Т 4а 01: Гусеничный сельскохозяйственный трактор Т-4А.01

Содержание

Гусеничный сельскохозяйственный трактор Т-4А.01

Гусеничные сельскохозяйственные тракторы Т-4А.01 общего назначения класса 4 предназначены для работы в агрегате с навесными, полунавесными и прицепными гидрофицированными сельскохозяйственными машинами и орудиями, соответствующими тяговому классу тракторов, а также с бульдозерным оборудованием типа ОБГН-4. Технические возможности этих машин, по сравнению с колесными тракторами, позволяют эффективно работать ранней весной на переувлажненных почвах, а зимой — на снегозадержании.

С целью улучшения условий труда оператора на тракторы установлена каркасная, термошумоизолированная кабина с центральным расположением поста управления, улучшенной обзорности с вентиляционной установкой повышенной производительности. Прямой электростартерный запуск двигателя с рабочего места оператора.

Технические характеристики

сельскохозяйственного трактора Т-4А.01

Показатель Значение

Тяговый класс 4

Двигатель А-01МСИ

Мощность двигателя, кВт (л.с.) 130

Коэффициент запаса крутящего момента, % 25

Удельный расход топлива при эксплуатационной мощности, г/кВтч (г/л.с.ч) 173

Наименьший радиус поворота, м 1,70

Число передач

— передний ход 8

— задний ход 4

Диапазон скоростей, км/ч

— передний ход 2,22—9,32

— задний ход 3,39—6,10

— с ходоуменьшителем —

Относительный расход масла на угар,% 0,9

Масса трактора эксплуатационная, кг 8870

Среднее удельное давление гусениц на грунт, кгс/см2 0,50

Вместимость топливного бака, л 320

Вал отбора мощности, об/мин (* — при установке сменных шестерен и вала) — по заказу 540 (1000*)

База трактора, мм 2522

Колея трактора, мм 1384

Дорожный просвет, мм 371

Габаритные размеры, мм

— длина 4650

— ширина 1952

— высота 2840

Уровень звука на рабочем месте оператора, дБА, не более (с применением средств индивидуальной защиты) 80

Процентный ресурс трактора до первого капитального ремонта, тыс. моточасов 6

Наработка на сложный отказ, моточасы 300

Т-4А ( каталог 1996г.) (Т-4А)- описание, характеристики, история.

Эксплуатационная мощность двигателя, кВт (л.с.): 95,5 (130)
Частота вращения, мин-1:
коленчатого вала двигателя: 1700
ВОМ: 540 и 1000 (с переналадкой)
Диаметр цилиндра, мм: 130
Ход поршня, мм: 140
Удельный расход топлива при эксплуатационной мощности, г/кВт·ч (г/л.с.·ч): 245 (180)
Число передач:
вперед: 8
назад: 4
Диапазон скоростей движения, км/ч: 3,47…9,52
Вместимость топливного бака, л: 320
Колея, мм: 1384
Продольная база, мм: 2522
Ширина эвена гусениц, мм: 420
Среднее удельное давление на почву, МПа (кгс/см2): 0.04 (0,4)
Дорожный просвет, мм: 371
Габаритные размеры, мм
:
длина с механизмом задней навески и автосцепкой: 4684
ширина: 1952
высота: 2545

Масса (конструкционная), кг: 8145

Двигатель A-01M дизельный, шестицилиндровый, четырехтактный, с жидкостным охлаждением и камерой сгорания в днище поршня. Запуск основного двигателя с места водителя при помощи пускового двигателя с электростартером.

Все механизмы трактора смонтированы на раме, сваренной из двух лонжеронов коробчатого сечения. Спереди лонжероны соединены между собой брусом.

Муфта главного сцепления сухая, двухдисковая, постоянно замкнутая, управляемая при помощи педали, с гидроусилителем.

Коробка передач (КП) механическая, с реверс-редуктором, позволяет получить восемь передач вперед и четыре назад.

Тормоза сухие, ленточные, плавающего типа позволяют тормозить трактор при переднем и заднем ходе.

Ходовая часть состоит из двух гусеничных тележек, двух гусеничных цепей и балансирной поперечной рессоры. На больших лонжеронах рам гусеничных тележек с наружной стороны приварены опорные пластины с отверстиями для крепления опор бульдозерного навесного оборудования. Опорные пластины на рамах гусеничных тележек также используют при агрегатировании трактора со специальным оборудованием для обработки полей под хлопок. Полужесткая ходовая система позволяет агрегатировать трактор с бульдозерным оборудованием, палоделателем, разравнивателем, снегопахом и корчевателем с охватывающей рамой.

Бульдозерным навесным оборудованием управляют распределителем с места водителя при помощи двух гидравлических цилиндров.

ВОМ зависимый, получает вращение от промежуточного вала реверс-редуктора КП.

Оборудован раздельно-агрегатной гидравлической системой, управляемой из кабины водителя, механизмом задней навески, позволяющим подсоединять машины и орудия по двух- или трехточечной схеме, прицепным устройством и автосцепкой.

Кабина металлическая, установлена на амортизаторах, двухместная, закрытого типа, обогреваемая и вентилируемая. Сиденье подрессоренное, регулируется по массе и росту водителя.

Электрооборудование постоянного тока напряжением 12В обеспечивает электростартерный запуск пускового двигателя, звуковую сигнализацию, привод вентилятора, работу предпускового подогревателя и освещение.

Для подогрева двигателя перед его запуском на тракторе предусмотрен жидкостный предпусковой подогреватель ПЖБ-300Б.

Трактор может быть поставлен в четырех комплектациях. Для сельского хозяйства его поставляют с двухточечной наладкой заднего механизма навески и с ВОМ.

Рекомендуется для зон: 5, 7, 15 … 17.

Т-4А гусеничный трактор — Каталог К.В.Х.

Трактор Т-4А

 

 Технические характеристики Трактор Т-4А – настоящий трудяга, суровый работник сельского хозяйства. О его назначении говорит все – форма кузова, расположение кабины и её конструкция, наличие возможности устанавливать различное навесное оборудование. Для времени своего выпуска трактор обладал выдающимися рабочими характеристиками – они остаются актуальными до сих пор. Если проводить аналогию – трактор Т-4А настоящий тяжеловоз, он относится к 4 тяговому классу! Его мощный двигатель позволяет трактористу осуществлять глубокую вспашку, сплошную культивацию и уборку сельскохозяйственных культур. Охарактеризовать трактор можно всего двумя словами – суровость и характер!

 

История создания

«Дедушкой» трактора Т-4А является трактор Т-4. Он был выпущен на Алтайском тракторном заводе в далеком 1964 году. Производство данной модификации продолжалось на протяжении всего 6 лет. Прекращено оно было в 1970 году. Трактор Т-4А изначально позиционировался для решения различных задач в сельском хозяйстве. В первую очередь для выполнения пахотных работ. Именно с этим связано множество его конструктивных особенностей. Сам трактор Т-4А имеет более долгую историю в отличие от своего предшественника. Фактически, Т-4А представляет собой углубленную модернизированную версию Т-4 с более мощным двигателем и иными особенностями. Производство версии «А» осуществлялось в течение 28 лет подряд – с 1970 по 1998 год. За весь этот период времени трактор пережил множество частичных модернизаций. Они коснулись как его внешнего вида, так и силового оборудования. Чаще всего трактор использовался на целинных землях – в Сибири и Казахстане. Земля в тех регионах была сложная, именно с этим связана большая мощность рассматриваемой техники. В течение всего времени выпуска производство и модернизация осуществлялись на территории АТЗ – Алтайского тракторного завода. Данное тракторостроительное предприятие располагается в городе Рубцовск, Алтайского края. Завод появился в далеком 1942 году на основе эвакуированного оборудования Харьковского тракторного завода. После прекращения существования СССР АТЗ начал быстрыми темпами сокращать свое производство. В 2007 году завод начал постепенно обанкрочиваться. В 2011 году завод был ликвидирован окончательно, в настоящее время разрушен. Преемником АТЗ является ООО «Завод Алтай трактор». Его технические характеристики являются действительно выдающимися. Даже в сравнении с существующими сегодня современными аналогами он продолжает выглядеть достаточно внушительно.

 

Габаритно-массовые показатели

Рассмотрим массовые и габаритные показатели данной техники – это позволит представить его в работе, оценить удобство использования в различных условиях:

объем топливного бака, л – 320;

ширина создаваемой колеи, мм – 1384;

длина продольной базы, мм – 2 522;

величина дорожного просвета, мм – 340;

ширина используемых в конструкции башмаков, мм – 420;

величина давления на почву, МПа – 0.04.

 

Габаритные размеры самого кузова:

длина от задней части гусениц до переднего края кузова, мм – 4 684;

ширина от краев гусениц, мм – 1 952;

высота от нижней части гусениц до верхней части кабины, мм – 2 545.

Конструктивная масса со всеми заправочными жидкостями составляет 8 145 кг. Многиесчитают трактор неповоротливым из-за большого веса. Но благодаря мощному двигателю он легко справляться со своей работой даже на самых твердых почвах! Трактор Т-4А покажет себя настоящим трудягой в любых условиях.

Двигатель

В тракторе использовался самый настоящий гигант по сравнению с остальными моторами – дизельный двигатель А-01. Его рабочие параметры являются поистине выдающимися даже сегодня, спустя десятилетия с момента начала выпуска.

Существует три различных модификации мотора. Все они в различные периоды времени использовались в тракторе Т-4А: А-01МСИ-1; А-01МРСИ-1; А-01МКСИ-1. Рабочие характеристики их, несмотря на разную маркировку, схожи как у родных братьев:

тип мотора – четырехтактный;

суммарное число цилиндров, шт. – 6;

расположение цилиндров – вертикально/в ряд;

работа цилиндров осуществляется в следующем порядке:1/5/3/6/2/4;

диаметр охвата цилиндра, мм – 130;

еличина хода поршня, мм – 140;

величина номинальной мощности, л.с. – 135;

номинальная частота вращения коленвала, мин-1 – 1 700.

 

Коробка передач

«Сильным» место трактора является именно его коробка. Она представляет собой механическую КПП, которая оснащается реверс – редуктором. Имеется 4 скорости для движения назад и 8 скоростей – для движения вперед. Фактически, данная коробка является аналогичной используемой на предшественнике – трактора Т-4. Она не модифицировалась. Ходовая часть (трансмиссия) Ходовая часть как и коробка переключения передач была полностью унаследована от предшественника. Основными её составляющими частями являются: две специальные гусеничные цепи; специальная балансировочная рессора – стабилизирует трактор на крутых склонах, не дает ему перевернуться; две гусеничные тележки.

 

Кабина и управление трактором

Изначально кабина трактора был выполнена из металла и была утеплена по минимуму. В дальнейшем проводилось множество модернизаций. Все это в совокупности позволило добиться более-менее приемлемых условий работы для водителя. Хотя при этом до комфортабельности было далеко. Трактор Т-4А – машина для настоящих мужчин! В кабине имеется отопление и вентилятор/пылеотделитель. Присутствует кресло для пассажира.

 Управление машиной осуществлялось при помощи нескольких рычагов различного назначения. Переключение скоростей выполнялось при помощи сухой муфты сцепления – в действие она приводилась специальной педалью. Все расположенные на приборной панели датчики использовались только аналогового типа – даже на моделях, произведенных в последние годы существования АТЗ.

 

Модификации трактора

  Фактически, у трактора Т-4А имелась всего одна действительно серьезная модификация – Т-4АП. Остальные модели строились на этой же базе, но имели незначительные отличия от своего оригинала. Основным назначением Т-4АП являлось использование в сфере строительства, а также мелиоративных работ. Существуют две разновидности данной модификации: Т-4АП-С1 – оснащается гидравлической системой для работы с бульдозерами, специальным корчевателем-собирателем; Т-4АП-С2 – имеется гидравлическая система для выполнения различных работ совместно со скрепером.

 

Новый Т-4А из Алтая. Что изменилось? | В мире сельского хозяйства

Добрый день!

Мы уже много раз говорили о загнувшемся Алтайском тракторном заводе и о производствах, появившихся на его руинах и что-то пытающихся производить. Яндекс то и дело предлагает рекламу от завода Алтайский трактора, выпускающего различные модели, которые появились после модернизации Т-4А.

Старичок Т-4А

Старичок Т-4А

На твиттере компании раз в полгода, а то и раз в год появляются заметки, что вот «только что была отгрузка наших новых тракторов!«.

Ну чтож, это интересно. Но такая техника не пользуется особым спросом. Про некоторые модели мы уже писали.

Т-404 — внук алтайского «утюга» трактора Т-4А;
Алтайский Т-402. Немного о потомках Т-4А;
Алтай-130. Китайский внук старого «утюга» Т-4

Ну а сегодня хочется упомянуть про трактор со всем знакомым названием Т-4А, лишь с добавленным окончанием -01. Что это за чудо такое? Давайте разберемся.

Трактора Т-4А-01 предлагается заводом Алтайский трактор для выполнения сельскохозяйственных работ. Конечно же, в первую очередь, для пахотных работ. Вот так вот он выглядит.

Трактор Т-4А-01. Фото https://alttrac.ru

Трактор Т-4А-01. Фото https://alttrac.ru

На «новый» трактор 4 тягового класса ставят шестицилиндровый двигатель А-01МСИ (А-01М) мощностью 130 л.с.. В общем-то, это тот же самый двигатель, что и на Т-4А советского образца. По коробке передач тоже все старое, ее разработали еще для Т-4 в середине прошлого века, почти ничего не изменилось. Максимальная скорость трактора 9,32 км/ч. Тяжеловато добираться до отдаленных полей, когда единственное что спасает от тряски это передняя поперечная рессора, от которой толку мало.

Гусеничная тележка та же самая, передняя часть трактора, капот — те же самые.

Бросается в глаза другая кабина. Более объемная и высокая. Высота трактора с такой кабиной стала 2,84 метра, высота старого Т-4А — 2,545 метра. В габаритах это пожалуй единственная изменившаяся цифра. Остальное, длинна — 4,65 мм, ширина — 2,52 м. остались прежними.

Трактор Т-4А-01 набрал в массе. На старом Т-4А было 8,145 тонн, на новом «утюге» — 8,87 тонн.

При этом среднее удельное давление на грунт осталось довольно низким по сравнению с колесными тракторами — 0,5 кгс/см2. Про бережное отношение гусеничников к земле все знают и уже много сказано.

В общем, это тот же самый трактор, только в другом цвете и с унифицированной кабиной с другими моделями завода. Например, на Т-402 такая же кабина, и ходовка такая же, и двигатель, да почти всё такое же. Ой, да это же один и тот же трактор? Ну не разберешься в их маркировке.

Т-402

Т-402

А в кабине механизатор теперь сидит по центру. И пользуется он дверью по левой стороне, справа ее вообще нет.

Степень остекления высокая, обзорность хорошая со всех сторон. Конечно, по комфорту это шаг вперед. Почти все нарекания к Т-4А были именно по комфорту: высокая шумность, вибрация, все вокруг гремит, отсутствие амортизации кроме подрессоренного сиденья, пыль летела во все щели, да и жара в кабине дикая. Новая кабина конечно может подправить параметры микроклимата, спасти от пыли. Но тряска? Тут, мне кажется ни что не поможет, подвеска то старая осталась.

В живую мне не доводилось увидеть эти машины, но если кто-то работал на Т-4А-01, Т-402, Т-404, Т-250 и других тракторах из Алтая, расскажите как они Вам? Очень интересно.

Небольшое отступление, вот свежий видосик на ютуб-канале завода Алтайский трактор, как их Т-404 вытягивает застрявший на поле колесник с сеялкой.

Пожелаем заводу Алтайский трактор удачи, чтобы клиентов было по больше!

На этом всё, до скорых встреч!!!

Трактор Т-5.01 из Рубцовска. Новый уровень, по сравнению с Т-4А | В мире сельского хозяйства

Добрый день!

Многие годы звездой Алтайского тракторного завода был трактор Т-4А. Но со временем стало ясно, что он уже не отвечает требованиям времени. Конкуренты становились надежней и, что не мало важно, комфортнее. После развала СССР стало еще труднее. На рынке стали появляться тракторы иностранного производства. Кроме того, в сельском хозяйстве пошла тенденция по отказу от гусеничных тракторов в пользу колесных.

Стали востребованы более мощные тракторы. На АТЗ пытались обновить ассортимент тракторной техники. Т-4А превратился в Т-4А-01 с обновленной кабиной. Потом был Т-4.02 (402), который внутри оставался тем же Т-4А, несмотря на внешние изменения. Следующим этапом стал Т-4.04 (Т-404), который уже претерпел более кардинальные изменения. О них мы уже писали.

Пришло время, когда потребовалось разработать гусеничный трактор пятого тягового класса. Им стал Т-5.01 (или Т-501, как он упоминается в некоторых источниках).

Завершать проект уже пришлось небольшим компаниям, работавшим в бывших цехах уже мертвого Алтайского тракторного завода. Сегодня в интернете иногда мелькает реклама от Завода Алтайский трактор, предлагающего Т-501, что дает повод сделать вывод, что он производится и сейчас.

Трактор завершил эксплуатационные испытания в 2009 году в Алтайском МИС. Согласно протоколу испытаний разработчиком была заявлена компания ООО «Алтайский трактор».

Т-501 — трактор сельскохозяйственного назначения пятого тягового класса. Алтаец оснащается шестицилиндровым дизелем Д461-19И с непосредственным впрыском топлива и с газотурбинным наддувом и охлаждением наддувочного воздуха. Этот движок выдает 280 лошадиных сил.

По габаритам этот трактор также внушителен: длина — 6,28 м., ширина — 2,27 м., колея трактора — 1,74 м., высота 3,3 м. Масса трактора Т-501 — 11,5 тонны. Удельное давление на почву — 0,05 МПа.

Коробка передач механическая: 4 передачи назад и 8 вперед. Максимальная скорость для Т-501 — 15,5 км/ч (10 км/ч задний ход).

В испытательном протоколе Алтайского МИС есть запись, что по основной тяговой характеристике трактор можно отнести даже к тяговому классу 6. Но на тех же испытаниях коробка вызвала определенные нарекания, которые описаны в протоколе. Несмотря на высокую тягу трактор не способен работать с современными агрегатами, для которых требуется высокая скорость (до 12 км/ч.).

А всему виной неудачные передаточные числа коробки. Рабочими являются скорости до 7,5 км/ч, если работать быстрее, значительно снижается КПД. Это значительно сокращает перечень агрегатов, с которыми может работать Т-501. К настоящему моменту может и поправили этот недостаток, но подтвердить не могу. Новые тракторы из Рубцовска мне вживую не попадались. Но, я думаю, что определенные конструктивные изменения вносились. На сайте Завода Алтайский трактор указаны немножко другие скорости (передний ход — 3,63-16,36; задний — 5,54-10,72 км/ч.).

На том же испытании Т-501 сравнивался с К-701. И он показал положительные результаты в плане производительности и экономичности. Уступал лишь при работе с агрегатами, для которых требовались более высокие рабочие скорости.

Отличается компоновка трактора от предшественников. Кабина, и в частности, кресло оператора расположено максимально близко к центру массы трактора.

Рычаги для управления направлениям переехали под правую руку?

Рычаги для управления направлениям переехали под правую руку?

Оператор сидит ровно по центру, обеспечивается одинаковый обзор во всех направлениях. Обеспечена шумоизоляция, заявлено, что шум не более 75 дБА, что, несомненно, отличный результат.

Ходовая трактора больше не «бульдозерная». Это 10-опорная торсионная система.

На этом завершаем статью! Если было интересно, ставьте лайки! Жду ваших мнений про такой трактор и его будущее, ведь сегодня гусеничники не востребованы! До скорых встреч!!!

Гусеничный трактор Т-4А, созданный для работы на целинных землях Сибири

Т-4А – первая собственная разработка Алтайского тракторного завода. Эта модель предназначалась специально для работы на целинных землях Сибири; Казахстана и Средней Азии. Конструкция трактора была устроена таким образом, чтобы совладать с тяжелыми климатическими и почвенными условиями этих регионов. Эта модель получила широкое распространение в восточной части СССР, где нашла применение не только в сельском хозяйстве, но и на строительных и дорожных работах.

В основу конструкции трактора легли новейшие инженерные решения. На нем был установлен дизельный двигатель А-01М, разработанный Алтайским моторным заводом, позволявший развивать необходимую для работы в степных условиях мощность. Ходовая часть машины была выполнена из стали 35ГТРЛ. Этот новый прочный сплав был получен и производился прямо на АТЗ. Он обеспечивал гусеницам Т-4А большую надежность.

Сельскохозяйственная утопия

В 1971 году началась девятая пятилетка. На волне подъема народного хозяйства предыдущих лет власти стремились еще больше повысить темпы экономического роста. Перед колхозами и совхозами была поставлена задача значительно увеличить объемы производства зерна, картофеля, овощей и других культур. Производительность сельскохозяйственного труда должна была увеличиться почти в 1,5 раза, а себестоимость при этом снизиться.

Такие масштабные задачи требовали лучшего технического оснащения. Машиностроение стало важным направлением промышленного развития. Планировалось значительно увеличить объемы производства и поставок сельскохозяйственной техники. За пятилетку колхозы и совхозы должны были получить порядка 1,7 млн тракторов (в том числе 705 тыс. пахотных) и 1,5 млн прицепов к ним, 1,1 млн грузовых автомобилей, 87 тыс. экскаваторов, 82 тыс. бульдозеров, 42,5 тыс. скреперов, а также 541 тыс. зерновых, 230 тыс. силосоуборочных и 60 тыс. свеклоуборочных комбайнов.

Однако проблемы с сельскохозяйственной техникой не ограничивались ее малым количеством. Старые модели тракторов уже не отвечали требованиям нового пятилетнего плана. Перед разработчиками стояла задача создать машины большей мощности и производительности, которые могли бы обрабатывать поля на высоких скоростях. С новыми тракторами применяли комбинированные агрегаты, способные выполнять несколько операций за один проход. Одной из таких новых моделей стала Т-4А.

Первый алтайский трактор

Новую модель разработали на Алтайском тракторном заводе. Это предприятие было основано в 1942 году в Рубцовске на базе эвакуированного оборудования Харьковского и Сталинградского заводов. К началу 1960-х годов оно стало одним из крупнейших машиностроительных предприятий в СССР.

Первой собственной разработкой Алтайского завода стал гусеничный трактор Т-4. Он предназначался специально для рисовых и хлопковых полей среднеазиатских республик. Из-за особенностей климата и почв в этих регионах сельскохозяйственные работы на их землях были довольно трудоемкими и требовали больших затрат топлива. Новый трактор имел большую мощность, что позволяло ускорить и удешевить производство.

Согласно заданию Министерства сельского хозяйства Т-4 должен был положить начало целому семейству гусеничных машин. В 1966 году одна из ранних модификаций, Т-4М, была удостоена золотой медали на Международной выставке в Москве. Годом позже Алтайский завод был отмечен орденом Ленина за вклад в развитие советского машиностроения.

Несмотря на достигнутые успехи, разработчики завода продолжали совершенствовать конструкции выпускаемых тракторов. Одним из главных инженерных достижений АТЗ было получение А. И. Шведуновым новой марки низколегированной стали 35ГТРЛ. Этот сплав отличался исключительно высоким качеством и износостойкостью. Он нашел широкое применение в советском машиностроении. На Алтайском заводе новую сталь применяли для изготовления ходовой части тракторов, что позволило значительно повысить их надежность и, как следствие, экономическую эффективность.

В 1970-х годах происходит техническое переоснащение завода и одновременно с этим переход на производство усовершенствованной модели – Т-4А, в последствие отмеченной рядом наград.

На все случаи жизни

АТЗ производил четыре основных модификации трактора, отличавшихся поставляемым вместе с машиной оборудованием. Наиболее универсальной была модель Т-4А-С1. Она была оснащена агрегатами гидравлической навесной системы, механизмом для навешивания орудий и основными и выносными силовыми цилиндрами. Комплектация других модификаций была скромнее.

В модели С4 отсутствовали силовые цилиндры, а в С2 – еще и механизм навешивания. В модификации СЗ цилиндры были, но не было гидравлических агрегатов и, опять же, механизма для навешивания орудий.

Конструкторы Алтайского завода разработали также модель Т-4АП. В отличие от Т-4А, она предназначалась не для сельского хозяйства, а для применения в промышленности, в частности для мелиоративных и строительных работ. Чтобы приспособить трактор к новым операциям, инженеры оснастили его гидроцилиндрами привода и фронтальным отвалом. Т-4АП также имел механизм блокировки рессоры подвески, который позволял поддерживать точное позиционирование отвала.

Инженерные новшества

Т-4А – гусеничный трактор общего назначения. Он может работать как с навесными, так и с прицепными гидрофицированными орудиями. Основное предназначение Т-4А, как и его предшественника, – глубокая вспашка тяжелых почв, а также выполнение посева и уборки на повышенных скоростях.

Однако трактор мог действовать и в связке с бульдозерным оборудованием, что позволяло использовать его на транспортных, дорожных, землеройных и строительных работах. По своим техническим характеристикам Т-4А значительно превосходил свои колесные аналоги. Трактор можно было использовать круглый год: в зимний период — для задержания и накопления снега на пашне, в весенний — для работы на переувлажненных почвах.

Т-4А оснащен четырехтактным дизелем А-01М, усовершенствованной модификацией двигателя А-01, который ставился на Т-4. По сравнению с предшественником он позволяет развивать мощность 130 л. с. (против 110 л. с.) и имеет большую длину сцепления. К усовершенствованиям относится также система очистки воздуха, установленная на сам двигатель. Кроме того, его основные механизмы помещены в картер, что также защищает их от пыли и грязи.

Коробка передач Т-4А оснащена реверс-редуктором. Этот блок обеспечивает отключение трансмиссии от дизеля, что позволяет получить три диапазона передач: основной, пониженный и заднего хода. Кроме того, редуктор содержит электрическое блокировочное устройство, которое не дает запустить дизель при включенной передаче.

Сухие ленточные плавающего типа тормоза трактора позволяли тормозить машину при переднем и заднем ходе. Тормоза планетарного механизма обеспечивали плавные повороты трактора, остановочные – крутые и на месте. Тормозами солнечных шестерен тракторист управлял при помощи рычагов с гидроусилителями, остановочными — при помощи педалей.

Практические недостатки

Несмотря на оригинальные инженерные решения, отмеченные множеством наград, и широкое распространение в целинных районах Сибири и Казахстана, тракторы семейства Т-4 не пользовались особенной любовью колхозников. Хотя мощная тяга позволяла использовать их для распашки тяжелых орошаемых почв, конструкция трактора имела существенные недостатки.

Главным из них была полужесткая подвеска. Во-первых, вопреки намерениям разработчиков, она не позволяла трактору развивать большую скорость. Это делало его, по сути, пригодным только для пахотных работ, в летне-осенний период Т-4А простаивали. Модели-конкуренты Т-74 и Т-150, выпускаемые Харьковским тракторным заводом, развивали куда большую скорость и широко применялись для уборки урожая и других летних работ.

Во-вторых, зимой при распашке мерзлого грунта подвеска вызывала сильную тряску. В сочетании с громким шумом от двигателя это доставляло водителю существенные неудобства и даже представляло опасность для здоровья. Еще одним крупным недостатком была сложность трактора в ремонте и обслуживании. Так, например, для замены фрикционных лент поворотного механизма, которые довольно быстро изнашивались, нужно было снять топливный бак. Не отличались надежностью и гусеницы трактора.

Подпишись на наш Telegram-канал

Т-4 1964-1970 годов выпуска — технические характеристики, обзор, описание

Гусеничный трактор Т-4А можно назвать настоящим работягой, грозный трудяга сельскохозяйственной промышленности. О его задачах все детали сборки – расположение кабины и ее конструкция, форма кузова, а также на трактор Т-4А возможна установка различного навесного оборудования. Т-4А можно отнести к четвертом тяговому классу, так как он является реальным тяжеловозом. Он оснащен сильным двигателем, который дает возможность проводить глубокую вспашку, уборку сельхоз культур и полную культивацию.

Блок: 1/5 | Кол-во символов: 505
Источник: https://alttrac.ru/catalog/gusenichnye-traktora/traktor-t-4a

Особенности тракторов Алтай

    • Прочная и надежная конструкция
    • Универсальность – агрегаты можно использовать в любых сферах
    • Возможность применения навесок
  • Высокая проходимость, полная адаптация к отечественным условиям работы
  • Доступная стоимость.

Модельный ряд тракторов Алтай – это продуктивная техника, которая может применяться в разных сферах жизни. На предприятии создаются гусеничные тракторы, модели с неповоротным валом, а также универсальные агрегаты. Все такие тракторы можно использовать для работы на поле, перемещения грузов, расчистки дорог или строительства, засыпки ям, траншей. Оборудование дополнительно комплектуют рыхлителем, погрузчиком и другими навесками.

Блок: 2/4 | Кол-во символов: 677
Источник: http://1potraktoram.ru/traktory/altaj/

Двигатель

Модель двигателя

АМ-01

Количество цилиндров

6

Номинальная мощность при 1 600 об/мин

110 л.с.

Удельный расход топлива при номинальной мощности

185 г/л с*ч

Диаметр цилиндра, ход поршня

130, 140 мм

Рабочий объем цилиндров

11,15 л

Степень сжатия

16,5

Вес двигателя

1 000 кг

Гусеничный трактор оснащен 4-тактным дизельным двигателем производства Алтайского тракторного завода АМ-01 с неразделенной камерой. Силовой агрегат, в свою очередь, оборудован пусковым ДВС марки ПД-10М (10 л.с.) с электростартером. Пусковое топливо представляет собой смесь автомобильного бензина А-66 с дизельным маслом (соотношение 15:1). Модель силовой установки АМ-01 отличалась небольшим расходом топлива, но очень громкой работой.

Блок: 3/9 | Кол-во символов: 740
Источник: https://exkavator.ru/excapedia/technic/alttrakt-4

Оценка проекта

Тракторы семейства Т-4 были широко распространены в целинных районах Сибири и Казахстана. Их тяговооружённость позволяла выполнять пахоту тяжёлых орошаемых почв. Но, тем не менее, тракторы среди эксплуатационщиков заслужили преимущественно негативную оценку. Причин тому было несколько:

  • полужёсткая подвеска обеспечивала лишь очень малую скорость движения (до 9 км/ч), что делало тракторы по сути узкоспециализированными, пригодными только для пахоты, и в летне-осенний период они простаивали. В то же время более скоростные тракторы близких классов Т-74, ДТ-75 и, особенно, Т-150 широко использовались в летне-осенний период и для выполнения других работ;
  • полужёсткая подвеска в зимний период, при работе на мёрзлом грунте вызывала сильную тряску, причиняя дискомфорт механизатору;
  • гусеница трактора была недостаточно прочной и надёжной, что в сочетании опять таки с полужёсткой подвеской вызывало её частые разрывы;
  • для замены быстроизнашиваемых фрикционных лент поворотного механизма требовалось снятие топливного бака;
  • двигатель трактора отличался повышенной шумностью;
  • трактор был более сложен в обслуживании и ремонте по сравнению с ДТ-75.

Блок: 3/5 | Кол-во символов: 1162
Источник: https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%A2-4%D0%90

Т-4А

Трактор Т-4А по техническим характеристикам не сильно отличался от предшественника. На машинах стал применяться модернизированный дизель АМ-01М, который развивает мощность 130 л. с. при 1700 об/мин коленчатого вала. Особенностью конструкции является размещение камеры сгорания сферической формы в поршне. Система запуска и охлаждения не изменились. Коробка передач по заказу оснащалась 2-скоростным ВОМ, расположенным на задней крышке. Доработки конструкции привели к увеличению массы машины, которая составляет 8145 кг.

Гидравлика оснащена расходным баком, установленным под капотом двигателя. Давление в магистралях создается шестеренным насосом с приводом от коробки скоростей. Система навески комбинированная, собирается по схеме из 2 или 3 точек крепления. Распределение жидкости ведется отдельным прибором, смонтированным в кабине оператора. Главный гидравлический цилиндр способен создавать усилие до 9000 кг.

Выпускались модификации трактора Т-4А, предназначенные для промышленных работ. Модификации обозначались Т-4АП-1 и АП-2, соответственно отличались установкой ВОМ или его отсутствием. На усиленных лонжеронах рам тракторов промышленных модификаций имеются приваренные кронштейны, предназначенные для установки толкающих брусьев навесного оборудования. Из-за увеличения нагрузок усилена конструкция балансира рессоры. Производительность гидравлики увеличена в 2 раза, из-за этого применяется расходный бак большей емкости.

Металлическая кабина трактора оснащалась 2 сиденьями. Место оператора регулируется по положению и весу. Отопление работает по принципу забора потока воздуха, проходящего через радиатор двигателя. Подаваемый воздух очищается при помощи пылеотделителя. Площадь остекления кабины увеличена, внедрена термоизоляция на металлических панелях.

Блок: 3/6 | Кол-во символов: 1779
Источник: https://SpecMahina.ru/traktor/t-4.html

Технические характеристики

Многофункциональный гусеничный трактор Т-4 имеет идеальные для своего тягового класса габариты: 4650×1950×2840 мм. База Т-4 имеет длину в 252 см. Высота дорожного просвета составляет 371 мм.

Двигатель

Сейчас на рынке представлены в основном гусеничные тракторы модификации Т-4 А. Их мотор имеет мощность в 130 лошадиных сил. Он работает на дизельном топливе. Это значительно уменьшает потребление топлива, по сравнению с бензиновыми аналогами. Средний расход дизеля во время эксплуатации составляет 250 г/кВт-ч.


Двигатель А-01М трактора Т-4А

Топливный бак имеет объем в 320 литров. Благодаря этому трактор Т-4 может работать в автономном режиме на протяжении длительного периода времени (около 2-х смен). Заводится мотор при помощи электростартера с кабины оператора. Если по каким-либо причинам аккумулятор не дает искру, то привести в действие мотор можно при помощи ручного шнура.

Топливо

Трактор Алтаец использует 24 литра дизельного горючего при проведении работ в течение 1 часа. Чтобы он мог трудиться от 1 до 3 смен подряд, конструкторы поставили 320 литровый бак для хранения топлива.

Коробка передач

Крутящий момент передается с маховика двигателя на КПП, а оттуда уже на трансмиссию. Коробка передач установлена механическая: 8 ступеней для езды вперед, и 4 назад. Изменение направления езды происходит путем выключения бортового фрикциона.


Схема коробки передач трактора Т-4

Максимальная скорость составляет 9,32 км/ч. Это вызвано большим весом машины, гусеничным приводом и полужесткой подвеской. Колесные агрегаты позволяют развивать большую транспортировочную и эксплуатационную скорость.

Ходовая и трансмиссия

Гусеничный модуль предоставляет владельцам трактора Т-4 много возможностей применения.

Трактор Т-4 может приводить устройство в движение по мокрым почвам, броду, наклонной плоскости и снежному покрову. Фактически, если есть земля, то эта машина способна проехать там.

Рама трактора Т-4А представляет собой жесткую лонжеронную конструкцию. В состав ходовой части входят амортизаторы и две тележки с гусеничными полотнами.

Гидравлическая система

Гусеничные трактора Т-4 имеют ряд преимуществ перед колесными моделями. Они могут с легкостью использовать в качестве бульдозера или экскаватора. На Алтайцах установлена гидравлическая система раздельного типа, которая позволяет управлять отдельно передним и задним навесным оборудованием. Сцепка предусматривает возможность подсоединения двух и трехточечной навески: фрезы, плуги, культиваторы, бороны, отвалы, рыхлители, сеялки, косилки и корчеватели.


Схема гидравлической системы раздельного типа

Управление передней навеской (бульдозером или экскаватором) происходит непосредственно с кабины оператора. Зачастую Т-4 используется в качестве трелевочника, поскольку обладает значительной мощностью и проходимостью. Осуществляться эта процедура может двумя способами: погрузки стволов на специальные прицепы или привязыванием бревна непосредственно к трактору.

Блок: 4/12 | Кол-во символов: 2948
Источник: https://spectekhnika.info/traktor-t-4-altaec/

Модельный ряд и модификации Т-4

Оригинальный Т-4 выпускался АТЗ только до 1970 года. В дальнейшем мир увидели две распространенные модификации техники, а именно:

  • Т-4А — выпускался с 1970 до 1998 года. Работает на шестицелиндровом двигателе марки Д130. Отличается высокой производительностью и ходовыми качествами. Основное назначение данной машины, по-прежнему, пахотное;
  • Т-4АП — имеет дизельный двигатель, гидроцилиндры и шарниры, есть возможность установки отвала в передней части корпуса устройства.

Сейчас на рынке сельхозтехники можно легко отыскать обе модели в подержанном состоянии, с разными пробегами, но лидирует всё же флагманская модель Т-4.

Блок: 4/9 | Кол-во символов: 655
Источник: https://FermerInform.ru/traktor-t-4-obzor/

Основные модификации

В целом проект получился удачным. Но сама базовая модель предлагалась в 4 вариантах комплектации. Кроме того, была одна модификация для промышленной эксплуатации.

Основные варианты комплектации:

  • С1 — дополнительная навесная гидросистема, два силовых цилиндра и система дополнительной подвески.
  • С2 — комплектация С1 без дополнительных цилиндров и системы дополнительной подвески.
  • С3 — только дополнительные гидроцилиндра.
  • С4 — навесная гидросистема и система дополнительной подвески.

Модификация для промышленных целей имела маркировку Т-4АП и не имела систему подвески для оборудования сзади. Чаще всего использовалась как бульдозер.

Поэтому на вопрос сколько весит трактор Т-4 однозначно сказать сложно. Все зависит от комплектации.

Технические характеристики машины

Хотя за время выпуска применялось четыре варианта силовых агрегатов, но технические характеристики трактора Т-4 «Алтаец» оставались неизменными.

Технические характеристики Значение
Номинальная мощность двигателя 95,6 кВт (130 л.с.)
Частота вращения двигателя при номинальной мощности 1700 об/мин
Диаметр цилиндра 130 мм
Ход поршня 140 мм
Удельный расход топлива 251,7 г/кВт*ч (185 г/э.л.с.*ч)
Топливо для основного двигателя дизельное ГОСТ 305-73
Пускового двигателя смесь автомобильного бензина А72 или А76 с моторным маслом в пропорции 1:20
Емкость топливного бака 320 л
Колея 1384 мм
Продольная база 2522 мм
Дорожный просвет 320 мм
Ширина башмаков 420 мм
Удельное давление на почву 0,04МПа (0,4 кгс/см2)
Габаритные размеры 4684х1952х2545 мм
Вес трактора Т-4 в снаряженном состоянии 8145 кг
Электрооборудование 12 В

Коробка передач трактора Т-4 с реверс-редуктором позволяет выбрать из 8 скоростей вперед и 4 назад. Коробка оказалась настолько удачным агрегатом, что она ни разу не подвергалась модернизации.

Трактор Т-4 в разрезе

Машина имеет стандартную компоновку. Конструкция собрана на сварной раме из двух коробчатых лонжеронов. Спереди лонжероны соединены брусом.

Двигатель крепится на трех точках. За двигателем последовательно стоят муфта сцепления, кардан, реверс-редуктор, коробка ПП, конечные передачи.

Муфта сцепления сухая, двухдисковая, постоянно замкнутая. Управление педалью через гидроусилитель.

Тормоза сухие, ленточные.

Подвеска маятниковая, с одной поперечной рессорой, одним балансирным валом и двумя балансирными тележками.

Кабина металлическая, крепится на два амортизатора. Имеется пассажирское сидение. Кабина обогревается, оборудована системой вентиляции и фильтрации воздуха. Все приборы и управление аналоговое, механическое.

Требования ТО

Ежедневное техническое обслуживание машины сводится к регулярному осмотру, чистке, смазке, подтяжки механизмов. Периодичность более сложного обслуживания зависит от времени работы, сроков эксплуатации, изношенности отдельных узлов и агрегатов. Производитель рекомендует производить:

  • ТУ №1 через каждые 60 мото-часов или 30 дней работы, если за этот срок наработка будет менее 60 часов.
  • ТУ №2 через каждые 240 часов.
  • ТУ №3 через каждые 960 часов.

Поскольку модель трактора уже не выпускается, при приобретении подержанной машины стоит обращать на следующие вещи:

  • Состояние шлангов гидросистемы.
  • Наличие протечек на фланцах насосов гидросистемы.
  • Состояние крестовины карданного вала — при больших нагрузках или длительном сроке работы она может быть разбита.
  • Степень износа маховика сцепления трактора Т-4.
Заключение

Несмотря на возраст разработки, технические характеристики трактора Т-4 позволяют ему и сегодня с успехом эксплуатироваться. Надежная конструкция, пусть и не самая удобная в обслуживании. Хорошая мощность, проходимость, невысокая цена расходников и запчастей. Большая распространенность в районе Сибири и Казахстана, хорошие тяговые характеристики. Хороший вариант для небольших фермерских хозяйств, поскольку трактор создавался именно с прицелом на тяжелую работу в данном секторе.

Трактор Т-4 в работе на поле

Дата публикации:

Апрель 14, 2018

Блок: 3/3 | Кол-во символов: 3855
Источник: https://ospetstehniki.ru/articles/tehnicheskie-harakteristiki-traktora-t-4.html

Технические характеристики

Т-4 отличается характерными техническими особенностями, например, полужесткая подвеска и низкая максимальная скорость (около 9 км/час) обусловливают определенный режим работы, к которому необходимо привыкнуть. Функционал гусениц на некоторых моделях, судя по отзывам с фермерских форумов, является слабым местом данной техники.

Сильной стороной модели и по сей день считается мощный двигатель и способность работать на абсолютно любой почве.

Вес и габариты устройства

  • Вес трактора Т-4 составляет 7750 кг. При этом тяговое усилие составляет 4000 кг/с.
  • Вес модификаций: Т-4А (8145 кг.), Т-4АП (9000 кг.).
  • Габаритные размеры Т-4: 4684 х 1952 х 2545 мм.
  • Клиренс 34 см.
  • Длина продольной базы 2552 мм.

Тип двигателя, тип привода

Трактор Т-4 оснащен четырехцилиндровым дизельным двигателем мощностью 95,6 лошадиных сил (130 кВт). Марка двигателя А-01М. Тип охлаждения — жидкостный.

Для того, чтобы завести данную технику на устройство был установлен меньший бензиновый двигатель на 10 л.с. Он запускается с водительского места активацией электростартера либо приведением в движение шнура маховика вручную.

Двигатель А-01

В зимнее время запуску двигателя помогает декомпрессор. Вместимость топливного бака — 32 литра.

Рекомендуемое топливо для двигателя дизельное, по ГОСТ 305-73. Топливо для пускового бензинового двигателя: смесь автомобильного бензина 72 и 76 (ГОСТ 2084-77) с маслом моторным дизельным (соотношение 20:1). Удельный расход топлива — 251 г/кВт/час.

Коробка передач трактора Т-4, трансмиссия и ходовая часть

Полужесткая подвеска позволяет трактору развивать максимальную скорость 9 км/час. Отличительные особенности:

  • присутствует тряска при езде;
  • заднее расположение ведущей шестерни;
  • крепление блока гусеничной тележки производится на неподвижную ось.

Подобная система креплений позволяет использовать такое навесное оборудование фронтального типа, как отвал, выравниватель почвы, снегопах.

КПП у Т-4 механическая, оснащена реверс-редуктором. Тип шестерен в редукторе и КПП — цилиндрические, с прямыми зубьями. Трактор Т-4 работает на 8 передних и 4 задних передачах. Тормозная система ленточного типа.

Кабина

Гусеничный трактор Т-4 оснащен кабиной на два места. В кабине установлен обогреватель, система вентиляции. Расположение кабины — на амортизаторах. Сиденье с пружинами, основная функция которых — подавление тряски при езде. Кабина герметичного типа, пыленепроницаемая, с хорошим обзором за счет широкого лобового стекла. На боковых частях кабины расположены ручки для удобства запрыгивания оператора в машину.

Управление трактором

Трактор управляется с помощью пускового двигателя марки ПД-10У. Управление можно производить рычагом декомпрессора — дистанционно, с водительского места. Если аккумулятор разряжен, завести трактор можно вручную, приведя в движение шнур маховика. Перед водителем на специальной панели размещены топливные датчики, манометр, рычаг управления; в нижней части кабины располагаются тормозные педали.

Блок: 5/9 | Кол-во символов: 2975
Источник: https://FermerInform.ru/traktor-t-4-obzor/

Навесное оборудование

Навесное оборудование переднего типа крепления устанавливается на трактор Т-4 с помощью специальных пластин, зафиксированных на специальных участках рам. Пластины приварены с внешней стороны и предназначаются для установки бульдозерных отвалов, ковшей и других навесок.

Задняя навеска подразумевает крепление навесного оборудования по трехточечной и двухточечной схеме. Тип гидравлической системы — раздельно-агрегатный. ВОМ на устройстве — зависимого типа с отбором мощности от реверсивного редуктора КП. Благодаря широким возможностям крепления навесок, перечень орудий, с которыми может работать Т-4, огромен.

Основной перечень навесного оборудования для техники подобного типа и тягового класса это:

  • плуг четырехкорпусный;
  • борона дисковая;
  • отвал бульдозерный;
  • отвал снегоуборочный;
  • сеялки любого типа;
  • культивационная фреза;
  • снегопах;
  • щетка уборочная/коммунальная;
  • навесной кран-манипулятор;
  • вилы для сена;
  • рассеиватели удобрений;
  • картофелекопатели грохотные/вибрационные;
  • сажалки картофеля промышленного типа.

При выборе навесного оборудования можно обратить внимание не только на навески производства Алтайского тракторного завода, но и на оборудование для тракторов гусеничного типа других производителей (тяговый класс четвертый, промышленное и полупрофессиональное применение).

Например, можно использовать большое количество навесного оборудования от тракторов ХТЗ и МТЗ (ХТЗ-201, МТЗ 2022, МТЗ-2103, Беларус 2022).

Блок: 6/9 | Кол-во символов: 1450
Источник: https://FermerInform.ru/traktor-t-4-obzor/

Кабина водителя

Модель Т-4 оснащалась металлической закрытой двухместной кабиной с вентиляцией и обогревом. Несмотря на то что сиденье оператора устанавливалось на пружины, а сама кабина имела амортизаторы, при передвижении машины по мерзлому грунту механизатор испытывал сильную тряску. Плюс ко всему кабина не имела какой-либо шумоизоляции, поэтому работать на тракторе было некомфортно.

Блок: 7/9 | Кол-во символов: 390
Источник: https://exkavator.ru/excapedia/technic/alttrakt-4

Отзывы владельцев

Сергей, Краснодарский край:

Земля в моем регионе сложная для работы, глинистая. Если глубоко не пропахивать, на третий год уплотняется и урожайность падает сильно. Дизельный Т-4 мне давал в среднем обработать 15 га в осенний день, ну еще имеет значение количество влаги в земле. Из навесок использую отвальный плуг. Из недостатков на Т-4: забивается грязью ходовая. Вообще для сложных почв хорошо бы иметь и трактор поменьше, полегче, не такой тяжелый, но более быстрый.

Блок: 9/9 | Кол-во символов: 489
Источник: https://FermerInform.ru/traktor-t-4-obzor/

Видео

Видео с канала — «Будни Анатолия Пряхина»

Блок: 9/9 | Кол-во символов: 48
Источник: https://exkavator.ru/excapedia/technic/alttrakt-4

Обзор

Блок: 11/12 | Кол-во символов: 5
Источник: https://spectekhnika.info/traktor-t-4-altaec/

Кол-во блоков: 21 | Общее кол-во символов: 17678
Количество использованных доноров: 8
Информация по каждому донору:
  1. https://spectekhnika.info/traktor-t-4-altaec/: использовано 2 блоков из 12, кол-во символов 2953 (17%)
  2. https://SpecMahina.ru/traktor/t-4.html: использовано 1 блоков из 6, кол-во символов 1779 (10%)
  3. https://FermerInform.ru/traktor-t-4-obzor/: использовано 4 блоков из 9, кол-во символов 5569 (32%)
  4. https://ospetstehniki.ru/articles/tehnicheskie-harakteristiki-traktora-t-4.html: использовано 1 блоков из 3, кол-во символов 3855 (22%)
  5. https://exkavator.ru/excapedia/technic/alttrakt-4: использовано 3 блоков из 9, кол-во символов 1178 (7%)
  6. https://ru.wikipedia.org/wiki/%D0%A2-4%D0%90: использовано 1 блоков из 5, кол-во символов 1162 (7%)
  7. http://1potraktoram.ru/traktory/altaj/: использовано 1 блоков из 4, кол-во символов 677 (4%)
  8. https://alttrac.ru/catalog/gusenichnye-traktora/traktor-t-4a: использовано 1 блоков из 5, кол-во символов 505 (3%)

Артикул № PM-B-01-4A-T-11, Измерение позиционирования, миниатюрный тип На Hiwin Corporation

AFGHANISTANAland IslandsALBANIAALGERIAAMERICAN SAMOAANDORRAANGOLAANGUILLAANTARCTICAANTIGUA И BARBUDAARGENTINAARMENIAARUBAAUSTRALIAAUSTRIAAZERBAIJANBAHAMASBAHRAINBANGLADESHBARBADOSBELARUSBELGIUMBELIZEBENINBERMUDABHUTANBOLIVIABOSNIA И HERZEGOWINABOTSWANABOUVET ISLANDBRAZILBRITISH ИНДИЙСКИЙ ОКЕАН TER.BRUNEI DARUSSALAMBULGARIABURKINA FASOBURUNDICAMBODIACAMEROONCANADACAPE VERDECAYMAN ISLANDSCENTRAL АФРИКАНСКИЕ REPUBLICCHADCHILECHINACHRISTMAS ISLANDCOCOS (Keeling) ISLANDSCOLOMBIACOMOROSCONGOCOOK ISLANDSCOSTA RICACOTE D’IVOIRECROATIACUBACYPRUSCZECH REPUBLICDEMO.НАРОДНАЯ РЕСП. КОРЕЯДемократическая Республика КонгоДАНИЯДЖИБУИДОМИНИКАДОМИНИКАНСКАЯ РЕСПУБЛИКАКВАДОРЕГИПТЕЛЬ САЛЬВАДОРЭКВАТОРИАЛЬНАЯ ГВИНЕАЭРИТРЕЯЭСТОНИЯЭФИОПИАФЭРСКИЕ ОСТРОВАФОЛКЛЕНДСКИЕ ОСТРОВАФЕД. ШТАТЫ MICRONESIAFIJIFINLANDFRANCEFRENCH GUIANAFRENCH POLYNESIAFRENCH ЮЖНОЕ TER.GABONGAMBIAGEORGIAGERMANYGHANAGIBRALTARGREECEGREENLANDGRENADAGUADELOUPEGUAMGUATEMALAGuernseyGUINEAGUINEA-BISSAUGUYANAHAITIHEARD И Mc Donald ISL.HONDURASHONG KONGHUNGARYICELANDINDIAINDONESIAIRANIRAQIRELANDIsle из ManISRAELITALYJAMAICAJAPANJerseyJORDANKAZAKHSTANKENYAKIRIBATIKUWAITKYRGYZSTANLAOSLATVIALEBANONLESOTHOLIBERIALIBYAN АРАБСКОГО JAMAHIRIYALIECHTENSTEINLITHUANIALUXEMBOURGMACAOMACEDONIAMADAGASCARMALAWIMALAYSIAMALDIVESMALIMALTAMARSHALL ISLANDSMARTINIQUEMAURITANIAMAURITIUSMAYOTTEMEXICOMONACOMONGOLIAMontenegroMONTSERRATMOROCCOMOZAMBIQUEMYANMARNAMIBIANAURUNEPALNETHERLANDSNETHERLANDS ANTILLESNEW CALEDONIANEW ZEALANDNICARAGUANIGERNIGERIANIUENORFOLK ISLANDNORTHERN MARIANA ISL.NORWAYNOT ON THE LISTOMANPAKISTANPALAUPalestinian TerritoryPANAMAPAPUA НОВЫЙ GUINEAPARAGUAYPERUPHILIPPINESPITCAIRNPOLANDPORTUGALPUERTO RICOQATARREPUBLIC ИЗ KOREAREPUBLIC OF MOLDOVAREUNIONROMANIARUSSIAN FEDERATIONRWANDASaint BarthelemySAINT Киттс и NEVISSAINT LUCIASaint MartinSAINT ВИНСЕНТА & GRNDNSSAMOASAN MARINOSAO Tome И PRINCIPESAUDI ARABIASENEGALSerbiaSEYCHELLESSIERRA LEONESINGAPORESLOVAKIASLOVENIASO. ГА и СО. SNDWCH ISL.СОЛОМОНОВЫ ОСТРОВАСОМАЛИЮЖНАЯ АФРИКАКАСПАНИЯРИ ЛАНКАСТЬ. ЭЛЕНАСТ. ПЬЕР И МИКЕЛОНСУДАНСУРИНАМЕСВАЛЬБАРД И ОСТРОВ ЖАН-МАЙЕН.СВАЗИЛЕНДШВЕЦИЯВЕЙЦАРИЯСИРИЙСКАЯ АРАБСКАЯ РЕСПУБЛИКАТАЙВАНТАДЖИКИСТАНТАИЛАНДТИМОР-ЛештиТОГОТОКЕЛАВТОНГАТРИНИДАД И ТОБАГОТУНИСИАТТУРКМЕНИСТАНТУРКС И КАЙКОСТУВАЛУУГАНДАУКРАИНАСОЕДИНЕННЫЕ АРАБСКИЕ ЭМИРАТЫСОЕДИНЕННОЕ КОРОЛЕВСТВОСОЕДИНЕННАЯ РЕСП. ТАНЗАНИЯМалые отдаленные острова СШАСОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИАУРУГВАЮЗБЕКИСТАНВАНУАТУВАТИКАНСКИЙ ГОРОДВЕНЕСУЭЛАВЬЕТНАМВИРГИНСКИЕ ОСТРОВА (БРИТАНСКИЕ)ВИРГИНСКИЕ ОСТРОВА (США)ОСТРОВА УОЛЛИС И ФУТУНАЗАПАДНОЕ СОМОАМЕНЗАМБИАЗИМБАБВЕ

Леди-пионерки не могут поколебать Хантсвилл

PRAIRIE GROVE — Во время баскетбольного турнира среди девочек округа 4A-1 в Prairie Grove, West No.Во вторник, 18 февраля, 4 Джентри встретились с 3-м номером в Ист-Хантсвилле, и «Леди Пионерз» проиграли со счетом 52–39.

Баскетбольная команда девочек Джентри (18-10) победила Прейри Гроув (9-16, 3-9) со счетом 47-37 в предыдущую пятницу. С победой Lady Pioneers обогнали Prairie Grove и заняли четвертое место в турнирной таблице дивизиона 4A-1 West. Таким образом, вместо того, чтобы сыграть в Берривилле с номером 4 Востока в понедельник, 17 февраля, Lady Pioneers подождали еще один день, прежде чем начать турнир против Хантсвилля.

Джентри сделал девять трехочковых бросков и столько же игроков забил в матче с Прейри Гроув, но в игре с Хантсвиллем не было атаки. «Леди Иглз» удвоили победу над «Джентри», ведя 11–5 после одной четверти, но «Леди Пионер» приблизились к тайму, 20–16, и все еще были в пределах досягаемости, отставая 30–22 в конце третьей четверти.

Несмотря на то, что четвертая четверть была их лучшей, когда Леди Пионер набрала 17 очков, Хантсвилл с лихвой компенсировал этот результат, набрав 22 очка.Леди Пионеры были всего 13 из 23 на линии штрафных бросков. Рэнди Джо Болинджер, один из лучших бомбардиров Джентри, не попал в кольцо. Арья Рединг и Джейден Уилмут набрали по 10 очков за команду Джентри, завершившую сезон с общим результатом 18-10.52 -10): Джейден Уилмут 3 4–4 10, Арья Рединг 3 4–6 10, Ариэль Никс 2 4–8 8, Меледи Оуэнс 2 0–0 6, Хайди Винсон 1 1–2 3, Кинли Хейс 1 0–0 2, Кэти Эллис 0 0–3 0.Тоталы 12 13-23 39.

Хантсвилл: (8-20): Танна Уилсон 8 2-5 20, Джози Сиск 5 0-0 12, Аддисин Рут 3 0-0 9, Эмили Бьюкенен 2 0-0 4, Ханна Борн 1 1–2 3, Кендра Пур 0 2–4 2, Кинли Мопин 1 0–0 2. Тоталы 20 5–11 52.

Трехочковые голы — Хантсвилл 7 (Рут 3, Сиск 2, Уилсон 2) . Джентри 2 (Оуэнс 2).

Спорт от 20.05.2020

T4A-S01M-B01L — SIEMON COMPANY — TERA 4PR

Политика доставки и исполнения

При заказе продуктов у Anixter.com, заказ обрабатывается в течение одного-двух рабочих дней. Заказы, полученные в нерабочие дни, обрабатываются на следующий рабочий день.

У вас есть несколько вариантов доставки посылок: стандартная доставка от 5 до 7 рабочих дней, от 2 до 3 рабочих дней или на следующий рабочий день.

Заказы Anixter.com доставляются на адреса в пределах США. Заказы Anixter.com в настоящее время не доставляются по адресам за пределами США или военным/правительственным подразделениям APO/FPO. Мы также не можем отправить на адреса почтовых ящиков.Если вы хотите отправить товар по адресу за пределами США или в военное/государственное учреждение, обратитесь к местному торговому представителю Anixter, чтобы обсудить возможные варианты.

Кроме того, Anixter.com предлагает вариант «Меньше грузовика» «LTL» для продуктов, которые не могут быть доставлены посылкой. Для продуктов, которые будут доставляться LTL, вам будет предоставлен набор аксессуаров на выбор, чтобы предоставить Anixter дополнительные условия доставки, такие как доставка на дом, доставка внутрь, задняя дверь или ограниченный доступ.

  • Доставка по месту жительства. Плата за доставку по месту жительства применяется к поставкам на дом или в частную резиденцию, включая места, где бизнес ведется из дома, или к любой отправке, в которой грузоотправитель указал адрес доставки как место жительства.
  • Внутренняя доставка — по запросу грузовой перевозчик выгружает грузы из или в места, которые не находятся рядом с трейлером, например, торговые центры или офисные здания. Лифт должен быть доступен для обслуживания этажей выше или ниже трейлера.
  • Задняя дверь — грузовой перевозчик предоставляет услуги задней двери, если это необходимо, для погрузки и разгрузки груза, когда погрузочно-разгрузочные доки недоступны.
  • Места с ограниченным доступом — место с ограниченным доступом — это место, где получение или доставка ограничены или ограничены.

Стоимость доставки рассчитывается на основе выбранного вами варианта доставки и оплачивается вами в момент отправки.

Семафорин 4A стабилизирует фенотип регуляторных Т-клеток человека через плексин B1

Введение

Астма представляет собой сложное мультигенное и многофакторное заболевание, проявляющееся различными формами тяжести (1, 2).Считается, что аллергическая форма этого заболевания инициируется и управляется клетками Th3-типа и цитокинами (1–4). Аллергия является основным предрасполагающим фактором для развития астмы у чувствительных к аллергенам, генетически предрасположенных лиц (1–4). Заболевание характеризуется одышкой, хрипами, кашлем, снижением потока воздуха на выдохе и гиперреактивностью дыхательных путей к неспецифическим бронхоконстрикторам (1–4). Сложные механизмы возникновения и прогрессирования астмы широко изучались в течение нескольких десятилетий, и многие научные открытия использовались в до- и клинических условиях в качестве терапевтических средств для иммунотерапии заболевания (5–9).Несмотря на эти значительные успехи в исследованиях и терапии, рост заболеваемости астмой является всемирным явлением, и в настоящее время нет лекарства от этой болезни (10).

Регуляторные Т-клетки (Treg) представляют особый интерес для потенциальной клеточной терапии аллергической астмы, поскольку они прямо и специфически подавляют эффекторные Th3-клетки, тем самым снижая или даже отменяя тканевые эффекты, вызванные сенсибилизацией аллергеном (6, 11–13). Поверхностные и внутриклеточные маркеры Treg-клеток в настоящее время хорошо определены (11–14), что позволяет их изолировать и размножать in vitro для последующего использования в иммунотерапии (15, 16).Молекула Foxp3, которая определяет приверженность линии клеток Treg, была в центре внимания при обнаружении и характеристике клеток Treg. Регуляция экспрессии этой молекулы различными факторами играет важную роль в дифференцировке, размножении клеток Treg и их способности выполнять супрессивную активность (11–17). Исследования на мышиных моделях показали, что один из членов белков семейства нейроиммунных семафоринов (Sema), Sema4A, критически регулирует стабильность и функцию клеток Treg мыши (17, 18).Delgoffe (17) показал, что Sema4A, экспрессируемый иммунными клетками, функционально взаимодействует с одним из своих рецепторов, а именно нейропилином 1 (NRP-1), на клетках Treg, и это взаимодействие лиганд-рецептор усиливает экспрессию Foxp3 и супрессивную функцию клеток Treg. Совсем недавно Lynch и коллеги (18) продемонстрировали, что плазмоцитоидные дендритные клетки (pDC) служат источником Sema4A при воспалительных заболеваниях легких. Истощение pDC in vivo предотвращало экспансию клеток NRP1 + Treg, что приводило к тяжелому бронхиолиту, вызванному пневмовирусом, и последующей восприимчивости к астме.Эти находки подтверждают наличие источника Sema4A в моделях рака у мышей, где pDC включает большинство Sema4A-экспрессирующих инфильтрирующих опухоль клеток (17). Таким образом, оба исследования показали, что мышиные клетки NRP-1 + Treg нуждаются в Sema4A, обеспечиваемом другими иммунными клетками, для эффективного выполнения своей регуляторной функции.

Ранее мы исследовали роль двух нейроиммунных препаратов Sema, Sema4A и Sema4D, при аллергической астме in vivo. Мы продемонстрировали, что эти два различных члена семейства белков Sema класса IV оказывают противоположное влияние на тяжесть астмы (19, 20).У мышей Sema4A -/- наблюдался усиленный ответ на провокацию аллергеном, который включал усиление эозинофильной инфильтрации дыхательных путей, локальную секрецию цитокинов Th3 в легких, гиперплазию бронхиальных эпителиальных клеток, гиперреактивность дыхательных путей на провокацию метахолином и содержание аллерген-специфических антител в сыворотке (19). . Напротив, мыши Sema4D -/- продемонстрировали снижение инфильтрации аллергических воспалительных клеток в легких, содержание Th3 в легких и провоспалительных цитокинов, а также гуморальные антиаллергенные ответы (20).Обострение воспалительной реакции легких у мышей Sema4A -/- сопровождалось значительно более низким количеством клеток Treg в селезенке и легких, тогда как у мышей Sema4D -/- это было противоположным (19, 20). Лечение мышей Sema4A -/- рекомбинантным Sema4A (rSema4A) привело не только к значительному снижению аллергических реакций дыхательных путей, но и к увеличению числа Treg-клеток в легких (21). Все эти наблюдения свидетельствуют о существовании петли положительной обратной связи между клетками Sema4A и Treg, которая контролирует аллергический воспалительный ответ.

В настоящее время механизмы, с помощью которых Sema4A регулирует функцию Treg-клеток при аллергической астме, неясны. Было показано, что один из семи существующих рецепторов Sema4A, а именно Tim-2, экспрессируется на мышиных Th2-клетках и критически регулирует Th3-ответ в условиях экспериментальной астмы (21–23). Однако человеческий гомолог Tim-2 еще не идентифицирован (24). Точно так же, хотя экспрессия другого рецептора клеточной поверхности для Sema4A, NRP-1, была обнаружена на мышиных Treg-клетках (17), человеческие Treg-клетки не экспрессируют NRP-1.

Таким образом, мы стремились определить рецептор для Sema4A на клетках Treg человека, который потенциально может регулировать опосредованное клетками Treg подавление аллергических воспалительных реакций дыхательных путей человека. С этой целью мы исследовали клеточные линии HuT78 и HuT102 и первичные РВМС человека для окрашивания специфическими антителами к Treg клеточной поверхности и внутриклеточным молекулам и последующего анализа методом проточной цитометрии. Ранее было показано, что клетки HuT78 и HuT102 демонстрируют фенотип зрелых Th, экспрессирующие молекулы CD3 (25, 26) и CD4 (26) и секретирующие различные провоспалительные цитокины и цитокины Th-типа (27).Ранее было показано, что одна из этих клеточных линий, HuT102, экспрессирует маркер клеток Treg Foxp3 (28).

Мы обнаружили, что rSema4A увеличивает выживаемость клеток HuT в культуре и стабилизирует фенотип клеток HuT102, подобный клеткам Treg. Мы также наблюдали функции rSema4A, стабилизирующие клетки Treg, для клеток HuT CD4 + и клеток Treg, полученных из РВМС человека. Далее мы приводим доказательства того, что Plexin B1 экспрессируется на человеческих Т-клетках и Treg-клетках. Он функционирует как критический рецептор Sema4A на клетках Treg человека, который способствует стабильности и выживанию клеток Treg, индуцированных Sema4A.Необходимы дальнейшие исследования, определяющие эффекты Sema4A на другие клеточные линии и первичные клетки, а также молекулярные механизмы антиапоптотического действия Sema4A, чтобы подтвердить потенциал rSema4A в качестве терапевтического средства для лечения астмы и других хронических воспалительных заболеваний.

Материалы и методы

Клеточные линии

Клеточные линии HuT78 и HuT102 были приобретены в Американской коллекции типовых культур (ATCC) (ATCC CRMTIB161 и ATCC TIB162 соответственно). Аутентичность обеих клеточных линий была подтверждена основной лабораторией биополимерной геномики Медицинской школы Университета Мэриленда путем типирования коротких тандемных повторов с использованием системы Promega Geneprint 10.Эти клеточные линии были щедро предоставлены лабораторией доктора А. Банерджи и содержались в полной RPMI (cRPMI) (RPMI-1640 [Lonza]), 10% инактивированной нагреванием FBS (Atlanta Biologicals), 5% L-глютамина (Lonza), 5% пируват натрия (Lonza), 5% пенициллин-стрептомицин (17-609E; Lonza), 5% Eagle’s MEM–заменимые аминокислоты (Life Technologies), буфер HEPES (1M, Sigma), 2 мкл 2-ME/100 мл среды) для роста клеток и пассажей между сбором клеток и проточным цитометрическим анализом.

РВМС

В экспериментах использовали три источника РВМС.Образцы крови человека были получены от здоровых добровольцев (протокол HP-00052083 Institutional Review Board доктора Голдинга) или приобретены у STEMCELL Technologies (Tukwila, WA), а РВМС были выделены с помощью градиентного центрифугирования с использованием не содержащего эндотоксина Ficoll-Paque (GE Healthcare). Свежевыделенные РВМС также были щедро предоставлены лабораторией доктора С. Строума (кафедра оториноларингологии, хирургии головы и шеи, Медицинская школа Университета Мэриленда).

Анализ цитотоксичности лактатдегидрогеназы

Клетки HuT78 и HuT102 культивировали с лизисным буфером или без него для определения спонтанной и максимальной активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) с использованием набора для анализа цитотоксичности лактатдегидрогеназы (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL) в соответствии с инструкциями производителя. инструкции.Положительный контроль LDH, cRPMI и бессывороточные контроли RPMI были включены в анализы. Цитотоксичность выбранного реагента измеряли с использованием упомянутого выше набора в соответствии с протоколом производителя анализа цитотоксичности, опосредованной химическим соединением.

Культуры клеток in vitro

Клетки HuT78 и HuT102 и РВМС помещали в 24-луночные планшеты для культур тканей (1 × 10 6 клеток на лунку) и инкубировали в стандартном тканевом инкубаторе (Thermo Fisher Scientific) с 5% CO 2 при 37°C с любой средой отдельно (cRPMI), человеческим белком rSema4A [100 нг или 1 мкг, Abnova), анти-PlexinB1 Ab (20 мкг/мл, клон EC-6.9 (29)], очищенный ультра-LEAF мышиный IgG1 (20 мкг/мл; клон MOPC-21, BioLegend) или их комбинация. При необходимости РВМС предварительно обрабатывали анти-PlexinB1 Ab в течение первых 30 мин культивирования, а затем наносили указанные выше рекомбинантные белки. В отдельных экспериментах Т-клетки CD4 + выделяли из РВМС путем отрицательной селекции с использованием набора для обогащения Т-клеток EasySep Human CD4+ (STEMCELL Technologies) и культивировали in vitro либо с rSema4A, либо с mIgG1 в cRPMI. Клетки собирали через 48 ч, супернатанты клеточных культур собирали и хранили при -80°C для дальнейшего анализа.

Для следующих экспериментальных условий РВМС выделяли из цельной периферической крови человека, собранной с ЭДТА (STEMCELL Technologies).

CD4 + Т-клетки были получены из РВМС путем отрицательной селекции, как описано выше, и лишены естественных клеток Treg с использованием CD25 MicroBeads II (Miltenyi Biotec) и магнита для разделения клеток (STEMCELL Technologies). CD4 + CD25 истощенные клеток высевали (130 000 клеток на лунку) в 96-луночные планшеты для культур тканей с U-образным дном (Costar), стимулированные 5 мкг/мл связанного с планшетом анти-CD3 Ab (OKT3, BioLegend), 1 мкг/мл растворимого антитела к CD28 (BioLegend) и совместного культивирования только с cRPMI, рекомбинантным человеческим (rh)IL-2 (100 МЕ/мл; Peprotech), rhTGF-β (5 нг/мл; R&D Systems) или оба, в присутствии или в отсутствие rhSema4A (100 нг/мл).CD4 + CD25 истощенные клеток собирали через 6 дней, и живые клетки анализировали с помощью проточной цитометрии на экспрессию маркеров CD3, CD4, CD25 и Foxp3 с использованием коммерческих антител, перечисленных в разделе проточной цитометрии.

CD4 + CD25 обогащенные Т-клетки были получены из РВМС путем выделения клеток CD4 + с использованием негативной селекции, начиная со смеси CD4 человека + для обогащения Т-клеток (набор EasySep; STEMCELL Technologies) с последующим обогащением CD25 с CD25 MicroBeads II и колонкой MS (Miltenyi Biotec).Обогащенные CD4 + CD25 клеток высевали (400 000 клеток на лунку) в 48-луночные планшеты для тканевых культур (Falcon, Becton Dickinson Labware) и совместно культивировали с rhSema4A (100 нг/мл) с rhIL-2 или без него (100 МЕ). /мл). Клетки собирали через 48 часов и анализировали с помощью проточной цитометрии на экспрессию маркеров CD3, CD4, CD25 и Foxp3 на живых клетках с использованием коммерческих антител, перечисленных в следующем разделе.

В тесте подавления клеток Treg, изолированные CD4 + CD25 + CD127 низкий Treg-клетки (500 000 клеток в мл) и меченные CFSE CD4 + CD25 Т-ответчик на мл) совместно культивировали в регрессивной пропорции (клетки Treg:клетки Tresp; 1:1, 1:3 и 1:9) в 96-луночных планшетах с U-образным дном (Costar) в конечной концентрации 100 000 клеток на лунку с rhSema4A или без него. (100 нг/мл) в течение 3 дней.CD4 + CD25 + CD127 низкий Treg-клетки получали из клеток крови человека, выделенных на Ficoll (GE Healthcare) РВМС, инкубируя со смесью для положительной селекции CD25, затем смесью для обогащения Т-клеток CD4 и затем смесью для истощения CD127 , высокая (все являются компонентами EasySep Human CD4 + CD127 low CD25 + Набор для выделения регуляторных Т-клеток от STEMCELL Technologies) с использованием быстрых сфер между наборами и декстрановых сфер на заключительном этапе процесса выделения клеток для выбросьте магнитные и декстрановые шарики.Все этапы выделения клеток выполняли в соответствии с протоколом производителя набора. Маркировку CFSE клеток Tresp проводили с использованием набора CellTrace CFSE Cell Proliferation Kit (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя. Клетки культивировали в среде для размножения Т-клеток ImmunoCult-XF и стимулировали 2,5 мкл/лунку активатора Т-клеток ImmunoCult Human CD3/CD28 (оба от STEMCELL Technologies). Процент подавления пролиферации клеток Tresp для каждой дозы клеток Treg рассчитывали с использованием обычного метода, где [100 — (% разделенных клеток Tresp, культивируемых отдельно/% разделенных клеток Tresp в культурах с клетками Treg) × 100] = % подавления (30).

Чистоту выделенных клеток перед культивированием in vitro оценивали с помощью проточной цитометрии для всех описанных выше параметров.

Проточная цитометрия

Клетки собирали из культур, промывали и поддерживали в буфере MACS (Miltenyi Biotech) во время экспериментов. Клетки окрашивали маркером жизнеспособности в соответствии с инструкциями производителя (набор Thermo Fisher Scientific LIVE/DEAD Fixable Aqua Dead Cell Stain) с последующей инкубацией с Fc-блоком (BD Pharmingen) и затем специфическими антителами к соответствующим внеклеточным маркерам, таким как CD3. -FITC, CD4-PE-Cy7, NRP-1-аллофикоцианин, Sema4A-PE, Helios-PE (все от BioLegend) и CD25-аллофикоцианин (eBioscience).Для окрашивания внутриклеточных маркеров использовали набор буферов для окрашивания Foxp3/Transcription Factor (eBiosciences) для фиксации и пермеабилизации клеток в соответствии с инструкциями производителя с последующей инкубацией с Foxp3–eFluor 450 и Helios-PE или -PacificBlue (все от BioLegend). Абс. Соответствующие контрольные антитела изотипа (мышиный IgG1-PE, мышиный IgG2a-аллофикоцианин, хомячий IgG-PacificBlue (все три от BioLegend), мышиный IgG1-eFluor 450 (eBioscience) использовали в отдельных экспериментальных пробирках вместе с выбранными маркерами клеточной поверхности с неинтерферирующими флуорохромными метками. .Для визуализации Plexin B1 с помощью проточной цитометрии мышиные антитела против PlexinB1 (клон EC-6.9) объединяли с антителами против IgG2a мыши PE-Cy7 (eBioscience) в двухэтапной процедуре окрашивания с 1-часовым временем инкубации для каждого этапа. Двухэтапная процедура окрашивания также использовалась для обнаружения NRP-2 на клеточной поверхности, где mAb NRP-2 служило в качестве первичного антитела (или мышиное моноклональное антитело IgG2b в качестве изотипического контроля), а козий антимышиный IgG-аллофикоцианин — в качестве вторичного антитела. (все три от R&D Systems). После окончательной промывки клетки, помещенные в буфер MACS, собирали и анализировали с помощью проточного цитометра BD LSRFortessa.Программное обеспечение FlowJo использовалось для гейтирования живых клеток и их дальнейшего анализа.

Измерения IL-2 в супернатантах клеточных культур

Супернатанты культур РВМС собирали и хранили в замороженном состоянии при температуре -80°C до определения содержания IL-2 в сэндвич-ИФА в Центре цитокинов Центра инновационных биомедицинских ресурсов Медицинский факультет Университета Мэриленда.

Статистический анализ

Статистические различия между различными экспериментальными установками были определены в соответствии с Prism 7.03 (GraphPad) Студенческий парный тест t . Данные показаны как среднее относительное количество соответствующих ячеек ± SEM для нормально распределенных наборов данных. При уровне p < 0,05 сравниваемые наборы данных считались статистически значимыми.

Результаты

Клетки HuT78 и HuT102 характеризуются как T-эффекторные клетки и Treg-подобные лимфомы/лейкемии соответственно

последовательный анализ данных.После исключения мертвых клеток на основании их позитивности по AmCyan мы проанализировали экспрессию маркеров CD3, CD4 и CD25 на клеточной поверхности, поскольку обе клеточные линии ранее характеризовались как зрелые Th-клетки (27). Обе клеточные линии оказались CD4-позитивными; однако они различались по экспрессии других маркеров (рис. 1). Клетки HuT78 представляли собой клетки Sema4A + и Helios + , но без экспрессии CD25 и Foxp3. Клетки HuT78 демонстрировали низкие уровни плексина B1 рецептора Sema4A, но не имели NRP-1.Напротив, клетки HuT102 были Sema4A low и Helios + и экспрессировали CD25 и Foxp3. Клетки HuT102 экспрессировали плексин B1 и не имели NRP-1. Эти различия были постоянными и значительными. В клетках HuT102 по сравнению с клетками HuT78 отсутствовала экспрессия Foxp3 (1,7 ± 0,2% против 36,1 ± 1,6%, p < 0,001), но они были Helios + (77,4 ± 4,1% против 35,8 ± 1,5%, p < 0,003) (рис. 1). Экспрессия CD25 также различалась между этими клеточными линиями (относительное количество клеток CD25 + составило 17.7 ± 1,1% против 35,6 ± 2,1%, клеток HuT78 против HuT102, соответственно, p < 0,0025). Высокая экспрессия Sema4A на клетках HuT78 (91,1 ± 0,4%) была связана с низким уровнем PlexinB1 (19,4 ± 1,2%), тогда как для клеток HuT102 это было противоположным (от 5,0 ± 1,2% и 72,4 ± 2,1% соответственно, p <0,00015 и 0,00035, соответствующие значения разницы между клеточными линиями HuT78 и HuT102). Клетки Foxp3 + HuT102 коэкспрессировали Helios и Sema4A (35,8 ± 1,4% и 32.4 ± 3,2% соответственно). Обе клеточные линии были отрицательными в отношении NRP-1. Следовательно, аналогично тому, что сообщалось ранее (28), клеточная линия HuT102 демонстрирует фенотип, подобный клеткам Treg (CD4 + CD25 + Foxp3 + ), хотя процент положительных результатов варьировался во время культивирования клеток. В зависимости от клеточного цикла во время сбора урожая экспрессия Foxp3 в клетках HuT102 может достигать 55%. Экспрессия CD25 на обеих клеточных линиях также варьировалась от анализа к анализу, в диапазоне от 1,1 ± 0,5% (рис. 1А) до 17.от 7 ± 1,1% до 32,8 ± 0,5% для клеток HuT78 и от 21,5 ± 0,2 (рис. 1А) до 35,6 ± 2,1% до 90,7 ± 0,1% для клеток HuT102. Эти результаты могут свидетельствовать о том, что клетки HuT102 демонстрируют фенотипические характеристики клеток Treg, происходящих из экстимуса. Однако ранее было показано, что другой маркер Treg-клеток тимического происхождения, специфичная для Treg-клеток деметилированная область FOXP3, отсутствует в клетках HuT102 (31). Следовательно, хотя клетки HuT102 экспрессируют CD25 и Foxp3, относительно низкая экспрессия Helios и отсутствие специфичной для Treg-клеток деметилированной области могут свидетельствовать о том, что они больше напоминают периферически индуцированные Treg-клетки (32).

РИСУНОК 1.

Различные уровни экспрессии клеточной поверхности и внутриклеточных маркеров клетками HuT78 и HuT102. Клетки

( A ) Hut78 и ( B ) HuT102 выдерживали в cRPMI до сбора с последующим окрашиванием для анализа проточной цитометрии с использованием специфических антител для указанных клеточных поверхностей и внутриклеточных маркеров. Мертвые клетки исключали из анализа на основании потери ими целостности мембраны и, таким образом, включения красителя мертвых клеток. Показанные данные представляют собой живые клетки HuT на точечных диаграммах и гистограммах.На гистограммах уровни экспрессии специфического маркера показаны черной линией на прозрачном фоне, тогда как индивидуальное окрашивание Ab контрольного изотипа маркера показано сплошным серым цветом. Показаны данные анализа проточной цитометрии одного из трех экспериментов.

Периферическая кровь человека CD4

+ Т-клетки, включая Treg-клетки, экспрессируют рецептор Sema4A Plexin B1

2А). Мертвые клетки исключали с помощью окрашивания живых/мертвых клеток. Мы обнаружили, что около 70% всех жизнеспособных PBMC человека экспрессировали Plexin B1, и большинство (более 90%) Plexin B1-позитивных клеток были CD3 + T-клетками. Практически все Т-клетки CD3 + экспрессировали плексин B1, и ни одна из них не экспрессировала NRP-1. На точечных диаграммах CD3 и PlexinB1 мы также наблюдали, что две CD3-негативные популяции клеток экспрессируют уровни Plexin B1 от промежуточных (промежуточных) до низких (рис. 2A).

РИСУНОК 2.

клеток Treg человека экспрессируют PlexinB1.

РВМС человека были получены от здоровых доноров и окрашены специфическими антителами к указанным поверхностным и внутриклеточным маркерам. Мертвые клетки исключали из анализа на основе исключения фиксируемого красителя. ( A ) Клетки CD3 + человека экспрессируют плексин B1, но не NRP-1. ( B ) Репрезентативные точечные графики и графики плотности помечены стратегиями стробирования. Показана гистограмма окрашивания PlexinB1 для клеток CD4 + CD25 high Foxp3 + .Окрашивание, специфичное для маркера, показано черной линией на прозрачном фоне, тогда как окрашивание изотипического контрольного антитела показано сплошным серым цветом. Данные являются репрезентативными из трех разных экспериментов.

Ранее сообщалось, что мышиные Treg-клетки не экспрессируют Sema4A (17). Однако они экспрессируют NRP-1, и сообщалось, что взаимодействие Sema4A-NRP-1 играет роль в стабильности и функционировании клеток Treg мыши (17, 18). Поскольку в клетках Treg человека отсутствует NRP-1 (33), а клетки HuT102, подобные клеткам Treg, экспрессируют Plexin B1, мы исследовали, являются ли первичные клетки Treg человека Plexin B1 + .Жизнеспособные клетки CD3 + повторно определяли по экспрессии маркеров CD4 и CD25, а затем популяцию клеток CD3 + CD4 + CD25 high исследовали на экспрессию Foxp3 (фиг. 2B). Затем мы специально исследовали экспрессию Plexin B1 на клетках Treg человека. Этот подход определил, что все клетки CD3 + CD4 + CD25 high Foxp3 + экспрессируют высокие уровни плексина B1.

Экзогенный Sema4A способствует выживанию клеток HuT и стабилизирует фенотип клеток Treg в клетках HuT102

В отличие от клеточной линии HuT78 известно, что клеточная линия HuT102 медленно размножается с различной степенью общей жизнеспособности (34).Тем не менее, эффекты различных ингибиторов на жизнеспособность и пролиферацию этих лейкемических клеточных линий широко оценивались in vitro для определения новых терапевтических агентов для пациентов с кожными Т-клеточными лимфомами (35–38). Мы исследовали влияние экзогенного белка rSema4A на клеточные линии HuT. После 48 часов культивирования in vitro с rSema4A клетки собирали, окрашивали и анализировали с помощью проточной цитометрии для анализа жизнеспособности клеток. Экзогенный Sema4A незначительно повышал выживаемость клеток HuT в культуре (рис.3). Низкой дозы rSema4A (100 нг) было достаточно для увеличения выживаемости клеток HuT78 на 14 %, тогда как для клеток HuT102 выживаемость увеличивалась на 10 % по сравнению с клетками, культивируемыми только в среде, а более высокая доза еще больше усиливала этот эффект. .

РИСУНОК 3.

Экзогенный Sema4A увеличивает выживаемость клеток HuT.

Живые клетки на точечных диаграммах проточной цитометрии были отобраны для дальнейшего анализа на основе исключения красителя мертвых клеток. Показано графическое представление объединенных данных из трех независимых экспериментов с клеточными культурами in vitro.

Поскольку гибель клеток в течение 48 часов в культурах in vitro была относительно высокой, мы исследовали их базовую выживаемость с помощью анализа высвобождения ЛДГ. Обе линии клеток HuT продемонстрировали спонтанное высвобождение ЛДГ (OD 490 = 0,469 ± 0,002 и 0,477 ± 0,011 для 10 000 клеток HuT78 и HuT102 соответственно). Затем мы провели анализ потенциальной токсичности реагентов, используемых в процедурах культивирования клеток. Результаты ясно показывают, что ни один из использованных реагентов не проявляет цитотоксической активности по отношению к клеточным линиям HuT (дополнительная фиг.1).

Далее мы проанализировали, влияет ли rSema4A на уровни экспрессии маркеров Т-клеток. Мы обнаружили, что rSema4A увеличивает относительное количество CD25-экспрессирующих клеток в обеих клеточных линиях (фиг. 4А, 4В). Стимулирующий эффект rSema4A оказался более сильным на клетках CD25 low HuT78, поскольку относительное количество клеток CD25 + CD4 + увеличилось с 6% в культурах со средой до 30% в культурах с 1 мкг rSema4A, хотя интенсивность окрашивания оставалась низкой.Поскольку клетки HuT102 уже были CD25 + , стимулирующий эффект rSema4A на экспрессию CD25 на клетках HuT102 был более скромным (от 21,1 до 34,3%, культуры со средой и 1 мкг rSema4A соответственно).

РИСУНОК 4.

rSema4A увеличивает относительное количество клеток CD4 + CD25 + HuT.

Клетки культивировали in vitro в cRPMI с rSema4A или без него в течение 48 часов. Клетки анализировали на экспрессию CD25 ( А и В ). Точечные графики живых клеток HuT (A) и гистограммы (B) показывают уровни экспрессии маркера CD25.(B) Положительный маркер на клетках HuT в культурах с rSema4A показан черной линией с гистограммами на прозрачном фоне или гистограммой сплошного черного цвета (для 100 нг и 1 мкг rSema4A соответственно), тогда как экспрессия CD25 на клетках, культивируемых только в среде, показана сплошного серого цвета.

Ранее сообщалось, что маркером активированных Treg-клеток является Helios, а не Foxp3 (39). Выше мы показали, что клетки, подобные эффекторным клеткам HuT78 T, но не клетки, подобные клеткам HuT102 Treg, экспрессируют высокие уровни Helios (рис.1А, 1Б). Более того, поскольку сообщалось, что Helios и Foxp3 коэкспрессируются и совместно регулируются в клетках Treg человека (40), мы далее исследуем влияние rSema4A на экспрессию этих двух молекул в клеточных линиях HuT. Неожиданно экспрессия Helios была дополнительно увеличена в клетках Helios high HuT78, но не в клетках Helios low HuT102 (данные не показаны). Это открытие контрастирует с паттерном экспрессии Foxp3 между двумя клеточными линиями (фиг. 5А, 5В). Foxp3 не был обнаружен в клетках HuT78 (рис.1А), и на его отсутствие не влияло воздействие rSema4A (рис. 5А, 5Б). Более того, в клетках HuT78 Foxp3 не был связан с экспрессией Helios. Дальнейший анализ исследования коэкспрессии CD25 и Foxp3 в клеточной линии HuT102 продемонстрировал повышенный выход клеток CD4 + , CD25 + и CD25 + Foxp3 + при воздействии Sema4A (рис. 5A). Эти результаты предполагают, что Sema4A способствует выживанию HuT и усиливает фенотип клеток Treg клеток HuT102.

РИСУНОК 5.

rSema4A увеличивает выход клеток CD25 + Foxp3 + в клеточной линии HuT102, но не в клеточной линии HuT78.

Клетки HuT культивировали в cRPMI с rSema4A или без него в течение 48 часов. Собранные клетки окрашивали на внутриклеточный Foxp3. Уровни экспрессии Foxp3 в клетках CD4 + HuT показаны на соответствующих точечных диаграммах CD25/Foxp3 и CD4/Foxp3 ( A ) и гистограммах ( B ), тогда как уровни Foxp3 в клетках, подвергшихся воздействию rSema4A, показаны прозрачными цвета накладываются на серые сплошные гистограммы, представляющие окрашивание Foxp3 в клетках, культивируемых без rSema4A. Данные являются репрезентативными из трех разных экспериментов.

Sema4A увеличивает количество Treg-клеток в культурах PBMC

Чтобы определить, оказывает ли экзогенный rSema4A эффект на Treg-клетки периферической крови человека, подобный тому, который мы наблюдали для клеток HuT, мы установили in vitro культуры PBMC человека с экспериментальными настройками, как описано выше для клеточных линий HuT. Воздействие Sema4A не влияло на выживаемость клеток в культурах по сравнению с культурами клеток только на среде и не изменяло количество CD4 + Т-клеток, но незначительно увеличивало количество CD4 промежуточных CD3 отрицательных моноцитов (8.78% от общего количества РВМС в культурах со средой по сравнению с 12% клеток в культурах со 100 нг rSema4A) (рис. 6А; дополнительная рис. 2). Кроме того, rSema4A проявлял высокоспецифичное действие на Treg-клетки, так как увеличивал относительное количество клеток CD4 + Foxp3 + среди РВМС с 3,9 ± 0,6 % в культурах со средой до 6,2 ± 0,1 % в культурах со 100 нг rSema4A и 6,6 ± 1,4% в культурах с 1 мкг rSema4A, p < 0,03 rSema4A по сравнению со средой (рис. 6Б, верхний ряд; рис.6С). Хотя процент CD4 + CD25 + Т-клеток не различался между культурами РВМС с rSema4A или без него, относительное количество CD4 + CD25 high Foxp3 high Treg усиливалось под действием rSema4A в диапазоне от 14,8 ± 1,9 % в культурах со средой до 27,3 ± 1,9 % с 100 нг rSema4A ( p < 0,045), 36,7 ± 2,3 % с 1 мкг rSema4A ( p < 0,04) и 17,7 ± 3,0 % с контролем белок mIgG1 (рис. 6Б, средний ряд; рис.6С). Было обнаружено, что эти клетки Treg окрашиваются положительно в отношении плексина B1 (рис. 2). Следует отметить, что эти клетки Treg не экспрессировали NRP-1 (фиг. 6B, нижний ряд).

РИСУНОК 6.

Воздействие rSema4A увеличивает число клеток Treg в культурах PBMC человека in vitro.

РВМС человека культивировали с или без внешнего rSema4A в течение 48 часов. Мышиный IgG1 служил нерелевантным контролем белка. После сбора количество Т-клеток CD4 + и Treg-клеток оценивали с помощью проточной цитометрии с использованием специфических антител к соответствующим клеточным поверхностным и внутриклеточным молекулам.Клетки CD3 + CD4 high , показанные на точечных диаграммах верхней панели ( A ), дополнительно отбирали для оценки относительного количества клеток Treg в каждой экспериментальной установке in vitro ( B ). Клетки Foxp3 high гейтировали на точечных участках CD4 + Foxp3 + . ( C ) Экспрессия CD25 + на клетках CD4 + Foxp3 high Treg изображена на соответствующих графиках плотности клеток, тогда как экспрессия NRP-1 (точечные графики) показана выше.Данные являются репрезентативными из трех независимых экспериментов. * р < 0,04, ** р < 0,045.

Sema4A увеличивает количество CD4

intermed Sema4A + Nrpl1 + моноцитов в культурах

Хотя Т-клетки человека были однозначно отрицательными по NRP-1, мы идентифицировали популяцию клеток, экспрессирующих NRP-1, среди CD4 intermed CD3 отрицательных клеток, экспрессия CD25 которых была от низкой до отрицательной, но которые экспрессировали Sema4A (дополнительная фиг.3), демонстрируя нашу способность обнаруживать NRP-1 человека на РВМС. Экспрессия NRP-1 на этих клетках дополнительно повышалась при воздействии Sema4A. Эти клетки не экспрессировали ни Helios, ни Foxp3 (данные не показаны).

Экзогенный Sema4A потенцирует Treg-клетки в CD4

+ Культуры Т-клеток

Поскольку эффекты Sema4A наблюдались в тотальных РВМС, а не-Т-клетки также экспрессировали Plexin B1, возможно, Sema4A повышал стабильность Treg-клеток косвенным образом. . Чтобы определить, действовал ли Sema4A непосредственно на Т-клетки, мы выделили Т-клетки CD4 + из РВМС путем отрицательной селекции.CD4 + Т-клетки культивировали с возрастающими дозами rSema4A в течение 48 ч, и количество клеток CD4 + CD25 high Foxp3 + в культурах оценивали с помощью проточной цитометрии. Мы наблюдали дозозависимое усиление стабильности клеток Treg внешним Sema4A (рис. 7). Следовательно, Sema4A повышает стабильность клеток Treg, действуя на Т-клетки CD4 + .

РИСУНОК 7.

rSema4A потенцирует Treg-клетки в культурах Т-клеток CD4 + .

CD4 + Т-клетки выделяли из РВМС путем отрицательной селекции с использованием соответствующего набора антител и магнита для разделения клеток, полученных от STEMCELL Technologies.Их культивировали in vitro с или без внешнего rSema4A в течение 48 часов. Затем клетки собирали и оценивали на экспрессию специфического маркера для обнаружения клеток Treg. Относительное количество клеток CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg отбирали на соответствующих графиках плотности клеток в настройках трехкратной повторности клеточной культуры для каждого условия культивирования.

Sema4A так же эффективен, как TGF-β, в индукции новых Treg-клеток в CD4

+ CD25 T-клеточные культуры

Периферические CD4 + CD25 T-клетки могут быть индуцированы до Foxp3 регуляторный фенотип посредством существенного действия TGF-β (13, 14, 41).Хорошо известно, что для образования оптимального количества Treg-клеток из CD4 + CD25 Т-клеток требуется стимуляция с помощью TCR, IL-2R и TGF-βR (13, 14, 41, 42). Чтобы определить, влияет ли Sema4A на образование новых Treg-клеток и усиливает ли он эффект классической стимуляции индукции Treg-клеток, мы культивировали человеческие CD4 + CD25 , истощенные T-клеток, со связанными на планшете антителами против CD3 и растворимыми антигенами. -CD28 Ab в присутствии TGF-β или IL-2 или в комбинации с rSema4A (фиг.8). Клетки собирали и относительное количество клеток CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg оценивали с помощью проточной цитометрии. Стимуляция CD4 + CD25 истощенных Т-клеток только IL-2 в сочетании с участием TCR и костимуляцией продемонстрировала 13,6% клеток Foxp3 + среди клеток CD4 + CD25 + , тогда как стимуляция TGF-β показала 19 % (рис. 8). Как и ожидалось, наиболее эффективным индуктором клеток CD4 + CD25 + Foxp3 + была комбинация IL-2 плюс TGF-β (25.5% клеток CD4 + CD25 + также были Foxp3 + ). Интересно, что добавление rSema4A к CD4 + CD25 обедненным культурам Т-клеток было столь же эффективным, как и использование только TGF-β, и даже более эффективно, чем стимуляция IL-2. Однако rSema4A не действовал синергетически ни с одним из стимулов (рис. 8). Эти результаты позволяют предположить, что rSema4A обладает некоторым скромным потенциалом для регуляции индукции индуцируемых клеток Treg (iTreg).

РИСУНОК 8.

rSema4A индуцирует клетки iTreg в культурах Т-клеток CD4 + .

CD4 + Т-клетки выделяли из РВМС путем отрицательной селекции, как описано в подписи к рис. 7, и удаляли природные Treg-клетки с использованием микробусин CD25. CD4 + CD25 истощенные клетки стимулировали связанными с планшетами анти-CD3 Ab плюс растворимыми анти-CD28 Ab и культивировали в течение 6 дней в cRPMI с добавлением IL-2 и/или TGF-β с rSema4A или без него. Относительное количество CD4 + CD25 + Foxp3 + Т-клеток оценивали в трех условиях проточной цитометрии для каждого условия культивирования клеток и оценивали соответствующие статистические данные.Среднее относительное количество клеток iTreg ± SEM в трех условиях культивирования показано под каждым графиком плотности. Обратите внимание, что rSema4A был столь же эффективен, как TGF-β1 в индукции клеток iTreg. * p <0,006, IL-2 + TGF-β по сравнению либо с TGF-β, либо только с IL-2. ** p < 0,035, Sema4A по сравнению с IL-2. *** p <0,02, ИЛ-2 + Sema4A по сравнению с одним ИЛ-2.

Sema4A не оказывает прямого действия на Treg-клетки в CD4

+ CD25 обогащенные клеточных культур

Затем мы попытались определить, оказывает ли экзогенный Sema4A прямой фенотип-стабилизирующий эффект на Treg-клетки в культурах in vitro.Ранее опубликованное исследование с использованием мышиных клеток Treg показало отсутствие такого эффекта (17). Он пришел к выводу, что Sema4A, экспрессируемый CD4 + Т-клетками, связывает NRP-1 на клетках Treg, чтобы усилить их выживаемость и супрессивную функцию, поскольку клетки Treg с дефицитом NRP1 не смогли подавить рост опухоли и образование метастазов в легких на мышиных моделях меланомы, аденокарциномы. и тимома. Однако мы показали, что Treg-клетки человека не экспрессируют NRP-1, но экспрессируют Plexin B1 (рис. 2B, 6B). Следовательно, возможна прямая петля стимуляции Sema4A-Plexin B1 для Treg-клеток человека.Мы выделили клетки CD4 + из РВМС человека и обогатили их клетками Treg с помощью позитивной селекции с помощью микробусин CD25. Затем клетки Treg совместно культивировали либо с низкой (100 нг/мл), либо с высокой (1 мкг/мл) дозой rSema4A, либо с IL-2 с низкой дозой Sema4A или без нее (фиг. 9). Мы не обнаружили существенных различий в экспрессии Foxp3 в клетках CD25 + в присутствии или в отсутствие rSema4A. Хотя экзогенный IL-2 значительно потенцировал относительное количество клеток CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg, как и ожидалось, rSema4A не стимулировал каких-либо дополнительных эффектов.Эти результаты свидетельствуют о том, что способность rSema4A повышать процентное содержание Treg-клеток в общем числе РВМС или изолированных популяциях CD4 + Т-клеток может быть связана с косвенным механизмом.

РИСУНОК 9.

rSema4A не оказывает прямого действия на клетки Treg в культурах in vitro.

CD4 + CD25 обогащены T-клеток (Treg-клетки) были выделены из РВМС и культивированы in vitro с возрастающими концентрациями rhSema4A с rhIL-2 или без него. Культуры клеток Treg с одной средой или средой с добавлением rhIL-2 служили в качестве отрицательного и положительного контроля для Sema4A-опосредованной индукции клеток Treg, соответственно.

Sema4A напрямую не усиливает супрессивную активность Treg-клеток in vitro отсутствие rSema4A и анализировали пролиферацию клеток Tresp путем анализа разбавления CFSE (фиг. 10A, 10B). Клетки Treg подавляли пролиферативную способность клеток-ответчиков, меченных CFSE, в зависимости от дозы клеток.Средний процент подавления пролиферации клеток Tresp для каждой дозы клеток Treg показан на фиг. 10C. Добавление Sema4A к культурам клеток Treg не усиливало их супрессивную активность. Скорее, добавление rSema4A устраняло супрессивную активность клеток Treg, и клетки Tresp пролиферировали. В отсутствие клеток Treg rSema4A не усиливал пролиферативную реакцию респондеров, меченных CFSE.

РИСУНОК 10.

rSema4A не усиливает супрессивную активность клеток Treg in vitro.

CD4 + CD25 истощенные Т-клетки (Tresp) были помечены 5 мкМ CFSE, а затем стимулированы CD3/CD28 T-клеточным активатором при совместном культивировании с уменьшающимся количеством CD4 + CD25 + CD127 907 900 Клетки Treg в присутствии rhSema4A. ( A ) показаны репрезентативные гистограммы CFSE для пролиферации клеток Tresp, где каждый цикл клеточного деления четко различается. ( B ) показаны различные наложения данных о пролиферации клеток Tresp в трех экземплярах каждой культуры из двух экспериментов.( C ) показывает средний процент подавления пролиферации клеток Tresp клетками Treg для каждой комбинации клеток Treg:клетки Tresp. * p <0,035 для каждого из пяти поколений клеток, клетки Tresp по сравнению с клетками Treg: клетки Tresp 1:1. ** и *** p <0,05 для пяти поколений клеток, клетки Treg: клетки Tresp 1:1 и 1:9 по сравнению с клетками Treg: клетки Tresp 1:1 и 1:9 плюс rSema4A.

Плексин B1 регулирует Sema4A-опосредованную стабильность и выживаемость Treg-клеток Культуры РВМС за 30 мин до добавления rSema4A.Как и в предыдущих экспериментах, относительное количество клеток Treg увеличилось с 3,2 ± 0,4% в культурах РВМС только со средой до 5,6 ± 0,2% при добавлении rSema4A (фиг. 11А). Plexin B1 Ab заблокировал это увеличение до 2,7 ± 1,0%. (рис. 11А). Следовательно, нейтрализация рецептора Plexin B1 перед добавлением rSema4A к культурам PBMC предотвращала стабилизирующий эффект rSema4A на Treg-клетки человека.

РИСУНОК 11.

Блокирование плексина B1 перед применением rSema4A снижает относительное количество клеток Treg и секрецию IL-2 в РВМС человека.

Антитело, блокирующее плексин B1 человека, добавляли в отдельные лунки за 30 минут до добавления rSema4A или нерелевантного белка. PBMC культивировали с или без внешнего rSema4A в течение 48 часов. ( A ) Относительное количество клеток CD4 + CD25 high Foxp3 + оценивали в шести настройках проточной цитометрии для каждого условия культивирования клеток, и оценивали соответствующие статистические данные. ( B ) Супернатанты клеточных культур из трех отдельных экспериментов оценивали на содержание IL-2 с помощью сэндвич-ELISA.Обратите внимание на положительную корреляцию между экзогенной дозой Sema4A и продукцией IL-2 PBMC.

Поскольку эффект rSema4A на стабилизацию клеток Treg оказался косвенным, мы предположили, что rSema4A может стимулировать клетки PlexinB1 + к продукции факторов, способных повышать стабильность клеток Treg. Таким образом, мы провели анализ влияния rSema4A на секрецию IL-2 PBMC (фиг. 11B). Мы обнаружили, что rSema4A увеличивает продукцию IL-2 дозозависимым образом. Эффект rSema4A на содержание IL-2 в супернатантах клеточных культур полностью устранялся добавлением анти-PlexinB1 Ab.Кроме того, анти-PlexinB1 Ab подавляли базальные уровни IL-2.

Обсуждение

В этом отчете мы показываем, что Sema4A оказывает эффект, стабилизирующий фенотип клеток Treg, определяемый как увеличение процентного содержания и числа клеток CD4 + CD25 + Foxp3 + , на CTLC, РВМС человека популяции и CD4 + Т-клеток. Этот Sema4A-зависимый эффект был опосредован, по крайней мере частично, рецептором Plexin B1, поскольку наблюдаемое повышение стабильности Treg было подавлено предварительной обработкой клеток Plexin B1-нейтрализующим Ab.В этом исследовании мы показываем, что плексин B1 рецептора Sema4A экспрессируется на разных уровнях в линиях клеток HuT и во всех Т-клетках CD3 + среди РВМС, включая клетки Treg. В отличие от мышиных Treg-клеток, где было показано, что экспрессия NRP-1 коррелирует с экспрессией Foxp3 и супрессивной функцией Treg-клеток (43), мы не обнаружили экспрессии NRP-1 на периферических Т-клетках человека.

Ранее было показано, что клетки HuT78 и HuT102 демонстрируют зрелый фенотип Th, экспрессируя молекулы CD3 (25, 26) и CD4 (26) и секретируя различные провоспалительные цитокины и цитокины Th-типа (27).В этом исследовании, одновременно с ранее определенными маркерами Т-клеток, мы дополнительно исследовали клетки HuT на экспрессию маркера Treg-клеток Foxp3 (44). Предыдущее исследование показало, что CTCL принимает супрессивный фенотип клеток Foxp3 + Treg после взаимодействия с апоптотическими CTLC, нагруженными DCs (45). Другие молекулы, экспрессируемые клетками Treg, такие как CD25 (46) и Helios (47), также оценивались. Кроме того, нас интересовал другой непрямой клеточный маркер Treg, а именно NRP-1 (17, 43), а также его лиганд Sema4A (17) и экспрессия другого рецептора Sema4A, Plexin B1 (48–51), на HuT. клетки и РВМС.Действительно, мы обнаружили, что клетки HuT78 не экспрессируют внутриклеточные молекулы Foxp3 и имеют низкие уровни CD25 на клеточной поверхности; однако их экспрессия Helios и Sema4A была почти повсеместной (Fig. 1A). Параллельно с высокой экспрессией Sema4A клетки HuT78 демонстрировали низкие уровни его рецептора Plexin B1. В отличие от клеток HuT78, около трети клеток HuT102 окрашивались положительно на CD25 и Foxp3. Хотя экспрессия CD25 на одной и той же клеточной линии различается в зависимости от сбора клеток, различия в его уровнях между клеточными линиями HuT78 и HuT102 всегда были значительными.При большем количестве CD25-экспрессирующих клеток среди клеток HuT102 мы наблюдаем более высокую экспрессию Foxp3. Ранее сообщалось о различиях в экспрессии Foxp3 между первичными клетками Т-клеточной лейкемии взрослых и различными клеточными линиями Т-клеточной лейкемии взрослых (28). Низкая экспрессия Sema4A на клетках HuT102 сопровождалась высокой экспрессией Plexin B1 (рис. 1B), что свидетельствует об отсутствии стимуляции цис-пути Sema4A-PlexinB1. Независимо от клеток HuT определяемые уровни NRP-1 и NRP-2 не были обнаружены.Наши результаты согласуются с предыдущей работой, указывающей на то, что клеточная линия HuT78 демонстрирует фенотип, подобный T-эффекторным клеткам, тогда как клетки HuT102 являются клетками, подобными Treg (28).

Несмотря на то, что использование клеточных линий для исследований является рентабельным инструментом, учитывая их способность размножаться бесконечно, есть оговорки в распространении результатов на нормальные клетки. Понятно, что серийное пассирование клеточных линий может вызывать генотипические и фенотипические вариации. Например, мы наблюдали изменение общей жизнеспособности и экспрессии CD25 на клетках CD4 + HuT.Таким образом, анализ первичных клеток более актуален для биологии человека. Анализ проточной цитометрией Т-клеток из периферической крови человека нормального донора продемонстрировал экспрессию плексина B1 (фиг. 2А). Клетки Treg среди PBMC были высокоположительными в отношении этого рецептора Sema4A (фиг. 2B). Нам не удалось обнаружить экспрессию ни NRP-1, ни NRP-2 на человеческих Т-клетках и Treg-клетках (рис. 2 и данные не показаны).

Затем мы исследовали влияние rSema4A на выживаемость клеток HuT, а также на клеточную поверхность и экспрессию внутриклеточных маркеров.Добавление rSema4A даже в низкой дозе (100 нг/1 × 10 6 клеток) было достаточным для повышения жизнеспособности HuT-клеток (рис. 3). rSema4A стимулировал увеличение относительного количества CD25-экспрессирующих клеток для обеих клеточных линий (фиг. 4А, 4В). Хорошо задокументировано, что CD25 экспрессируется как на эффекторных T-клетках, так и на Treg-клетках, хотя и на разных уровнях (47), подобно тому, что сообщается в этой статье для HuT78 (как T-эффекторные клетки) и HuT102 (как Treg-клетки). клетки) клеточные линии, в которых уровень CD25 выше на HuT102 (рис.1, 4). Удивительно, но клетки HuT78 с высоким уровнем экспрессии Helios дополнительно активировали этот маркер после экзогенного воздействия Sema4A, тогда как в клетках Foxp3 + HuT102 он оставался низким. HELIOS кодирует транскрипционный фактор цинковых пальцев, который важен для развития лимфоидов (33, 51). Его доминантно-негативные изоформы, Hel-6, Hel-7 и Hel-8, избыточно экспрессируются у пациентов с острым лимфобластным лейкозом (52), что позволяет предположить, что роль Helios в Т-клеточных злокачественных опухолях еще не определена. Экспрессия гена HELIOS в клетках Treg считается специфичным для клеток Treg, но независимым от Foxp3 маркером (53).Действительно, это различие в экспрессии Helios было обнаружено в клеточных линиях HuT, где экспрессия клеток HuT102, экспрессирующих Foxp3, была низкой или отрицательной в экспрессии Helios (фиг. 1A, 1B, и данные не показаны). Возможно, что разные изоформы Helios присутствуют в клетках HuT78 и HuT102, что частично может объяснить его различную регуляцию при воздействии rSema4A. Будучи Helios-позитивными, клетки HuT78 были отрицательными в отношении экспрессии Foxp3, в то время как ее низкий уровень был обнаружен примерно у 30% клеток HuT102 и несколько повышался экзогенным Sema4A (рис.5А, 5В). Из данных, представленных в этой статье, видно, что воздействие rSema4A на клетки HuT102 приводит к увеличению выхода клеток CD4 + Foxp3 + и CD25 + Foxp3 + Treg в культурах, чего не наблюдается для клеток HuT78. (рис. 5А, 5Б). Поскольку NRP-1 и -2 не были обнаружены ни в одной из клеточных линий (рис. 1A, 1B), и на это отсутствие экспрессии не влияло воздействие rSema4A (данные не показаны), NRP-1, вероятно, не является функциональным рецептором sSema4A для человека. Трег-клетки.

Хотя мы не обнаружили NRP-1 на Т-клетках периферической крови человека, другие сообщили, что Treg-клетки человека экспрессируют NRP-1 (17, 54). Однако эти клетки NRP1 + Treg были локализованы либо в дренирующих лимфатических узлах (54), либо в пуповинной крови (17), но не на периферии, в крови взрослого человека. Интересно, что полученные из лимфатических узлов клетки NRP-1 + Treg экспрессировали более высокие уровни Foxp3 по сравнению с NRP-1-отрицательными клетками Treg (54). Более того, они также экспрессировали другие маркеры, более характерные для активированных клеток Treg, такие как HLA-DR, CD45RO и GITR (рецептор TNF, индуцированный глюкокортикоидами).Кроме того, NRP-1 + Treg-клетки были функционально более активными, более подавляющими пролиферацию эффекторных CD4 + Т-клеток и продукцию цитокинов по сравнению с их аналогами, лишенными экспрессии NRP-1. Что касается Treg-клеток, полученных из пуповинной крови, их изначально низкая (около 7% от всех отсортированных Treg-клеток) экспрессия NRP-1 увеличилась до 45% клеток после 8 дней анти-CD3 и анти-CD28 плюс IL-2 in vitro. стимуляция (17). Таким образом, опять же, даже Treg-клетки пуповинной крови не экспрессируют много NRP-1 в стационарном состоянии.Клетки NRP1 + Treg были исследованы у пациенток с раком шейки матки (54). Клиническое лечение рака шейки матки включает химиолучевую терапию. Такое лечение приводило к истощению клеток NRP-1 + Treg в дренирующих опухоль лимфатических узлах пациентов, что указывает на связь разрушения опухоли с подавлением этих сильно подавляющих клеток. Авторы предложили два механизма такого подавления Treg-клеток; один связан со снижением количества факторов, происходящих из опухоли, стимулирующих клетки Treg, а другой связан с процессингом DC умирающих опухолевых клеток, которые затем стимулируют ответы эффекторных Т-клеток.

Далее мы исследовали влияние rSema4A на РВМС, используя ту же экспериментальную схему клеточных культур in vitro, что и для клеточных линий HuT. rSema4A не влиял на относительное количество клеток, показанное на точечных диаграммах CD3/CD4, за одним исключением для популяции CD4 + CD3 (рис. 6A), которая, как было обнаружено, экспрессирует Sema4A и его рецептор NRP-1 ( Дополнительный рис. 3). Ранее было показано, что NRP-1 экспрессируется на поверхности ДК человека, но не на моноцитах (55).Уровни его экспрессии увеличивались при активации DC. Кроме того, NRP-1 был также идентифицирован на покоящихся Т-клетках человека. Важность этой двухклеточной экспрессии во взаимодействии DC-T-клеток и инициации иммунного ответа была установлена ​​с помощью исследований ингибирования антител. CD4 был обнаружен только на тимусных и селезеночных мышиных и крысиных ДК (56) и никогда не обнаруживался на РВМС. Однако в более ранних исследованиях сообщалось об экспрессии CD4 на моноцитах человека и ее положительном влиянии на их способность презентировать антигены (57). Возможно, что экспрессия NRP-1 на CD4 пронизывает моноцитов (дополнительная рис.3) мог различать сильных представителей Ag.

В этом исследовании мы показываем, что более 90% клеток CD3 + экспрессируют плексин B1 (рис. 2А), предполагая, что Т-клетки CD4 + также экспрессируют этот рецептор Sema4A. Насколько нам известно, роль плексина B1 в дифференцировке и функционировании Т-клеток CD4 + ранее не изучалась. Кроме того, недавно был клонирован новый Ig-подобный транскрипт 4 рецептора Sema4A (ILT-4), и была исследована его функциональная активность на CD4 + T-клетках (58).Наивные Т-клетки CD4 + кокультивировали с L-клетками, экспрессирующими hSema4A, в присутствии факторов, активирующих Т-клетки, иммобилизованных анти-CD3 и анти-CD28 Ab или в условиях Th2- или Th3-перекоса. В таких культурах Sema4A стимулировал сильную продукцию цитокинов Th3 активированными CD4 + T-клетками. Таким образом, этот недавно открытый рецептор Sema4A избирательно усиливает активацию клеток Th3 человека. При исследовании астматических тканей легких авторы отметили высокую экспрессию Sema4A на клетках воспаления, тогда как Т-клетки CD4 + в легких экспрессировали ILT-4.Эти результаты контрастируют с ранее опубликованными исследованиями Kumanogoh и его коллег (59, 60), которые первыми определили иммунологические функции Sema4A. Результаты последних исследований определили Tim-2 как стимулирующий рецептор Sema4A на мышиных CD4 + Т-клетках. Напротив, в исследовании Rennert и соавт. (22) сообщалось о подавляющем влиянии пути Tim-2 на тяжесть астмы. Более того, поскольку у мышей с дефицитом Tim2 наблюдался усиленный воспалительный ответ Th3 легких на провокацию аллергеном, был сделан вывод, что Tim-2 является негативным регулятором ответов Th3 (22).Кроме того, было продемонстрировано подавляющее действие экзогенного Sema4A in vivo на экспериментальных моделях астмы (21, 61), а результаты использования in vivo антител, блокирующих Tim-2, доказали, что существует еще один рецептор Sema4A, способствующий аллергическим реакциям. патогенез воспалительных заболеваний (21). Поскольку человеческого гомолога для Tim-2 не существует (58), в настоящее время было обнаружено, что только два рецептора Sema4A экспрессируются на CD4 + T-клетках человека, а именно ILT-4 и Plexin B1, с потенциальными положительными или отрицательными регуляторными эффектами на CD4. + Т-клеток соответственно.Мы не можем исключить возможность того, что растворимый и связанный с мембраной Sema4A оказывает различные эффекты на функцию Т-клеток через разные встречные рецепторы.

В этой статье мы сообщаем, что экзогенный rSema4A не влиял на общее количество человеческих Т-клеток; однако относительная доля Treg-клеток потенцировалась при его воздействии (рис. 6, 7, 11). Более того, как показано на рис. 6В, на графиках проточной цитометрии для выбранных клеток CD3 + CD4 + CD25 + Foxp3 + , мы наблюдали сдвиг в сторону более высокой экспрессии Foxp3, когда rSema4A присутствовал в среде для культивирования клеток.Увеличение относительной доли Treg-клеток, индуцированных rSema4A, подавлялось блокирующими Ab анти-плексином B1 (рис. 11).

Когда CD4 + CD25 истощенные Т-клетки стимулировали in vitro в присутствии либо TGF-β, либо IL-2 с экзогенным Sema4A или без него, мы обнаружили умеренный эффект Sema4A, индуцирующий клетки iTreg, сравнимый с наблюдаемым. в культурах клеток с TGF-β (рис. 8). Однако комбинация IL-2 плюс цитокин TGF-β была наиболее эффективной среди стимуляторов, используемых для индукции клеток CD25 + Foxp3 + ; комбинация Sema4A с IL-2 или с TGF-β не достигала этих уровней.Наблюдаемое относительное количество клеток iTreg было сравнимо с опубликованным ранее (41, 42, 62, 63). Будущие эксперименты потребуются, чтобы определить, зависит ли Sema4A-индуцированный Foxp3 от энхансерных элементов гена FOXP3, перекрывающихся с сайтами связывания SMAD (64), поскольку степень индукции Foxp3, наблюдаемая только с Sema4A, была сравнима с одним TGF-β, и эти два фактора не были синергическими. .

В заключение, Sema4A стабилизирует фенотип клеток Treg человека в клеточных линиях, РВМС и Т-клетках CD4 + , частично посредством взаимодействия с плексином B1.Линии клеток HuT могут быть полезны для более глубокого анализа пути Sema4A-PlexinB1 и для характеристики сигнальных элементов как в T-эффекторных, так и в Treg-клетках. Необходимы дальнейшие исследования с использованием дополнительных клеточных линий и первичных клеток пациентов с астматическими и другими хроническими воспалительными заболеваниями, чтобы подтвердить стабилизирующую клетки Treg роль Sema4A и определить механизмы такого действия Sema4A. Отсутствие прямого эффекта Sema4A на супрессивную функцию клеток Treg in vitro (рис. 10) предполагает, что механизм его действия может быть сложным.Как это ни парадоксально, мы наблюдали, что rSema4A стимулирует пролиферацию клеток Tresp, но только тогда, когда также присутствуют клетки Treg. Наши предварительные исследования показывают, что rSema4A может индуцировать цитокины, способные стабилизировать Treg-клетки, такие как IL-2, которые также могут стимулировать пролиферацию T-клеток in vitro. Будущие исследования в этой области помогут нам определить сигнальные элементы, участвующие в воздействии Sema4A на клетки Treg человека, чтобы установить использование пути Sema4A для лечения воспалительных заболеваний.

%PDF-1.6 % 207 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 207 78 0000000016 00000 н 0000002600 00000 н 0000002815 00000 н 0000002898 00000 н 0000003044 00000 н 0000003687 00000 н 0000004206 00000 н 0000004636 00000 н 0000004692 00000 н 0000004795 00000 н 0000005955 00000 н 0000006333 00000 н 0000006624 00000 н 0000007928 00000 н 0000008035 00000 н 0000009163 00000 н 0000009331 00000 н 0000009386 00000 н 0000009776 00000 н 0000010005 00000 н 0000011181 00000 н 0000011311 00000 н 0000011714 00000 н 0000012162 00000 н 0000012633 00000 н 0000013074 00000 н 0000014105 00000 н 0000015409 00000 н 0000016296 00000 н 0000017343 00000 н 0000021734 00000 н 0000025773 00000 н 0000027396 00000 н 0000027997 00000 н 0000028131 00000 н 0000028336 00000 н 0000030350 00000 н 0000030608 00000 н 0000030971 00000 н 0000031282 00000 н 0000049065 00000 н 0000049327 00000 н 0000063190 00000 н 0000063458 00000 н 0000064009 00000 н 0000064188 00000 н 0000076636 00000 н 0000076675 00000 н 0000077242 00000 н 0000077438 00000 н 0000093070 00000 н 0000093109 00000 н 0000093676 00000 н 0000093870 00000 н 0000111038 00000 н 0000111077 00000 н 0000111644 00000 н 0000111842 00000 н 0000121393 00000 н 0000121432 00000 н 0000121983 00000 н 0000122165 00000 н 0000122732 00000 н 0000122934 00000 н 0000123485 00000 н 0000123667 00000 н 0000137475 00000 н 0000137514 00000 н 0000138081 00000 н 0000138296 00000 н 0000148744 00000 н 0000148783 00000 н 0000149350 00000 н 0000149545 00000 н 0000163321 00000 н 0000163360 00000 н 0000185232 00000 н 0000001897 00000 н трейлер ]/предыдущая 870867>> startxref 0 %%EOF 284 0 объект >поток #׹

Шаттл Т-4а класса «Лямбда» | Tydirium

Эй, через месяц я наконец-то сделал несколько рендеров для класса Lambda.
Если он вам понравился, дайте ему алмаз и не забудьте дать мне какие-либо предложения, если он вам не понравился :3

Тидириум был шаттлом T-4a класса Imperial Lambda. Украденный Салластаном Ниен Нунбом со звёздного разрушителя класса «Имперский» «Служанка щита» во время диверсионной миссии под названием «Операция «Жёлтая луна», приведшей к событиям битвы при Эндоре, он использовался Альянсом за восстановление Республики для перевозки генерала Хана Соло и его ударной группы на Эндор, чтобы вывести из строя генератор щита, защищавший вторую Звезду Смерти. [5]

Оснащенный гипердвигателем многоцелевой транспорт, шаттл Т-4а класса «Лямбда» был разработан Sienar Fleet Systems для использования в Имперском флоте. Имея 20 метров в длину, корабль класса «Лямбда» мог развивать максимальную скорость 850 км/ч и был одним из наиболее распространенных имперских кораблей, встречающихся по всей галактике, наряду со своим почти идентичным аналогом, десантным кораблем класса «Страж». У него было три крыла: один высокий спинной стабилизатор, который оставался неподвижным, и два нижних сочлененных фланговых крыла.В полете крылья складывались наружу для большей стабилизации, а при посадке крылья складывались внутрь, уменьшая силуэт корабля. Эта треугольная форма считалась элегантной и отличалась от обычно грубого дизайна Империи.

Хотя кораблем класса «Лямбда» мог управлять один пилот, присутствие второго пилота/навигатора значительно облегчало задачу, особенно при путешествии через гиперпространство. Кроме того, чтобы доказать, что экипаж шаттла работал на Империю, шаттлы Т-4а класса «Лямбда» использовали специальные транспондеры для передачи секретных кодов на звездные разрушители.

Несмотря на элегантность внешнего вида шаттлов типа «Лямбда», внутри многих шаттлов часто пахло несвежим потом из-за многочисленных вспотевших штурмовиков, которые они перевозили через всю галактику. Кроме того, было известно, что скучающие солдаты царапают свои боевые номера на каждой доступной поверхности.

Хорошо вооруженный корабль, шаттл T-4a класса «Лямбда» был оснащен двумя передними двойными лазерными пушками, двумя передними двойными пушками в крыльях и выдвижной двойной лазерной пушкой в ​​корме.


creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

FinnMcShipbuilder сделал 4-й рендеринг

Рабочая группа A Комитета 4 (WG 4A)

2

8

9 Номер

Название документа
РГ 4А-1 ПОВЕСТКА ДНЯ ЗАСЕДАНИЯ WG4A ADHOC ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 – КИБЕРБЕЗОПАСНОСТЬ, 23 ноября 2012 г., 08:00 – 09:00
WG 4A-1 rev.1​ ПОВЕСТКА ДНЯ ЗАСЕДАНИЯ WG4A ADHOC ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 – КИБЕРБЕЗОПАСНОСТЬ
23 ноября 2012 г., 08:00 – 09:00
24 ноября 2012 г., 18:00 – 20:00
25 ноября 2012 г., 18:00 – 20:00 9074 9074
WG 4A-1 ред.2 ПОВЕСТКА ДНЯ GR4A ADHOC ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 – КИБЕРБЕЗОПАСНОСТЬ
23 ноября 2012 г., 08:00 – 09:00
24 ноября 2012 г., 17:00 – 20:00
​WG 4A-1 ред.3 ПОВЕСТКА ДНЯ ЗАСЕДАНИЯ WG4A ADHOC ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 – КИБЕРБЕЗОПАСНОСТЬ
WG 4A-1 ред.4 ​СЛАЙДЫ ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 (Кибербезопасность) Обсуждение
​WG 4A-1 rev.6 ​СЛАЙДЫ ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 (Кибербезопасность) Обсуждение
​WG 4A-1 rev.7 СЛАЙДЫ ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 (Кибербезопасность) Обсуждение
WG 4A-2 ​РЕЗОЛЮЦИЯ 64 – Выделение IP-адресов и поощрение развертывания IPv6
WG 4A-2 rev.1 РЕЗОЛЮЦИЯ 64 — Распределение IP-адресов и поощрение развертывания IPv6
WG 4A-2 rev.2 РЕЗОЛЮЦИЯ 64 — Выделение IP-адресов и содействие переходу и развертыванию IPv6
WG 4A-2 rev.3 ​РЕЗОЛЮЦИЯ 64 – Выделение IP-адресов и содействие переходу и развертыванию IPv6
WG 4A-3​ ДОКЛАД О ЗАСЕДАНИИ СПЕЦИАЛЬНОЙ ГРУППЫ ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 – КИБЕРБЕЗОПАСНОСТЬ
Пятница, 23 ноября 2012 г., 08:00–09:00 , 25 ноября 2012 г., 18:00 – 20:00
WG 4A-3 rev.1​ ПРОЕКТ ОТЧЕТА О ЗАСЕДАНИИ СПЕЦИАЛЬНОЙ ГРУППЫ ПО РЕЗОЛЮЦИИ 50 – КИБЕРБЕЗОПАСНОСТЬ
Пятница, 23 ноября 2012 г.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *