаксации температурных скачков | химия

В химической кинетике: Измерение быстрых реакций

… этот метод называется методом температурного скачка или Т-скачка. Были разработаны методы повышения температуры крошечного реакционного сосуда на несколько градусов менее чем за 100 нс. Таким образом, этот метод не подходит для самых быстрых процессов, которые можно изучить с помощью флэш-фотолиза, но многие… \ n

Подробнее «,» url «:» Introduction «,» wordCount «: 0,» sequence «: 1}, «imarsData»: {«HAS_REVERTED_TIMELINE»: «false», «INFINITE_SCROLL»: «»}, «npsAdditionalContents»: {}, «templateHandler»: {«metered»: false, «name»: «INDEX»}, «paginationInfo «: {» previousPage «: null,» nextPage «: null,» totalPages «: 1},» seoTemplateName «:» PAGINATED INDEX «,» infiniteScrollList «: [{» p «: 1,» t «: 586715}] , «familyPanel»: {«topicLink»: {«title»: «метод релаксации скачка температуры», «url»: «/ science / temperature-jump-relax-method»}, «tocPanel»: {«title»: «Directory», «itemTitle»: «Ссылки», «toc»: null}, «groups»: [], «showCommentButton»: false, «fastFactsItems»: null}, «byline»: {«участник»: null, «allContributorsUrl»: null, «lastModificationDate»: null, «contentHistoryUrl»: null, «warningMessage»: null, «warningDescription»: null}, «citationInfo»: {«участники»: null, «title»: «скачок температуры техника релаксации »,« lastModification »: n ull, «url»: «https: // www.britannica.com/science/temperature-jump-relaxation-technique»},»websites»:null,»lastArticle»:false}

Узнайте об этой теме в этих статьях:

основная ссылка

  • В феномене релаксации: эксперимент с температурным скачком

    Чтобы подвести итог и прояснить это обсуждение, будет проведен релаксационный эксперимент с температурным скачком — важный метод в исследованиях релаксации. описано.В этом методе равновесие системы нарушается внезапным изменением температуры и наблюдением концентраций реагентов в зависимости от…

    Подробнее

скорости реакции

  • В химической кинетике: Измерение быстрых реакций

    … этот метод называется методом температурного скачка или Т-скачка. Были разработаны методы повышения температуры крошечного реакционного сосуда на несколько градусов менее чем за 100 нс. Таким образом, этот метод не подходит для самых быстрых процессов, которые можно изучить с помощью импульсного фотолиза, но многие…

    Подробнее

Temperature Jump — обзор

14.3.3 Кинетика сорбции

Помимо термодинамических характеристик, еще одна важная особенность, которую необходимо учитывать при правильной конструкции STES, представлена ​​кинетикой сорбции. Действительно, он предоставляет информацию о скорости процесса сорбции / десорбции, что, в свою очередь, влияет на удельную мощность конечной системы.

Как правило, кинетику сорбции можно исследовать, применяя различные методики, которые предоставляют информацию, относящуюся либо к самой рабочей паре, либо ко всем кинетическим характеристикам сорбирующего реактора.

Подход изотермических дифференциальных стадий (IDS) обычно используется для получения подробной информации о кинетике сорбирующего материала. Действительно, применяя небольшие скачки давления сорбата к небольшому количеству сорбирующего материала (т.е. нескольким миллиграммам), количество выделяемого тепла ограничивается, что позволяет рассматривать процесс как изотермический. Соответственно, кинетическая эволюция может быть адаптирована с помощью аналитического решения для изотермических кинетических процессов сорбции (Ruthven, 1984), которое обеспечивает эффективный коэффициент диффузии сорбата внутри материала сорбента, представляющий основной параметр для оценки кинетики сорбции внутри твердого сорбента. .Пример применения IDS приведен для рабочей пары силикагель RD / вода на рис. 14.12.

Рисунок 14.12. Временная эволюция веса и давления в условиях кинетических испытаний IDS (Аристов и др., 2006).

Несмотря на полезные данные, которые можно получить из IDS, практическое применение полученных коэффициентов диффузии ограничено, если целью является оценка общей кинетики сорбции в реакторе STES. Действительно, условия эксплуатации, смоделированные с помощью IDS, действительно далеки от реальных, в которых работает STES.По этой причине были предложены различные кинетические методики измерения, известные как подходы с большим скачком давления (LPJ) и большим скачком температуры (LTJ) (Sapienza et al., 2018).

Подход LPJ применяется к сорбирующему материалу: скачок / падение давления оценивают кинетику происходящего процесса сорбции. Типовая установка схематически представлена ​​на рис. 14.13. Во время испытания сорбирующий материал контактирует с теплообменником, чтобы поддерживать его температуру как можно более постоянной.В принципе, подход аналогичен подходу IDS, но в этом случае скачок / падение давления намного больше, и количество анализируемого сорбирующего материала имеет значение (например, несколько граммов), соответственно, даже если он вставлен внутрь теплообменника, процесс далек от изотермических условий. По этой причине, чтобы получить полезные параметры для моделирования конфигураций STES в реальном масштабе, необходимо использовать сложные численные модели тепломассопереноса, чтобы соответствовать экспериментальным изменениям (Frazzica et al., 2014б). Более того, даже если он ближе к реальным условиям эксплуатации STES по сравнению с IDS, подход LPJ страдает от большого приближения, связанного с тем фактом, что процессу сорбции способствует изменение давления, а не изменение температуры, что является типичным один применяется в СТЭС.

Рисунок 14.13. Схема аппарата LPJ (Frazzica et al., 2014b).

Чтобы лучше моделировать работу STES и других термоуправляемых сорбционных устройств, была разработана концепция LTJ (Аристов и др., 2008). Схематический вид системы LTJ представлен на рис. 14.14. В этом случае образец подвергается внезапному скачку / падению температуры в изобарных рабочих условиях, таким образом измеряя кинетику сорбции в реалистичных границах. Этот подход может работать как волюметрически (Аристов и др., 2008), так и термогравиметрически (Сапиенца и др., 2014). В первом случае количество сорбирующего материала для тестирования должно быть максимально ограниченным (т.е. несколько миллиграммов), поскольку для воспроизведения реальных граничных условий этап сорбции / десорбции должен быть квазиизобарическим.В этой конфигурации небольшое снижение давления оценивается и преобразуется в изменение поглощения. Иными словами, термогравиметрический напрямую измеряет вес тестируемой системы; таким образом, масса сорбирующего материала, который может быть проверена, зависит от метрологических характеристик используемого датчика нагрузки (например, полной шкалы, чувствительности, разрешения). Основным преимуществом гравиметрической версии является возможность тестирования небольших, но представительных реакторов STES, что позволяет оценить не только кинетику сорбирующего материала, но и всю систему в целом, полностью учитывая характеристики тепломассопереноса.

Рисунок 14.14. Схема аппарата LTJ (Sapienza et al., 2017).

Интересно, что несколько исследований, проведенных с помощью этой установки, показали, что независимо от конфигурации реактора и рабочих пар, эволюция кинетики сорбции может быть хорошо описана с помощью экспоненциальной функции (Gordeeva et al., 2014; Graf et al. ., 2016; Сантамария и др., 2014; Бранкато и др., 2019). Таким образом, кинетические характеристики сложных конфигураций можно легко сравнить, задав характерные времена, представляющие время, необходимое для достижения эталонной степени преобразования.Были предложены некоторые модификации методов LTJ, такие как калориметрический LTJ и термический LTJ. В калориметрическом LTJ (Tierney et al., 2016) используется термоэлектрический нагреватель, расположенный под измеряемыми образцами, вместо использования теплообменника или резервуара с водой для обеспечения тепловых уровней для процессов сорбции. Преимущество в этом случае заключается в возможности уменьшения нестабильности и неопределенностей в температуре образца, но, с другой стороны, только испытание малых образцов (т.е.е., возможно несколько граммов). Результаты измерений сравнивались с гравиметрическими измерениями на той же рабочей паре, и было обнаружено хорошее согласие между двумя методологиями.

Тепловой метод LTJ, представленный в (Токарев, Аристов, 2017), основан на прямом измерении разницы температур на входе и выходе тестируемого участка теплообменника после быстрого падения / скачка температуры на входе. Таким образом, можно воспроизвести рабочие условия, типичные для STES, что позволяет характеризовать также характерные части реакторов адсорбера.По сравнению с другими методами LTJ, тепловой LTJ немного теряет в точности в определении характерного времени процесса, но намного проще в реализации и дает информацию о тепловом потоке, что недоступно в других версиях LTJ.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Лазер-индуцированный скачок температуры Инфракрасные измерения сворачивания РНК

Abstract

Зондирование образца с помощью инфракрасной спектроскопии после скачка температуры, индуцированного лазером, является мощным методом контроля кинетики быстрой релаксации.Здесь мы описываем, как этот подход используется для изучения кинетики сворачивания РНК. Мы начнем с краткого обзора инфракрасных спектральных свойств РНК в области 1500–1800 см, –1 . Инфракрасные переходы в этой области напрямую связаны с валентными колебаниями двойной связи и кольцевыми модами нуклеотидных оснований. Когда РНК претерпевает конформационное изменение, изменяется локальное окружение нуклеотидов. Следовательно, изменения соответствующего инфракрасного спектра связаны со структурными изменениями.Экспериментально температура используется для систематического изменения структуры РНК. Когда короткий лазерный импульс используется для быстрого повышения температуры образца, за происходящими структурными изменениями можно следить в режиме реального времени. В этой статье мы обсуждаем экспериментальные методы, включая подготовку образцов, приборы и анализ данных. В заключение приведем несколько экспериментальных примеров, которые подчеркивают полезность этого метода.

1. Введение

Большинство типов оптической спектроскопии проявляют чувствительность к молекулярной структуре.Например, спектроскопия поглощения и флуоресценции в УФ-видимом диапазоне обычно используется для отслеживания сворачивания и разворачивания РНК. Однако инфракрасная (ИК) спектроскопия отличает ее структурная специфика. Каждый из УФ-видимых и флуоресцентных спектров обычно отображает одну широкую полосу, интенсивность которой сообщает о конформационных изменениях РНК. Напротив, в ИК-спектре видны многочисленные полосы поглощения, охватывающие широкий диапазон волновых чисел от 800 до 1800 см -1 . Каждый переход обусловлен определенными структурными частями в РНК.В совокупности существует ИК-спектральная сигнатура почти для каждой молекулярной группы в молекуле РНК. В частности, молекулярные группы, участвующие в спаривании и укладке оснований (C = O, C = N и C = C индивидуальных оснований), демонстрируют сильное ИК-поглощение в диапазоне 1500–1800 см, –1 . При изменении структуры РНК изменяется локальное окружение вовлеченных групп (например, ионная сила, близость к донорам или акцепторам водородных связей и т. Д.). Явные изменения в соответствующем результате ИК-спектра (изменения интенсивности, сдвиги полос и т. Д.), которые отражают местные изменения окружающей среды, с которыми столкнулась эта группа. Сигнал от каждого отдельного ИК-диапазона предоставляет информацию, сопоставимую с той, что находится в УФ-видимом спектре или спектре флуоресценции. Разница в том, что в ИК-спектре есть несколько сигналов, каждый из которых сообщает о немного отличающемся структурном компоненте РНК.

Полезность ИК-спектроскопии иллюстрируется следующей аналогией. В эксперименте FRET (флуоресцентный резонансный перенос энергии) флуоресцентный донор присоединяется к одному концу РНК, а акцептор присоединяется к другому концу.Сила сигнала флуоресценции зависит от расстояния между донором и акцептором. Складывание отслеживают, наблюдая за этим сигналом как функцией времени. Точно так же спектральные характеристики аналогов флуоресцентных оснований, замещенных в различных положениях вдоль цепи, можно использовать для отслеживания сворачивания. В обоих случаях результаты дают глобальный индикатор конформации РНК . Хотя можно сделать выводы, поведение немеченых остатков или остатков между парой FRET невозможно определить напрямую.Теперь представьте, что мы можем разместить «пары FRET» по всей длине олигомера РНК или одновременно пометить все остатки (игнорируя тот факт, что это может сильно повлиять на структуру). Кроме того, предположим, что перекрытие между отдельными спектральными сигналами незначительно, чтобы каждый можно было различить. Теперь, когда РНК сворачивается, мы не только знаем, когда концы приближаются друг к другу, но у нас также есть индикаторы, которые говорят нам, когда близость других остатков изменяется. Объединение объединенных данных дает очень подробную картину структурного развития.Необходимость множественных зондов для полного картирования энергетического ландшафта малых РНК была признана в нескольких недавних статьях (Ballin et al. , 2007; Hyeon and Thirumalai, 2008; Ma et al. , 2008). В другой статье делается ссылка на гипотетический эксперимент по тушению «двойного флуорофора», в котором один флуорофор помещается в петлю, а другой — рядом со стержнем (Nivon and Shakhnovich, 2004). Поскольку собственные полосы ИК-поглощения нуклеиновых кислот являются структурно специфичными (описанными в разделе 2), мы можем достичь желаемого эффекта без добавления неродных зондов, которые могут в конечном итоге изменить структуру.

Экспериментально температура обычно используется для систематических структурных изменений РНК. Чтобы проиллюстрировать это, рассмотрим тепловое равновесие между совокупностью свернутых и развернутых молекул РНК, F ⇌ U (пока игнорируем существование промежуточных продуктов), регулируемое константой равновесия K eq = c U / c Ф . Можно показать, что изменение концентрации складчатой ​​популяции связано с изменением температуры соотношением (Bernasconi, 1976)

−ΔcF = Keqc0ΔHRT2 (1 + ΔKeq) 2ΔT

(17.1)

Здесь c 0 — общая концентрация c F + c U , Δ H — энтальпия разворачивания, а R — газовая постоянная. Соответственно, повышение температуры на на приведет к уменьшению на на свернутой совокупности, при условии, что энтальпия развертывания является как ненулевой, так и положительной. В этом уравнении подразумевается, что изменения концентрации пропорциональны ключевым полосам ИК-поглощения.Таким образом, уравнение. (17.1) обеспечивает связь между структурой РНК и наблюдаемым ИК-спектром. Это уравнение также показывает, что наибольшие изменения будут наблюдаться при изучении температур, близких к температуре плавления ( T м ) (т.е. K ≈ 1).

Если температура изменяется внезапно (то есть во время «скачка температуры»), то становится возможным контролировать Δ c F (или Δ c U ) как функцию времени. Для этого простого примера с двумя состояниями концентрация как функция времени будет показывать экспоненциальное поведение

(мы использовали Δ c , а не Δ c F или Δ c U , чтобы быть более общим ).Экспериментально полученная величина — время релаксации, τ = ( k F + k U ) −1 . Ни скорость складывания, k F , ни скорость разворачивания, k U , не определяются напрямую . Строго говоря, эксперимент измеряет «релаксацию» РНК, а не сворачивание или разворачивание.

2. Инфракрасные спектральные свойства РНК

2.1. Чувствительность к структуре

ИК-спектроскопия чрезвычайно чувствительна к конформационным изменениям РНК и последовательностям оснований.Это иллюстрируется использованием ИК-спектров двух разных тетрапетлей РНК. Нижняя панель показывает ИК-спектры 5′-gcUGCGgc-3 ‘(«HP G »), а верхняя панель соответствует 5′-gcUCCGgc-3′ («HP C »). (Основания, написанные в верхнем регистре, указывают на непарные основания петли, а в нижнем регистре — на основания, составляющие основу.) В каждом из них пунктирная линия представляет собой ИК-спектр для развернутого олигонуклеотида (полученного при T T м ), а сплошная линия соответствует соответствующей складчатой ​​конформации (получено при T T м ).Спектральные изменения, которые развиваются по мере складывания шпилек, существенны. Более того, несмотря на различие только одним основанием в петле, складчатые спектры для каждой шпильки очень разные (это будет объяснено позже). Для сравнения: УФ-видимые спектры или спектры флуоресценции одних и тех же двух шпилек будут практически неразличимы независимо от того, сложены они или развернуты. Это пример структурной чувствительности, обеспечиваемой ИК-спектроскопией.

Равновесные FTIR-спектры двух тетрапетлей РНК.Последовательности указаны на рисунках. Основания, написанные в верхнем регистре, — это непарные основания, найденные в цикле, а написанные в нижнем регистре — это основания, найденные в основе. Пунктирные линии — спектры развернутой РНК, сплошные линии — спектры свернутой формы. Обратите внимание на сходство между двумя развернутыми спектрами и различия между развернутыми спектрами .

Поскольку ИК-спектр молекулы РНК имеет множество особенностей, ИК-спектроскопия не ограничивается только определением свернутой фракции.В зависимости от волнового числа перехода ИК-спектроскопия может отличить пары оснований A · U от пар оснований G · C, а также более сложные схемы спаривания оснований, обнаруженные в тройных спиралях (Banyay et al. , 2003; Brauns and Dyer, 2005). Точно так же взаимодействия стекирования оснований можно отличить от взаимодействий спаривания оснований. Было даже показано, что транспортные РНК разных видов можно отличить по их ИК-спектрам (Thomas, 1969).

2.2. Спектральные отнесения

ИК-спектры РНК обладают полезным свойством, которое можно использовать для облегчения спектральной интерпретации, а также для более ясной иллюстрации спектральных отнесений.Когда полностью развернул , ИК-спектр молекулы РНК примерно равен сумме вкладов составляющих ее нуклеотидов. Например, ИК-спектр развернутого HP C будет примерно равен A UMP + 3 A GMP + 4 A CMP . показывает ИК-спектры четырех мононуклеотидов и предоставляется в качестве наглядного пособия для читателя для описания следующих спектральных отнесений.

Равновесные FTIR-спектры четырех нуклеотидных оснований. Назначения полос приведены в тексте.

Следующие ниже спектральные характеристики ИК-спектров взяты из тех же источников или из нашей собственной работы (Banyay et al. , 2003; Brauns and Dyer, 2005). Между 1678 и 1689 см -1 представляет собой переход из-за участка C6 = O6 гуанина, который уменьшается по интенсивности и сдвигается в красный цвет при дуплексном взаимодействии с цитозином. Существует сильная полоса поглощения ~ 1655 см -1 , которая связана с отрезком C4 = O4 урацила, интенсивность которого уменьшается, когда он образует пару оснований с аденином.В районе ~ 1650 см. –1 находится переход, приписываемый участку цитозина C2 = O2. Эта полоса смещается в красный цвет и уменьшается по интенсивности при включении в пару оснований. В области между 1620 и 1632 см -1 преобладает сильный узкий переход, обусловленный кольцевыми колебаниями C = N и C = C аденина. Эта полоса синего цвета смещается и уменьшается по интенсивности при соединении оснований. При ~ 1525 см -1 представляет собой кольцевую вибрацию цитозина в плоскости, интенсивность которой резко снижается при дуплексном взаимодействии с гуанином.Около ~ 1566 см. -1 — это переход, который обусловлен кольцевым колебанием C = N гуанина с вкладами от комбинации C6 = O6, C5 – C6 и C4 = C5 растяжений (все гуанин). Около ~ 1584 см -1 находится дополнительная очень слабая кольцевая вибрация цитозина в плоскости. Наконец, второе колебание C = N гуанина находится между 1575 и 1590 см -1 , которое уменьшается при соединении оснований. В некоторой степени все эти переходы также чувствительны к взаимодействиям стэкинга оснований, в частности к колебаниям кольца.

Предыдущие назначения могут использоваться для интерпретации спектров, показанных на. В развернутом состоянии межосновные взаимодействия незначительны, а спектральные различия между двумя шпильками связаны исключительно с составом основы. Следовательно, небольшие различия между развернутыми спектрами, показанными на, просто потому, что HP G имеет больше гуанина и меньше цитозина. Точно так же HP C содержит больше цитозина и меньше гуанина. Однако в сложенном состоянии межосновные взаимодействия многочисленны, и структурные различия между шпильками проявляются в спектрах.

2.3. Термодинамика

График зависимости поглощения при определенном волновом числе от температуры дает кривую плавления. Подгоняя кривые к математической модели, можно определить температуру плавления и другие термодинамические параметры. В пределе равновесия сворачивание проявляет двухуровневое поведение, и доля развернутой части f U при любой температуре связана с поглощением на

fU = A (T) −AUAF − AU

(17,3)

где A U — это поглощение развернутой РНК, а A F — поглощение свернутой РНК.Уравнение (17.3) представляет собой феноменологическую модель, описывающую температурную зависимость поглощения. Уравнение (17.3) связано с константой равновесия соотношением

Константа равновесия может быть записана в терминах свободной энергии Гиббса согласно

Наконец, энтальпия разворачивания Δ H и температура плавления T м получены из температурной зависимости энергии Гиббса, заданной уравнением Гиббса-Гельмгольца

ΔG (T) = Δ (T) (1 − TTm) + ΔCp (T − Tm − TlnTTm)

(17.6)

Уравнение (17.6) также позволяет измерить изменение теплоемкости Δ C p между сложенным и развернутым состояниями. Комбинируя предыдущие соотношения, кривые необработанного плавления подходят непосредственно к

A (T) = AU + (AF − AU) e − ΔG (T) / RT1 + e − ΔG (T) / RT

(17,7)

В этом выражении A U , A F , Δ H ( T ), Δ C p и T m — все параметры подгонки.После того, как необработанные данные подобраны, кривые могут быть «нормализованы» для сравнения путем преобразования данных оптической плотности во фракции, развернутые с использованием уравнения. (17.3). Примеры показаны в.

Кривые плавления указанных РНК. Все данные были нормализованы путем их преобразования в развернутую дробь f U с использованием уравнения. (17.3).

Определение Δ C p из экспериментов по оптическому плавлению требует дальнейшего обсуждения. В то время как калориметрические методы измеряют теплоемкость напрямую, спектроскопические данные соответствуют модельной функции, которая включает Δ C p в качестве подгоночного параметра.Наложение модели с двумя состояниями на систему с двумя состояниями является потенциальным источником ошибки. Один из способов «обойти» это — сделать предположение, что Δ C p пренебрежимо мало, и просто проигнорировать это. Хотя это часто делается, это не полностью оправдано (Mikulecky and Feig, 2004). Изменения в растворителе и электростатической среде при сворачивании РНК могут привести к различиям теплоемкости между двумя различными состояниями. Альтернатива — продолжить подгонку и принять возможность ошибки.В принципе, это предпочтительный выбор, поскольку ошибка, скорее всего, будет небольшой. Однако, как мы объясним в следующем разделе, это нужно делать осторожно.

Цель аппроксимации кривой — получить единичный набор подгоночных параметров, который однозначно описывает данные. Модель с завышенными параметрами может поставить под угрозу надежность подбора и дать неоднозначные результаты. Одно из решений — уменьшить количество параметров, удерживая Δ C p постоянной на нуле.Как мы описали ранее, это может немного принести в жертву точности. Однако надежность подгонки существенно повышается, и общие выводы все же можно сделать. Это приемлемо при условии, что предположение сформулировано заранее. Таким образом были построены кривые плавления в нижней части. В качестве альтернативы можно использовать полную модель с дополнительными шагами, предпринимаемыми для обеспечения достоверности результатов. Пример показан в верхней части. Здесь эксперименты повторялись несколько раз (минимизация ошибки измерения), данные подбирались одновременно (с использованием глобального алгоритма подбора), а результаты подтверждались с помощью отдельного анализа разложения по сингулярным значениям.

На нижней панели представлены кривые плавления для HP C при 1574 см -1 (квадраты) и 1661 см -1 (кружки). На верхней панели показаны кривые плавления для тРНК phe при 1620 см -1 (квадраты) и 1661 см -1 (кружки). Для HP C (внизу) эти волновые числа соответствуют наложению оснований (1574 см -1 ; кольцевые колебания) и спариванию оснований (1661 см -1 ; спаривание G · C). Кривые плавления (и последующая термодинамика) практически идентичны.Однако позже будет показано, что кинетика при двух разных волновых числах сильно различается. Волновые числа для тРНК (вверху) соответствуют спариванию оснований A · U (1620 см, -1 ) и спариванию оснований GC (1661 см, -1, ). В отличие от олигонуклеотида, кривые плавления тРНК различны для каждого волнового числа. Различия были проверены с помощью гораздо более строгого анализа, который включал разложение по сингулярным числам (Браунс и Дайер, 2005). Различные кривые плавления означают, что термодинамика также различна.Мы смогли использовать этот результат в сочетании с кинетикой релаксации, чтобы предположить параллельный механизм сворачивания пути для тРНК.

2.4. Практические соображения

Из-за сильного ИК-поглощения H 2 O в области 1500–1800 см, –1 , все эксперименты необходимо проводить в растворах D 2 O. Тем не менее, даже в D 2 O в нашем интересующем спектральном окне наблюдается незначительное поглощение. Сильное остаточное поглощение требует использования тонких оптических путей.Было показано, что оптимальной является длина пути ~ 50 мкм (Вениаминов, Прендергаст, 1997). Однако для тонких путей дополнительно требуется, чтобы образец присутствовал в относительно высокой концентрации. Молярная абсорбционная способность РНК в области 1500–1800 см, –1 составляет примерно 700 M –1 см –1 (на нуклеотид). Эта оценка представляет собой среднее значение пикового поглощения для ряда образцов в диапазоне температур. Это только приблизительное значение, и к нему следует относиться соответствующим образом.Используя это значение, абсорбция от 0,01 до 0,1 требует концентрации мононуклеотида от ~ 3 до 30 м M . Что-нибудь ниже, и сигнал будет слишком слабым, чтобы быть практичным. С другой стороны, следует избегать более высоких концентраций, поскольку это увеличивает вероятность образования димера (или агрегации в целом). Особенно это касается олигонуклеотидов.

3. Экспериментальные методы

3.1. Образцы и подготовка образцов

Из практических соображений образцы сначала готовят в растворах H 2 O, а затем дейтерируют перед проведением экспериментов.Всегда используется деионизированная вода высокой чистоты. Буфер выбирается с той лишь оговоркой, что он не влияет на ИК-спектр РНК. Обычно мы используем фосфатный или трис-буфер при pH 7,2 (после дейтерирования раствор становится немного более щелочным с p D = ~ 7,6 при 25 ° C). В зависимости от характера эксперимента используются буферные концентрации в диапазоне 1–100 мМ. Дополнительные соли (например, Na + , Mg 2+ ) также могут быть добавлены в соответствии с конкретным экспериментом. 1 Обычно готовят два буфера: первичный (содержащий 0,1 м ЭДТА M ) и вторичный (без ЭДТА). Образцы готовят, сначала растворяя их в первичном буфере. ЭДТА используется для связывания прочно связанных двухвалентных катионов, таких как Mg 2+ . За этим следует диализ против вторичного буфера, который удаляет ЭДТА из образца (карбонилы ЭДТА могут влиять на спектры образца).

После завершения диализа известный объем лиофилизуют по крайней мере три раза против D 2 O для удаления лабильных протонов.Чтобы избежать загрязнения атмосферным H 2 O, образцы хранятся в импровизированном «перчаточном боксе» (ящик из оргстекла, продуваемый сухим воздухом, но не защищенный от окружающей среды). Эта мера предосторожности кажется более чем достаточной для защиты от заражения. Последним этапом является дегазация образца для защиты от кавитационных артефактов в экспериментах с температурным скачком (T-скачок) (поясняется позже). Мы дегазируем образец, помещая его в мягкий вакуум на срок до 15 минут с периодическим перемешиванием.

3.2. Образцы ячеек

Надежное сравнение двух экспериментальных методов (T-прыжок и равновесная FTIR) упрощается за счет использования одних и тех же ячеек для обоих. Ячейки имеют индивидуальную конструкцию и состоят из двух окон из CaF 2 , разделенных тефлоновой прокладкой. Прокладка определяет длину оптического пути, а также разделяет ячейку на два отсека; один для образца (РНК и буфер) и один для сравнения (только буфер). Таким образом, образцы и эталонные измерения получаются простым перемещением ячейки из стороны в сторону.Длина пути обычно составляет ~ 50 мкм. Окна CaF 2 помещены в медный корпус. Окна крепятся к корпусу медной накладкой. Относительные длины пути отсеков для образцов и эталонов определяются путем измерения интерференционных полос в пустой ячейке. Если изменение длины пути между каждой стороной ячейки превышает ± 0,1 мкм, ячейка разбирается и собирается до тех пор, пока не будет соблюден требуемый допуск. Затем ячейка устанавливается на медный блок большего размера, который соединен с циркуляционной водяной баней для контроля температуры.Температура ячейки поддерживается с точностью до ± 0,1 ° C.

3.3. ИК-Фурье-спектроскопия

Равновесные ИК-Фурье-спектры записываются с использованием коммерческого интерферометра быстрого сканирования, соединенного с камерой для образцов, изготовленной по индивидуальному заказу. Медный блок с прикрепленной к нему ячейкой устанавливается на управляемый компьютером трансляционный столик и помещается в камеру для образца. Перед снятием спектров камеру продувают сухим воздухом в течение минимум 3 ч. Столик с компьютерным управлением позволяет записывать спектры образцов и эталонов без ущерба для продувки отсека для образцов.Чтобы получить приемлемый уровень отношения сигнал / шум, для одного спектра может потребоваться до ~ 512 кодированных сканирований (256 сканирований для эталона и 256 сканирований для образца). Вместо того, чтобы записывать 256 сканирований для эталона, за которыми следуют 256 сканирований выборок, ячейка транслируется назад и вперед, так что выборочный и эталонный спектры записываются поочередно. Это сделано для минимизации любого долгосрочного дрейфа базовой линии. Температурно-зависимые спектры обычно записывают с шагом 1 ° C от 20 до 90 ° C. Написана программа LabVIEW, автоматизирующая сбор температурно-зависимых спектров.Это является преимуществом, учитывая, что для завершения полного профиля плавления может потребоваться до 18 часов.

3.4. Спектроскопия с временным разрешением

Спектроскопия с временным разрешением выполняется с использованием метода накачки-зонда, в котором короткоимпульсный лазер используется для инициирования T-скачка, а зондирующий лазер среднего ИК-диапазона используется для контроля переходного ИК-поглощения в образец. Схема всего инструмента показана на рис. Для наглядности показаны только ключевые компоненты. В нижеследующем описании будут описаны только эти компоненты.Непрерывный (CW) диодный лазер на солях свинца (PbSe) (выходная мощность <1 мВт), настроенный на конкретную колебательную моду молекулы РНК, исследует кратковременное поглощение образца. Ширина линии зондирующего лазера довольно мала (<0,5 см -1 ) и устанавливает спектральное разрешение экспериментов с временным разрешением. Расходящийся выходной сигнал диодного лазера собирается и коллимируется внеосевым параболическим зеркалом (OAP) с золотым покрытием (внеосевой угол 90 °; исходное фокусное расстояние 25,4 мм; эффективное фокусное расстояние 50.8 мм). Зеркало установлено на кинематической опоре, которая, в свою очередь, установлена ​​на трехосном линейном перемещающем устройстве для точного контроля юстировки. Диаметр коллимированного зонда составляет ~ 1 см, и он плотно фокусируется на образце (диаметром <100 мкм) с помощью второго OAP. Переданный пробный луч собирается третьим OAP и, наконец, фокусируется на детекторе MCT 20 МГц (время нарастания ~ 15 нс) с помощью четвертого OAP.

Схема спектрометра Т-скачка, описанного в тексте. OAP, внеосевое параболическое зеркало; ПБ — призма Пеллина – Брока; П — поляризатор; L, линза; S, образец; MCT, детектор теллурида кадмия ртути.Размер насоса относительно зонда в точке перекрытия показан в нижнем левом углу.

Импульс T-скачка генерируется комбинационным сдвигом основного выходного сигнала Nd: YAG-лазера с модуляцией добротности ( λ = 1,064 мкм) в рамановской ячейке длиной 1 м, заполненной H 2 при ~ 500 psi. Лазер работает с частотой повторения 10 Гц и имеет временную длительность импульса <10 нс (FWHM). Стоксов сдвиг в H 2 составляет 4155 см −1 . В результате первая линия Стокса находится на длине волны 1.9 мкм, который частично поглощается растворителем D 2 O и, таким образом, служит импульсом T-скачка. Призма Пеллина – Брока используется для отделения излучения 1,9 мкм от остаточного стоксова, антистоксова и остаточного излучения Рэлея. Импульс Т-образного скачка аккуратно перекрывается с зондирующим лазером на образце. Линза с большим фокусным расстоянием ( f = 250 мм) используется для регулировки диаметра импульса Т-образного скачка. В точке перекрытия диаметр насоса должен быть примерно в пять раз больше диаметра зондирующего луча (это показано в нижнем левом углу).Это обеспечивает равномерный нагрев всего объема зонда, а также сводит к минимуму влияние дрейфа луча.

D 2 O имеет полосу поглощения с центром около 1,9 мкм, которая соответствует первому колебательному обертону. D 2 O передает 75–80% импульса Т-образного скачка в ячейке с длиной пути 50 мкм. Энергия поглощенной фракции вызывает Т-образный скачок. Удельная теплоемкость D 2 O составляет 4,22 Дж · К −1 г −1 .Предполагая, что поглощение составляет 20%, а объем образца составляет 3,9 × 10 –5 мл, можно рассчитать, что для создания T-скачка на 20 ° C требуется ~ 20 мДж излучения 1,9 мкм. Поскольку тепловое уравновешивание водного растворителя происходит в пикосекундном масштабе времени, скачок температуры практически мгновенен, когда его вызывает лазерный импульс длительностью 10 нс. Следовательно, временное разрешение эксперимента ограничено шириной лазерного импульса и / или временем нарастания детектора (~ 20 нс для описываемого здесь прибора). Перед сбором данных с временным разрешением измеряется температурная зависимость прохождения зондирующего луча через эталонную сторону ячейки.Используя эти данные, переходное поглощение зонда через эталон служит внутренним термометром для измерения величины T-скачка.

Прибытие импульса Т-скачка определяет t = 0 и запускает сбор данных. Переходный профиль поглощения после Т-скачка обнаруживается детектором MCT, описанным выше. Результирующая форма сигнала от 0 до 1,4 мс оцифровывается с интервалами 5 нс 14-битным высокоскоростным дигитайзером (полоса пропускания 100 МГц, 200 мс с -1 ).Каждая форма волны обычно усредняется для ~ 3000 лазерных выстрелов в зависимости от мощности сигнала. Поглощение, зависящее от времени, рассчитывается для каждой пары образец / эталон из оцифрованного сигнала MCT. Наконец, оптическую плотность образца с временным разрешением получают путем вычитания эталонного поглощения из поглощения образца. показывает эту процедуру графически.

Пример кинетических данных. Оцифрованные сигналы MCT (вверху; серый — образец, черный — эталон) преобразуются в оптическую плотность (в центре), затем опорную оптическую плотность вычитают из оптической плотности образца (внизу).

Оцифровка сигналов с шагом 5 нс в течение почти 6 десятилетий дает более 260 000 точек данных. У этого есть два недостатка. Во-первых, это просто неудобно; чрезмерное количество точек данных является громоздким и затрудняет анализ и отображение данных. Второй недостаток имеет более важное последствие. Оцифровка большого промежутка времени с небольшими интервалами приводит к ненужной плотности точек в более длительные промежутки времени. Например, при t = 25 нс следующая точка будет на 30 нс. Однако при t = 500 мкс следующей точкой будет 500.005 мкс. Помимо непрактичности, последующий анализ данных в значительной степени ориентирован на более длительное время и может привести к неверным результатам. Мы обходим это путем интерполяции необработанных данных (например, данных на верхнем графике) с использованием логарифмической оси времени. 2 Используя этот метод, мы уменьшаем количество точек данных до 3004. Прежде чем продолжить, мы проверяем, что интерполированные данные точно перекрывают исходные данные.

Возможным осложнением, которое может возникнуть в эксперименте с Т-образным прыжком, является «кавитация» (Wray et al., 2002). Кавитация — это фотоакустическое явление, при котором в текучей среде могут образовываться пузырьки в ответ на быстрое повышение температуры. Когда это происходит, проявляются артефакты от 0,1 до 1 мкс, делая данные в этой области непригодными для использования. Наш опыт показывает, что кавитацию можно контролировать, избавляя ячейки образцов и растворов образцов от мест зарождения для роста пузырьков. Использование высококачественных, тщательно очищенных окон из CaF 2 , дегазация образцов и фильтрация твердых частиц из растворов образцов значительно снижает (вплоть до исключения) возникновение кавитационных явлений.Используя эту технику, мы можем без проблем достичь Т-образных прыжков до 20 ° C. Кроме того, кавитация накладывает на данные отчетливые особенности. Таким образом, простой алгоритм фильтрации в программном обеспечении для сбора данных может использоваться для удаления любых загрязненных переходных процессов в случае возникновения кавитации.

4. Примеры

4.1. ИК-измерения Т-прыжка тРНК

Несколько групп использовали метод индуцированного лазером Т-прыжка для изучения сворачивания нуклеиновых кислот (Ansari et al., 2001; Дьюи и Тернер, 1980; Кузнецов и др. , 2008; Ма и др. , 2006). Однако первые ИК-измерения Т-прыжка на РНК были выполнены нами (Brauns and Dyer, 2005). В этом разделе кратко описывается эта работа. Кривые плавления тРНК phe на двух разных ИК-частотах были показаны ранее в. Хотя термодинамические параметры для этих двух образцов статистически различаются, их температуры плавления одинаковы и составляют ~ 58,5 ° C. Эксперименты с Т-образным прыжком проводились, поддерживая постоянную начальную температуру на уровне 47 ° C, когда> 98% всего населения свернуто.Профили нестационарного поглощения регистрировались для обеих частот зонда в диапазоне величин T-скачка до максимального скачка 20 ° C. График, показывающий серию кратковременных поглощений, записанных на 1661 см, -1 , показан на ( качественно , данные на 1620 см -1 показывают такое же поведение).

Серия кратковременных поглощений, зарегистрированных при 1661 см -1 для тРНК phe . Качественно данные на 1620 см −1 совпадают. Начальная температура поддерживалась постоянной на уровне 47 ° C, а величина T-скачка изменялась до максимального значения 20 ° C.Каждый переходный процесс соответствовал трехэкспоненциальной модели от t = 100 нс до максимального переходного поглощения ( t = ~ 1 мс).

Все переходные процессы соответствовали экспоненциальной модели от t = 100 нс до t = ~ 1 мс, используя

ΔA = ∑i = 1Naie − t / τ

(17,8)

(длинный предел времени был выбран как время, когда кратковременное поглощение достигает максимума.) Мы наблюдаем три релаксационных процесса (т. е. N = 3).Кинетические фазы хорошо разделены во времени, охватывая от сотен наносекунд до сотен микросекунд. Амплитуды вносят более или менее равный вклад в общее затухание, причем самая медленная фаза вносит наименьший вклад. Однако особенно интересно то, что времена релаксации для данных 1620 см -1 больше, чем для данных на 1661 см -1 . Это легко увидеть, если наблюдаемые константы скорости (1/ τ = k obs = k F + k U ) для каждой фазы нанесены на график в координатах Аррениуса (т. Е.e., ln k obs vs. 1/ T ). Энтальпия активации Δ H затем может быть определена из наклона согласно

графикам Аррениуса данных Т-скачка тРНК при 1620 см -1 (квадраты) и 1661 см -1 (кружки) . Верхний график показывает быструю и промежуточную фазы. Они соответствуют неактивированным процессам. Нижний график показывает медленную фазу. Помимо соответствия активированному процессу, кинетика на 1620 см -1 быстрее, чем на 1661 см -1 .

lnkobs = −ΔH ‡ RT + const.

(17.9)

Константа представляет собой точку пересечения оси y и связана с предэкспоненциальным множителем.

Активационный барьер для медленной фазы и его среднее время релаксации позволяют предположить, что мы наблюдаем образование пары оснований. Тот факт, что релаксация, зарегистрированная при 1620 см, –1 , происходит немного быстрее, чем релаксация при 1661 см, –1 , неудивительно. Первый соответствует парам оснований A · U, которые более слабые, чем их аналоги G · C.С другой стороны, активационные барьеры для быстрой и промежуточной релаксации примерно равны нулю. Это означает, что барьер в основном энтропийный.

На основании этих данных мы предложили модель сворачивания параллельных путей для описания сворачивания тРНК. Согласно нашей модели, развернутая тРНК разделена на два схожих (но явно разных) структурных ансамбля. Каждый ансамбль складывается по отдельному пути; оба сходятся в родном состоянии. Шагом ограничения скорости в каждом из них является начальный коллапс развернутых состояний в компактные (но неправильно свернутые ) промежуточные соединения.После этого коллапса неправильно свернутые промежуточные продукты претерпевают быструю локализованную реорганизацию, при которой неродные взаимодействия нарушаются и образуются нативные контакты.

4.2. ИК-измерения T-jump образования тетрапетл

Совсем недавно мы начали изучать кинетику быстрой релаксации тетрапетлевых малых РНК (Stancik and Brauns, 2008). Структуры тетрапетлей малых РНК обманчиво просты. На первый взгляд, можно было бы ожидать, что формирование петли будет следовать модели с двумя состояниями.Однако недавние результаты (включая нашу собственную работу) показали, что это не так (Ma et al. , 2006; Moody et al. , 2004; Proctor et al. , 2004; Siegfried et al. , 2007). Нас особенно интересует консервативная последовательность тетрапетли, UNCG. Представленные ранее олигонуклеотиды HP C и HP G являются членами этой группы (N = C и N = G). Короткий стержень из двух пар оснований выбирается таким образом, чтобы олигонуклеотиды плавились при более низких температурах, позволяя достичь полностью денатурирующих условий.

Кинетические данные для этих тетрапетлей показаны на. Кинетика для каждого была исследована на двух разных частотах зонда после T-скачка 10 ° C. Перед Т-образным скачком оба образца были уравновешены при их соответствующих температурах плавления (58 ° C для HP C и 60 ° C для HP G ). Данные плавления для HP G не показаны. В качественном отношении следует особо отметить две особенности данных: (1) каждая последовательность демонстрирует очень разную кинетику релаксации. Например, полное расслабление для HP C происходит немного быстрее, чем для HP G .Кроме того, кинетические кривые для HP C подходят для биэкспоненциальной функции, а для HP G — для трехэкспоненциальной функции. (2) Кинетика для каждого зависит от волнового числа зонда. Например, в обоих случаях общая скорость релаксации выше, когда кинетика исследуется на 1574 см -1 , чем при более высоком волновом числе зонда (для HP C разница существенная).

Временные профили абсорбции для указанных олигонуклеотидов.Поглощение было нормализовано, чтобы облегчить прямое качественное сравнение.

Из вышеизложенного (1) следует, что одной подстановки основания достаточно, чтобы существенно изменить ландшафт складчатости. Две возможности (или их комбинация) могут объяснить вторую особенность сверху. Во-первых, кинетика, зависящая от волнового числа, выделяет последовательные события. Более низкое волновое число зонда (1574 см, -1 ) почти полностью обусловлено кольцевыми колебаниями гуанина, в то время как более высокое волновое число зонда обусловлено в основном растяжением карбонила гуанина.Хронологически стэкинг-взаимодействия оснований должны предшествовать образованию водородных связей пары оснований. Кинетика с более низким волновым числом быстрее, потому что поглощение при 1574 см -1 более чувствительно к взаимодействиям стэкинга, в то время как более высокое волновое число является прямой мерой водородных связей. Альтернативное объяснение состоит в том, что существует более одной популяции складчатости и что зависимость волнового числа возникает из-за дифференциального поглощения каждой из них. Последний сценарий аналогичен тому, что наблюдалось для тРНК phe .

Результаты HP G относительно новые и все еще исследуются. Однако кинетические результаты для HP C были проанализированы более подробно и опубликованы. Для иллюстрации мы кратко резюмируем эти выводы. По общему мнению, устойчивость энергетического ландшафта возникает из-за неправильно свернутых структур (на пути или вне его). Однако почти всегда неправильная загибка связана с частичными или неправильными контактами стержня .В небольшой шпильке, такой как HP C , недостаточно степеней свободы для доступа к широкому спектру структур стержня. Несмотря на это, наблюдается многоэкспоненциальная кинетика. Поскольку неправильная укладка в стебле недостаточна для объяснения сложности складывания, мы постулируем, что взаимодействия петель и / или флуктуации укладки одной нити также вносят вклад в общую сложность складывания. Уже известно, что самые ранние этапы складывания шпильки связаны с укладкой оснований. Однако наши результаты дают более подробную информацию.Прежде чем цепь сможет схлопнуться, позволяя замыкание петли, стеки переупорядочиваются, что приводит к частичному конформационному упорядочению. При правильной ориентации оснований относительно их соседей цепь может схлопнуться и пары оснований стебля застегнутся. Мы обосновываем наш вывод на основании частотной зависимости кинетики зонда в сочетании с параметрами активации (данные не показаны). Наши выводы аналогичны недавним открытиям Zewail и соавторов (Ma et al. , 2008).Они называют эти промежуточные продукты «лабильными в разборке, но компактными по своей природе».

Изучение биомолекулярного сворачивания и связывания с помощью масс-спектрометрии с температурным скачком

  • 1.

    Добсон, К. М. Сворачивание и неправильное сворачивание белков. Nature 426 , 884–890 (2003).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 2.

    Брукс, К. Л. III Статистическая термодинамика: прогулка по ландшафту. Наука 293 , 612–613 (2001).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 3.

    Анфинсен, К. Б. Принципы, регулирующие сворачивание белковых цепей. Наука 181 , 223–230 (1973).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 4.

    Брукс, К.Л., Грюбеле, М., Онучич, Дж. Н. и Волайнс, П. Г. Химическая физика сворачивания белков. Proc. Natl Acad. Sci. США 95 , 11037–11038 (1998).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 5.

    Neupane, K. et al. Прямое наблюдение переходных путей во время сворачивания белков и нуклеиновых кислот. Наука 352 , 239–242 (2016).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 6.

    Вуттен Д., Кристопулос А. и Секстон П. М. Новые парадигмы в аллостерии GPCR: значение для открытия лекарств. Nat. Rev. Drug Discov. 12 , 630–644 (2013).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 7.

    Дигби, Дж. Дж., Конн, П. Дж. И Линдсли, К. У. Ортостерический и аллостерический лиганд-направленный трафик в GPCR. Curr. Opin. Drug Discov.Dev. 13 , 587–594 (2010).

    CAS Google Scholar

  • 8.

    Редман Дж. Э. Поверхностный плазмонный резонанс для исследования складывания квадруплексов и взаимодействия с белками и небольшими молекулами. Методы 43 , 302–312 (2007).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 9.

    Mergny, J.-L. И Лакруа, Л. Текущие протоколы в химии нуклеиновых кислот 17.1.1-17.1.15 (John Wiley & Sons, Inc., 2009). https://doi.org/10.1002/0471142700.nc1701s37

  • 10.

    Маршанд А., Росу Ф., Зеноби Р. и Габелика В. Термическая денатурация G-квадруплексов ДНК и их комплексов с лигандами: термодинамический анализ множественных состояний, выявленных с помощью масс-спектрометрии. J. Am. Chem. Soc. 140 , 12553–12565 (2018).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 11.

    Nölting, B. Кинетика сворачивания белков . (Springer-Verlag, 2006). https://doi.org/10.1007/b138868

  • 12.

    Вирт, А. Дж., Лю, Ю., Пригожин, М. Б., Шультен, К., Грюбеле, М. Сравнение экспериментов по сворачиванию белков с быстрым скачком давления и скачком температуры и моделированием. J. Am. Chem. Soc. 137 , 7152–7159 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 13.

    Акасака К., Наито А. и Накатани Х. ЯМР-исследование с температурным скачком фолдинга белка: рибонуклеаза А при низком pH. J. Biomol. ЯМР 1 , 65–70 (1991).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 14.

    Boys, B. L. и Konermann, L. Система остановки потока при скачках температуры для мониторинга химической кинетики, вызванной быстрым охлаждением. Таланта 71 , 1276–1281 (2007).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 15.

    Бончина, М., Веснавер, Г., Чейрес, Дж. Б. и Ла, Дж. Раскрытие термодинамики складывания и взаимного превращения G-квадруплексов теломер человека. Angew. Chem. 128 , 10496–10500 (2016).

    Артикул Google Scholar

  • 16.

    Обед, А. Р., Шали, А., Смит, Л. Дж., Добсон, К. М. и Карплус, М. Понимание сворачивания белков с помощью поверхностей свободной энергии из теории и экспериментов. Trends Biochem. Sci. 25 , 331–339 (2000).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 17.

    Берова Н., Бари Л. Ди и Пескителли Г. Применение электронного кругового дихроизма в конфигурационном и конформационном анализе органических соединений. Chem. Soc. Ред. 36 , 914 (2007).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 18.

    Клегг Р. М. Флуоресцентный резонансный перенос энергии. Curr. Opin. Biotechnol. 6 , 103–110 (1995).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 19.

    Markwick, P. R.Л., Маллявин, Т. и Нильгес, М. Структурная биология с помощью ЯМР: структура, динамика и взаимодействия. PLoS Comput. Биол. 4 , e1000168 (2008).

    ADS PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 20.

    Купер М.А. Оптические биосенсоры в открытии лекарств. Nat. Rev. Drug Discov. 1 , 515–528 (2002).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 21.

    Вандер Меулен, К. А., Горовиц, С., Тривель, Р. К. и Бутчер, С. Е. Калориметрия (ред. Фейг, А. Л.) 567 , 181–213 (Elsevier Inc., 2016).

  • 22.

    Mehmood, S. et al. Масс-спектрометрия фиксирует связывание нецелевого лекарственного средства и дает механистическое представление о человеческой металлопротеиназе ZMPSTE24. Nat. Chem. 8 , 1152–1158 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 23.

    Анерт, С. Э., Марш, Дж. А., Эрнандес, Х., Робинсон, К. В. и Тейхманн, С. А. Принципы сборки раскрывают периодическую таблицу белковых комплексов. Наука 350 , aaa2245 – aaa2245 (2015).

    PubMed Статья CAS PubMed Central Google Scholar

  • 24.

    Борер, Б. К., Меренблум, С. И., Кенигер, С. Л., Хильдербранд, А. Э. и Клеммер, Д. Э. Анализ биомолекул с помощью спектрометрии ионной подвижности. Annu. Rev. Anal. Chem. 1 , 293–327 (2008).

    CAS Статья Google Scholar

  • 25.

    Калташов И. А. и Эйлс С. Дж. Масс-спектрометрия в структурной биологии и биофизике . Энциклопедия аналитической химии (John Wiley & Sons, Inc., 2012). https://doi.org/10.1002/9781118232125.

    Книга Google Scholar

  • 26.

    Root, K. et al. Арилбис-сульфонамиды связываются с активным центром гомотримерного фермента биосинтеза изопреноидов IspF и извлекают важный кофактор катиона двухвалентного металла. Chem. Sci. 9 , 5976–5986 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 27.

    Ferguson, P. et al. Сворачивание белка и взаимодействия белок-лиганд контролировали с помощью масс-спектрометрии с электрораспылением. Curr. Анальный. Chem. 5 , 186–204 (2009).

    CAS Статья Google Scholar

  • 28.

    Конерманн, Л., Пэн, Дж. И Уилсон, Д. Дж. Кинетика биохимических реакций в главе 5 изучалась с помощью масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением с временным разрешением. Компр. Анальный. Chem. 52 , 103–519 (2008).

    Артикул CAS Google Scholar

  • 29.

    Shi, L. et al. Характеристика промежуточных продуктов при переходе от полипролина I к полипролину II с использованием спектрометрии ионной подвижности-масс-спектрометрии. J. Am. Chem. Soc. 136 , 12702–12711 (2014).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 30.

    Колаковски Б. М., Симмонс Д. А. и Конерманн Л. Масс-спектрометрия с электрораспылением с остановленным потоком: новый метод изучения кинетики химических реакций в растворах. Rapid Commun. Масс-спектрометрия. 14 , 772–776 (2000).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 31.

    Уилсон, Д. Дж. И Конерманн, Л. Капиллярный смеситель с регулируемым объемом реакционной камеры для исследований с миллисекундным временным разрешением методом электроспрей-масс-спектрометрии. Анал. Chem. 75 , 6408–6414 (2003).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 32.

    Аттвуд, П. В. и Гивз, М. А. Кинетика катализируемой ферментами реакции, измеренная с помощью масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением с использованием простой насадки для быстрого перемешивания. Анал. Биохим. 334 , 382–389 (2004).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 33.

    Lanucara, F., Holman, S. W., Gray, C. J. и Eyers, C. E. Сила масс-спектрометрии ионной подвижности для структурной характеристики и изучения конформационной динамики. Nat. Chem. 6 , 281–294 (2014).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 34.

    Бенеш, Дж. Л. П., Соботт, Ф. и Робинсон, К. В. Термическая диссоциация мультимерных белковых комплексов с помощью масс-спектрометрии с наноэлектрораспылением. Анал. Chem. 75 , 2208–2214 (2003).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 35.

    Эль-Баба, Т. Дж. И др. Плавящиеся белки: свидетельство наличия множества стабильных структур при термической денатурации нативного убиквитина из измерений спектрометрии-масс-спектрометрии ионной подвижности. J. Am. Chem. Soc. 139 , 6306–6309 (2017).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 36.

    Cong, X. et al. Определение термодинамики связывания белков и липидов мембраны с помощью нативной масс-спектрометрии. J. Am. Chem. Soc. 138 , 4346–4349 (2016).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 37.

    Ван Г., Абзалимов Р. Р. и Калташов И. А. Прямой мониторинг термонапряженных биополимеров с помощью масс-спектрометрии с контролируемой температурой с электрораспылением и ионизацией. Анал. Chem. 83 , 2870–2876 (2011).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 38.

    Нгу, Т. Т. и Стиллман, М. Дж. Связывание мышьяка с человеческим металлотионеином. J. Am. Chem. Soc. 128 , 12473–12483 (2006).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 39.

    Пешке М., Веркерк У. Х. и Кебарл П. Особенности механизма ESI, влияющие на наблюдение многозарядных нековалентных белковых комплексов и определение константы ассоциации методом титрования. J. Am. Soc. Масс-спектрометрия. 15 , 1424–1434 (2004).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 40.

    Грей, Р. Д., Трент, Дж. О. и Чейрес, Дж. Б. Пути складывания и разворачивания теломерного G-квадруплекса человека. J. Mol. Биол. 426 , 1629–1650 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 41.

    Noer, S. L. et al. Динамика сворачивания и конформационная гетерогенность теломерных G-квадруплексных структур человека в растворах Na + методом FRET-микроскопии одиночных молекул. Nucleic Acids Res. 44 , 464–471 (2016).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 42.

    Азнаурян, М., Сондергаард, С., Ноер, С. Л., Шиотт, Б. и Биркедал, В. Прямой вид сложного многопутевого складывания теломерных G-квадруплексов. Nucleic Acids Res. 44 , 11024–11032 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 43.

    Hänsel-Hertsch, R., Di Antonio, M. & Balasubramanian, S. ДНК G-квадруплексы в геноме человека: обнаружение, функции и терапевтический потенциал. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 18 , 279–284 (2017).

    PubMed Статья CAS PubMed Central Google Scholar

  • 44.

    Маршанд А. и Габелика В. Пути сворачивания и неправильного сворачивания G-квадруплекса ДНК. Nucleic Acids Res. 44 , 10999–11012 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 45.

    Lim, K. W. et al. Вариант последовательности (CTAGGG) n в теломере человека отдает предпочтение структуре G-квадруплекса, содержащей тетраду G · C · G · C. Nucleic Acids Res. 37 , 6239–6248 (2009).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 46.

    Габелика В., Росу Ф. и Де Пау Е. Простой метод определения коэффициентов отклика нековалентных комплексов на электрораспыление. Анал. Chem. 81 , 6708–6715 (2009).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 47.

    Сан, Дж., Китова, Э. Н., Ван, В. и Классен, Дж. С. Метод различения специфических и неспецифических комплексов белок-лиганд в масс-спектрометрии с ионизацией наноэлектрораспылением. Анал. Chem. 78 , 3010–3018 (2006).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 48.

    Marchand, A. et al. Индуцированные лигандом конформационные изменения с выбросом катионов при связывании с G-квадруплексами теломерной ДНК человека. J. Am. Chem. Soc. 137 , 750–756 (2015).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 49.

    Дрю, Х. Р. и др. Структура додекамера B-ДНК: конформация и динамика. Proc. Natl Acad. Sci. США 78 , 2179–2183 (1981).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 50.

    Эрикссон, А.Э., Джонс, Т.А., Лиляс, А. Уточненная структура карбоангидразы II человека с разрешением 2,0 Å. Proteins Struct. Функц. Genet. 4 , 274–282 (1988).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 51.

    Конрой, К. В. и Марен, Т. Х. Влияние температуры на связывание сульфонамидов с изоферментами карбоангидразы I, II и IV. Mol.Pharmacol. 48 , 486–491 (1995).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 52.

    Калташов, И. А., Бобст, К. Э. и Абзалимов, Р. Р. Методы, основанные на масс-спектрометрии, для изучения архитектуры и динамики белков. Protein Sci. 22 , 530–544 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 53.

    Hagerman, P.J. и Baldwin, R.L. Количественная обработка кинетики фолдинга рибонуклеазы A. Biochemistry 15 , 1462–1473 (1976).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 54.

    Белла Дж., Бродский Б. и Берман Х. М. Гидратационная структура коллагенового пептида. Структура 3 , 893–906 (1995).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 55.

    Strauss, K. & Chmielewski, J. Успехи в разработке и сборке пептидов-миметиков коллагена для регенеративной медицины. Curr. Opin. Biotechnol. 46 , 34–41 (2017).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 56.

    Erdmann, R. S. & Wennemers, H. Функциональные модельные пептиды коллагена. J. Am. Chem. Soc. 132 , 13957–13959 (2010).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 57.

    Bchinger, H.P. & Engel, J. Справочник по свертыванию белков , Vol. 2 , 1059–1110 (Wiley-VCH Verlag GmbH, 2008).

  • 58.

    Hélène, C. Антигенная стратегия: контроль экспрессии генов с помощью триплекс-образующих олигонуклеотидов. Anticancer. Drug Des. 6 , 569–584 (1991).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 59.

    Чандрасекаран, А. Р. и Руслинг, Д. А. Триплекс-образующие олигонуклеотиды: третья цепь для нанотехнологий ДНК. Nucleic Acids Res. 46 , 1021–1037 (2018).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 60.

    Campuzano, V. et al. Атаксия Фридрейха: аутосомно-рецессивное заболевание, вызванное интронной экспансией триплетных повторов GAA. Science 271 , 1423–1427 (1996).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 61.

    Баколла А., Ван Г. и Васкес К. М. Новые взгляды на триплексы ДНК и РНК как эффекторы биологической активности. PLoS Genet. 11 , e1005696 (2015).

    PubMed PubMed Central Статья CAS Google Scholar

  • 62.

    Асенсио, Дж.Л., Браун, Т. и Лейн, А. Н. Конформация раствора параллельной тройной спирали ДНК с 5 ‘и 3’ тройными и дуплексными соединениями. Структура 7 , 1–11 (1999).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 63.

    Köhler, M. et al. Масс-спектрометрия с контролируемой температурой и электрораспылением с ионизацией как инструмент исследования гомо- и гетеротримеров коллагена. Chem. Sci. 68 , 42–61 (2019).

    Google Scholar

  • 64.

    Arcella, A. et al. Структура триплексной ДНК в газовой фазе. J. Am. Chem. Soc. 134 , 6596–6606 (2012).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 65.

    Li, J. et al. Масс-спектрометрия ионной подвижности выявляет детали образования и структуры триплексов ДНК и РНК GAA · TCC. J. Am. Soc. Масс-спектрометрия. 30 , 103–112 (2019).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 66.

    Alberti, P. et al. Направленный механизм зародышеобразования-застегивания для образования тройной спирали. Nucleic Acids Res. 30 , 5407–5415 (2002).

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

  • 67.

    Барнс, Дж. А., Уилки, Дж. И Уильямс, И. Х. Структурные вариации переходного состояния и механистические изменения. J. Chem. Soc. Faraday Trans. 90 , 1709 (1994).

    CAS Статья Google Scholar

  • 68.

    Камерлин С.Л., Флориан Дж. И Варшел А. Ассоциативный и диссоциативный механизмы гидролиза моноэфира фосфата: интерпретация энтропий активации. ChemPhysChem 9 , 1767–1773 (2008).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 69.

    Auffinger, P. & Westhof, E. Связывание воды и ионов вокруг олигомеров РНК и ДНК (C, G). J. Mol. Биол. 300 , 1113–1131 (2000).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 70.

    Jecklin, M.C., Schauer, S., Dumelin, C.E.& Зеноби, Р. Определение констант связывания белок-лиганд без метки с использованием масс-спектрометрии и проверки с использованием поверхностного плазмонного резонанса и калориметрии изотермического титрования. J. Mol. Признать. 22 , 319–329 (2009).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 71.

    Rosu, F., De Pauw, E. & Gabelica, V. Электрораспылительная масс-спектрометрия для изучения взаимодействий между лекарственными средствами и нуклеиновыми кислотами. Biochimie 90 , 1074–1087 (2008).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 72.

    Кубелка, Дж., Генри, Э. Р., Селлмер, Т., Хофрихтер, Дж. И Итон, У. А. Химическая, физическая и теоретическая кинетика сверхбыстрого сворачивания белка. Proc. Natl Acad. Sci. США 105 , 18655–18662 (2008).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 73.

    Сабелко Дж., Эрвин Дж. И Грюбеле М. Наблюдение за странной кинетикой сворачивания белков. Proc. Natl Acad. Sci. США 96 , 6031–6036 (1999).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 74.

    Дэвис, Т. М. и Уилсон, В. Д. Биосенсорный анализ поверхностного плазмонного резонанса взаимодействий РНК и малых молекул. Methods Enzymol. 340 , 22–51 (2001).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 75.

    Dumas, P. et al. Расширение ITC до кинетики с помощью kinITC. in. Методы Enzymol. 567 , 157–180 (2016).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 76.

    Gal, M., Zibzener, K. & Frydman, L. Устройство с емкостной связью для температурных скачков для биомолекулярного ЯМР высокого разрешения. Magn. Резон. Chem. 48 , 842–847 (2010).

    CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 77.

    Каваками М. и Акасака К. Система ядерного магнитного резонанса с микроволновым скачком температуры для водных растворов. Rev. Sci. Instrum. 69 , 3365–3369 (1998).

    ADS CAS Статья Google Scholar

  • 78.

    Габелика В., Галич Н., Росу Ф., Хусье К. и Де Пау Э. Влияние факторов отклика на определение констант равновесной ассоциации нековалентных комплексов с помощью масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением. J. Mass Spectrom. 38 , 491–501 (2003).

    ADS CAS PubMed Статья PubMed Central Google Scholar

  • 79.

    Кузьмич, П. DynaFit — программный пакет для энзимологии. Methods Enzymol. 467 , 247–280 (2009).

    PubMed Статья CAS PubMed Central Google Scholar

  • 80.

    Влодавер А., Боркакоти Н., Мосс Д. С. и Хаулин Б. Сравнение двух независимо уточненных моделей рибонуклеазы-А. Acta Crystallogr. Разд. B Struct. Sci. 42 , 379–387 (1986).

    Артикул Google Scholar

  • Почему температура вашего процессора скачет вверх и вниз

    Не волнуйтесь, вы не первый и не единственный, кто столкнулся с этой проблемой!

    Процессоры могут иногда сходить с ума по множеству причин, например, из-за перегрева из-за отсутствия обработки или запуска игр.

    Итак, в этой статье мы вместе выясним, что может быть причиной скачков температуры вашего процессора!

    Нормальны ли скачки температуры процессора?

    Некоторые люди скажут, что скачок температуры процессора — это нормально. Однако, если изменение температуры происходит быстро, это может быть неверно. Например, ЦП может многократно перепрыгивать с 80 ° C на 90 ° C и обратно до 80 ° C. Быстрые изменения температуры могут вызвать физическое повреждение ЦП или материнской платы, если они продолжаются в течение длительного периода времени.

    Что я могу сделать, чтобы поддерживать температуру процессора на стабильном уровне?

    Для поддержания стабильной температуры процессора вы можете сделать следующее:

    • Очистить корпус компьютера и вентиляционные отверстия
    • Удалите все программы или приложения, которые автоматически запускаются при загрузке компьютера. Это может привести к перегрузке вашего процессора.
    • Убедитесь, что компьютер не находится в помещении с сквозняками, вдали от вентиляционных отверстий и в наиболее нагретой части комнаты.
    • Очищайте вентиляторы один раз в год, чтобы обеспечить надлежащий приток воздуха.

    Что мне делать, чтобы снизить температуру процессора?

    Для некоторых это не проблема, но некоторые из нас пытаются найти способы охладить процессор.

    Некоторые люди говорят, что держат свои ноутбуки на полу, чтобы воздух мог легко циркулировать вокруг них, другие говорят, что используют внешний вентилятор для более быстрого отвода тепла.

    Вот несколько простых способов снизить температуру процессора:

    • Выключение компьютера или ноутбука, когда он не используется.
    • Храните компьютер в прохладном месте, например в комнате с кондиционером.
    • Снимите ноутбук с поверхности, на которой вы его используете, и поместите его на охлаждающую подставку.

    Как лучше всего контролировать температуру процессора?

    Многие люди задаются вопросом, как проверить, не перегревается ли их процессор. Один из способов проверить температуру вашего процессора — использовать программную утилиту, например SpeedFan .

    Для этого сначала убедитесь, что в вашей системе установлены все драйверы для оборудования на вашем ПК.Затем запустите программу и нажмите «начать мониторинг». Вы также можете найти SpeedFan, перейдя в Панель управления -> Система -> вкладка Оборудование -> вкладка Защита системы -> Параметры производительности -> Планирование процессора. После настройки перейдите на вкладку «Общие» и выберите оба параметра для «интервала» (5 минут). Как только он начнет мониторинг, вы увидите график загрузки процессора и температуры в градусах Цельсия, которые обновляются каждые пять минут.

    Как оптимизировать использование ЦП?

    Одна из самых важных вещей, которые вы можете сделать, чтобы ваш процессор работал наилучшим образом, — это следить за тем, чтобы он оставался холодным.Это не только предотвратит возможное повреждение, но и позволит вашему процессору работать с максимальной производительностью. Одна вещь, которая может вам помочь, — это установить максимальную температуру для вашего компьютера, прежде чем он начнет закрывать приложения или процессы, чтобы поддерживать охлаждение.

    Вы можете сделать это, используя ту же программу, о которой мы упоминали ранее, SpeedFan, , и сконфигурировав свой компьютер так, чтобы, если он достигнет определенной температуры, вентилятор на вашем процессоре будет вращаться быстрее, чтобы охладить его.

    Какой должна быть температура простоя процессора?

    Многие люди могут подумать, что температура простоя процессора должна быть около 30 градусов по Цельсию.Несколько лет назад это было обычным делом, но теперь уже нет. Температура простоя процессора становится все выше и выше с развитием технологий. Следует отметить, что эти температуры могут быстро повышаться и понижаться. Обычно это происходит из-за того, что одновременно выполняется много задач, или из-за сезонных изменений температуры воздуха.

    Какой диапазон температуры процессора хороший?

    Недавнее исследование показало, что «наилучшая температура процессора» находится в диапазоне 10–30 градусов по Цельсию (или 50–85 градусов по Фаренгейту).

    В ходе исследования исследователи обнаружили, что когда температура процессора скачкообразно повышается и понижается, температура процессора быстро изменяется или температура процессора нестабильна, это может вызвать ошибки в компьютерных программах.

    Компьютерные ошибки могут вызвать сбои и потерю данных.

    шт. Важно заменить вентиляторы компьютера, пока они не вышли из строя. В противном случае ваш компьютер перегреется и неожиданно выключится без предупреждения.

    Как узнать, что ваш компьютер простаивает?

    Когда ваш компьютер находится в режиме ожидания, температура его процессора должна быть ниже 60 градусов Цельсия.Если температура превышает это значение, вероятно, ваш компьютер не выключается должным образом или выполняет ненужные процессы.

    Многие геймеры или компьютерные энтузиасты имеют базовое представление о том, как работает ЦП, и знают, что, когда их ЦП быстро переключается с высоких на низкие температуры, может возникнуть проблема с системой охлаждения.

    Температура процессора не должна постоянно возрастать с 34 ° C до 70 ° C. Если вы замечаете эти всплески на своем термометре, и они случаются более часа за раз, то, вероятно, вам нужно заменить радиатор или термопасту для повышения производительности.

    Привет, это Shawky из GeeksState, я инженер-электрик, который без ума от технологий, надеюсь, вам понравится мой крошечный мир, и ПОЖАЛУЙСТА! Хорошего дня 😀

    Влияние температуры на прыжковые характеристики лягушки Limnodynastes tasmaniensis на JSTOR

    Абстрактный

    Показатели прыжков лягушки Limnodynastes tasmaniensis были измерены в диапазоне температур тела ($ T_ {b} $) от 2 ° до 37 ° C после акклиматизации при 9 ° и 30 ° C. Показатели горизонтального прыжка линейно увеличивались с $ T_ {b} $ между 7 ° и 30 ° C, но заметно снизилась за пределами этого диапазона.Не было «плато» характеристик, через которое расстояние перехода было бы относительно независимым от температуры. Масштаб теплового отклика ($ Q_ {10} $ = 1,56) был аналогичен влиянию температуры на двигательные функции у других амфибий и рептилий. Режим акклиматизации не оказал существенного влияния на расстояние прыжка в диапазоне $ T_ {b} $, в котором обычно активен L. tasmaniensis. Оптимальная рабочая температура, от 30 ° до 33 ° C, была исключена из-за температурного градиента. Ни один из исследованных дескрипторов термической чувствительности (оптимальная температура, оптимальная ширина диапазона, предпочтительная температура и реакция акклиматизации) не коррелирует с наблюдаемой термической нишей L.tasmaniensis. Успешное использование бесхвостыми животными изменчивой во времени тепловой среды не обязательно должно быть связано с температурной независимостью двигательных функций относительно экологически значимых значений $ T_ {b} $.

    Информация о журнале

    Текущие выпуски теперь размещены на веб-сайте Chicago Journals. Прочтите последний выпуск.

    Информация об издателе

    С момента своего основания в 1890 году в качестве одного из трех основных подразделений Чикагского университета, University of Chicago Press взял на себя обязательство распространять стипендии высочайшего стандарта и публиковать серьезные работы, которые способствуют образованию, способствуют общественному пониманию , и обогатить культурную жизнь.Сегодня Отдел журналов издает более 70 журналов и сериалов в твердом переплете по широкому кругу академических дисциплин, включая социальные науки, гуманитарные науки, образование, биологические и медицинские науки, а также физические науки.

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *