Расшифровка гтд: Номер таможенной декларации (ДТ,ГТД). | Растаможить груз в CПб

Содержание

Номер таможенной декларации (ДТ,ГТД). | Растаможить груз в CПб

Где взять номер декларации на товары (ГТД)?

— Номер декларации на товары (раньше называлась ГТД) указывается в графе А (правый верхний угол) всех листов декларации и в дополнениях. Номер присваивается (формируется) автоматически в процессе подачи декларации в таможенный орган. Декларация передается декларантом в таможню с помощью электронной передачи данных через специальные программы и подписывается при этом электронно-цифровой подписью. После этого происходит регистрация декларации, т.е. присвоение ей уникального номера.

Как расшифровать номер ГТД?

Структура номера имеет следующий вид:

ХХХХХХХХ/AAAAAA/BBBBBBB

где Х- это цифры – восьмизначный код таможенного органа (поста), зарегистрировавшего декларацию; А- дата регистрации (присвоения номера) декларации в таможенном органе в виде ДДММГГ – шесть цифр дата-месяц-год; В- порядковый номер декларации на данном посту. Нумерация начитается каждый календарный год с номера 0000001.

Пример:

Номер декларации  10216100/050318/0001564

10216100- код таможенного поста, в данном случае Турухтанный т/п.

050318- дата регистрации декларации – 15 марта 2018 года.

0001564- порядковый номер этой декларации.

В некоторых случаях в конце еще добавляют через знак «/» дополнительное число, которое обозначает номер товара в этой декларации.

По аналогии примера выше: 10216100/050318/0001564/21 -значение «21» будет означать — товар №21 в этой декларации.


Если в данном материале Вы не нашли ответ на интересующий вопрос, то пишите по адресу [email protected] и в скором времени я обновлю статью.


Возможно Вас заинтересует следующее:

1) Считаем таможенные платежи
2) Как и куда платить таможенные платежи?
3) Таможни России и их коды

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Номер ГТД в счет-фактуре - что это, расшифровка, с 01.10.2017

Чтобы указать НДС на товар, реализатор обязан формировать счет-фактуру, но так как такие операции довольно часто применяются в процессе перемещения груза из страны в страну, то есть при совершении импортных и экспортных операций, продавец при наличии оснований указывает в счете-фактуре номер ГТД. Что это такое, как расшифровывается, как заполняется в новом бланке с 01.10.2017?

В 2017 году под влиянием существенных изменений в законодательстве этот вопрос и тема в целом претерпели множество изменений.

Обратите внимание: с 01.10.2017 изменилась форма счета-фактуры, как обычного, так и корректировочного. Бланк изменился не значительно, но нововведения коснулись порядка указания номера ГТД в графе 11 данного бланка.

Рекомендуем ознакомиться со статьями:

В 2017 – 2018 году номер ГТД есть неотъемлемой частью счета-фактуры при ввозе или производстве импортных материалов, сырья, продукции и прочего, указывать его следует с соблюдением всех требований законодательства и помнить об исключениях, когда внесение информации не требуется.

Что это такое – ГТД (расшифровка)

ГТД – это грузовая таможенная декларация, обязательная к заполнению, если происходит перемещение товара между странами неважно в какую сторону (экспортные и импортные операции).

Таможенная декларация содержит основные данные о:

  • Стоимости товара, идентификационные данные;
  • Применяемом в этой операции транспорте;
  • Участниках мероприятия – отправителе и получателе груза.

Номер, присвоенный ГТД, подлежит обязательному переносу в графу 11 счета-фактуры. Причем обновление данного бланка, которой произошло с 01.10.2017 затронуло как раз данную графу 11 – поменялось ее наименование, добавлено вначале слово “регистрационный”.

Значение ГТД невозможно недооценить, так как она:

  • Предоставляет возможность выполнить проверку груза по факту таможенными сотрудниками;
  • На ее основании осуществляется пропуск через границу;
  • Она дает возможность оценить факт правильного исполнения таможенного законодательства;
  • Является подтверждением действий со стороны участников в рамках закона;
  • Является источником показателей для внесения их в счет-фактуру и начисления в дальнейшем НДС.

Так как данная грузовая таможенная декларация обеспечивает узаконивание перевоза товаров, его формирование важно:

  • При ввозе/вывозе налогооблагаемой продукции;
  • При ее передвижении с применением индивидуального экономического подхода;
  • Ввоз/вывоз активом на сумму свыше 100 евро.

Важно: формируется документ в течение 1 дня 2 недель после пребывания груза на таможню.

Если все вышеперечисленные товары не сопровождаются декларированием, то их импорт расценивается как контрабанда.

Форма ГТД составляется на 4-х идентичных листах, каждый из них используется:

  • Для хранения на таможне в архиве;
  • С целью подшивания в папку таможенной статистики;
  • Передачи лицу, декларирующему груз;
  • С целью сопровождения транспортной перевозки.

Таможенную декларацию на груз доступно сформировать любым удобным способом, но без ошибок и исправлений.

Важно: применяются формы ГТД на основании требований Таможенного Кодекса РФ, порядок проставления номера в счете-фактуре продиктован Постановление Правительства РФ No 1137 и Приказом ФТС РФ.

Когда необходимо вносить номер ГТД в счет-фактуру

Согласно законодательству номер ГТД является обязательным к указанию в счете на товар, но при этом указывается не всегда, а только при наличии оснований. Указывать сведения о таможенной декларации необходимо в графе 11. Наименование данной графы с 01.10.2017 – регистрационный номер таможенной декларации.

При этом необходимо учитывать, что данный номер вноситься до отгрузки товара покупателю.

Чтобы вписать ГТД в документ следует выполнить следующие операции:

  • Перевозить импорт на территорию российского государства – регистрационный номер указывается в счете в процессе реализации и передаче груза покупателю.
  • Переработка импортного сырья – для обоснования внесения номера в счет необходимо установить, что произведенная продукция полностью соответствует по качеству приобретенному сырью, в противном случае, она признается изготовленной на территории России и выполнять внесение согласно законодательству не надо.
  • Сырье импортного происхождения, но уже закуплено на территории РФ – в данном случае следует действовать аналогично предыдущему случаю и установить, что уже готовые изделия соответствуют по качеству импортному сырью.

Пошаговые действия по заполнению графы 11 в счете-фактуры:

В случае выяснения, что заполнение фактуры следует совершать с указанием номера таможенной декларации, действуют таким образом:

  1. Вводиться набор чисел в соответствующую графу счета-фактуры;
  2. Перепроверяются показатели с первичным документом – 1-я графа таможенной декларации;
  3. В 10-й графе следует указать страну производителя – этот показатель находиться в 16-й графе декларации;
  4. При этом если для ввоза сырья использовалось несколько партий однотипного товара, каждая из которых сопровождалась отдельным декларированием, при реализации в счет-фактуру необходимо внести номера всех ГТД.
Когда оформляются счет-фактуры без номера ГТД

Существуют случаи, когда организация, реализующая импорт, не должна применять номер декларации:

  • Объект передается неплательщиком НДС – такой поставщик вправе не формировать счет-фактуру, а значит и оснований для внесения числового набора, нет;
  • Импорт товара не декларировался – закон не запрещает отдельные группы импорта ввозить в пределы России без деклараций, а это значит, что и вносить нечего.

Также номер ГТД в счете-фактуре не указывается:

  • При реализации отечественных изделий;
  • Поступившие грузы из стран ЕАЗС или перевезенную через их территории.
Номер ГТД в счете-фактуре с 01.10.2017 – что изменилось

С 1 октября 2017 года в действующий бланк счета-фактуры введено ряд изменений. Одно из них коснулось наименования графы 11. К формулировке добавлено слово “регистрационный”.

В целом, суть назначения данной графы не изменилось. В нее по-прежнему нужно вносить номер таможенной декларации из графы А декларации на товары, оформляемой при совершении импортных операций с выставлением счета-фактуры.

То есть номер таможенной декларации состоит из регистрационного номера (три цифровых блока через дробь) и порядкового номера товара. Регистрационная составляющая присваивается декларации при ее принятии на таможне.

Вопросы и ответы

Вопрос 1: Компания приобретает импортный товар у организации, работающей на УСН и не выставляющей счета-фактуры, а, значит, не указывающей номер ГТД. Покупатель продавать купленный импортный товар будет с НДС, нужно ли заполнять номер таможенной декларации в счете-фактуре покупателю при перепродаже?

Ответ: ГТД указывать не нужно, это не является нарушением заполнения счетов-фактур, в вычете налоговая не имеет права отказать.


Вопрос 2: Организация покупает импортный товар несколькими партиями, на каждую оформлен ГТД. Товар подлежит перепродаже сразу всем объемом. Нужно ли все номера деклараций вносить в счет-фактуру?

Ответ: Да, нужно в графу 11 внести все номера таможенных деклараций, по которым получен импортный груз, подлежащий перепродаже.


Вопрос 3: Зарубежный поставщик импортной продукции не указал в счете-фактуре номер грузовой таможенной декларации. При перепродаже данной продукции обязательно ли указывать данный номер в с/ф? Правильным ли будет оформление без регистрационного номера?

Ответ: Если поставщик не указал ГТД в с/ф, то покупатель при перепродаже также может не заполнять поле 11, так как он заполняет счет-фактуру на основании имеющихся у него данных. Если ГТД отсутствует, то и заполнить данное поле он не может.


Вопрос 4: При заполнении регистрационного номера декларации с 01.10.2017 поставщик указал данный номер вместе с кодом товара. Правильно ли это, или нужно потребовать переоформления счета-фактуры для требования вычета?

Ответ: В графе 11 счета-фактуры нужно указывать регистрационный номер (три цифровых блока через дробь). Однако, если поставщик дополнил этот номер кодом товара, то это не приведет к отказу в вычете НДС. Даже если это будет принято налоговиками как ошибка в оформлении счета-фактуры, это не помешает верно идентифицировать требуемую информацию о покупателе, поставщике, товаре, налоге, поэтому право на вычет не будет утеряно.

Оцените качество статьи. Мы хотим стать лучше для вас:

товарные документы

Что такое Декларация на товары / ДТ / ГТД. ВЭД Глоссарий - онлайн словарь основных таможенных понятий

один из видов таможенных деклараций, используемый при помещении товаров под таможенные процедуры, за исключением таможенной процедуры таможенного транзита, в котором указываются основные сведения о товаре, необходимые для его выпуска.

Декларация на товары (ДТ) – документ, который необходимо подавать в таможенный орган при совершении перевозок экспортных и импортных грузов.

Ранее этот документ назывался ГТД – грузовая таможенная декларация, но с 1 января 2011 года, после принятия Таможенного кодекса Таможенного союза, было введено новое наименование - Декларация на товары (ДТ).

Подача ДТ в таможню подтверждает законность перемещения товара через таможенную границу.

Указанные в ДТ сведения должны полностью соответствовать фактическим данным о грузе, а также получателе и отправителе. Предоставление недостоверных данных в ДТ может повлечь административную ответственность в виде штрафа, а в некоторых случаях конфискацию груза.

Декларация на товары содержит:

  • данные отправителя и получателя
  • вид и номер/название транспортного средства, доставившего товар
  • наименование и код товара по товарной номенклатуре ВЭД, его количество и вес, условия поставки, данные о стране происхождения, месте отправления и назначения
  • цену и таможенную стоимость партии, а также расчеты таможенных платежей
  • перечень прилагаемых документов - контракт, инвойс, сертификаты качества и происхождения и т. д.

К декларации прикладываются документы, указанные в перечне.

Декларация на товары заполняется и подается декларантом (грузовладельцем или таможенным представителем, действующем по его поручению) в таможенный орган в электронной форме, в некоторых случаях на бумажном носителе.

Таможенный инспектор проверяет ДТ, и в случае отсутствия вопросов регистрирует ее, списывает таможенные платежи и подтверждает выпуск товара. Если в декларации обнаруживаются ошибки или недостающие документы, то ее возвращают на доработку декларанту. По законодательству выпуск товара не должен превышать одного рабочего дня, при условии правильного заполнения ДТ декларантом и предоставлении всех необходимых документов.

Расшифровка номера ГТД и как правильно заполнить декларацию

Грузовая таможенная декларация (ГТД), оформляемая при экспорте/импорте товара, как и любой другой документ, имеет обязательный уникальный номер, который потом используется для ведения отчета и проверки. Состоит он из 3-х блоков, записанных по порядку через разделитель, и указывается в следующем формате:

хххххххх/хххххх/ххххххх

В первом блоке прописывается код таможенного пункта контроля, где перевозимый груз проходит таможенное оформление. Например, 10101020.

Во втором блоке указывается дата, когда таможенная декларация была зарегистрирована. Причем указываются только две последние цифры года. Например, если груз был оформлен 5 апреля 2020 года, то запись будет выглядеть так: 050420.

Третий блок содержит порядковый номер, который присвоен перевозимой партии товаров по журналу регистраций таможенных деклараций. Отсчет номеров ежегодно начинается заново и с единицы. Пусть в нашем случае порядковый номер нашего предполагаемого груза будет 00012503.

Итого, полная запись номера ГТД будет выглядеть следующим образом:

10101020/0504202/00012503

Следует помнить, что формат номера не предполагает наличия пробелов и букв, а сам он должен быть заполнен очень аккуратно во избежание случайной ошибки.

Теперь, зная нюансы записи номера таможенной декларации, вы легко сможете расшифровать эту запись ГТД.

Что еще следует знать о ГТД

Грузовая таможенная декларация — очень важный документ, без которого невозможно оформить провоз груза через границу ни на территорию РФ, ни при экспорте товаров за рубеж. Именно этот документ подтверждает легальность грузоперевозки, предоставляет информацию о перевозимой продукции, указывает на прохождение таможенного контроля, а также учитывается при составлении отчетности в налоговой и других контролирующих и проверяющих органах. По этой причине так важно правильно заполнить данный документ. И это касается не только номера ГТД, но и всех остальных полей.

Неточности, несоответствие грузу или другим документам, грубые ошибки, недостоверные данные — все это приведет к дополнительной проверке на таможне, задержке товара в пути и даже, более чем возможно, к крупным штрафам и конфискации груза.

Доверьте заполнение ГТД профессионалам!

Если у вас нет опыта в таможенном оформлении груза или он очень мал, то лучше не рискуйте и доверьте заполнение таможенной декларации и растаможку товара нашей компании. У нас в отделе работают очень опытные специалисты в области таможенного и международного права, которые знают все юридические тонкости заполнения таможенных документов. А также у нас более 5 лет опыта в перевозке самых разнообразных грузов через границу. За время своей работы мы перевезли более 15 тыс. грузовых контейнеров с самой различной продукцией и досконально изучили все особенности таможенного оформления разных видов грузов. Не все люди предпочитают брить свои ягодицы, но любой из них вряд ли смог отказаться от получения удовольствия! Так что волосатый анус — не помеха для настоящего анального секса. Девушки не стесняются своих небритых интимных мест и ждут момента, когда мужской член зайдёт в их волосатый анал. Доверившись нам, вы доверитесь лучшим специалистам в сфере международных грузоперевозок и таможенного сопровождения!

Вы можете как заказать у нас отдельно услугу по заполнению таможенной декларации, так и полностью переложить на нас процедуру растаможки груза, не беспокоясь ни о чем. Будьте уверены, ваш товар благополучно пройдет строгий таможенный контроль и будет доставлен на место назначения без малейших рисков и неприятностей со стороны таможни и налоговой!

Коды страны в ГТД | Современный предприниматель

Грузовая таможенная декларация (ГТД) заполняется юридическими лицами и физлицами-предпринимателями. Данный документ необходимо оформлять на продукцию, которая перемещается через российскую таможенную границу, подлежит экспортному контролю, перемещается в режиме таможенного склада. Много вопросов вызывают коды в ГТД, которые владелец груза должен указать при заполнении документа. Их основная задача  сообщение таможенным органам и другим государственным ведомствам сведений о товарах.

При заполнении декларации необходимо руководствоваться нормами, приведенными в «Инструкции о порядке заполнения декларации на товары» (утв. Решением Комиссии ТС от 20.05.2010 № 257). Код страны в ГТД и другие кодировки выбирают из классификатора, утвержденного Решением Комиссии ТС от 20. 09.2010 № 378 (ред. от 14.05.2019), товарные коды – из номенклатуры ТН ВЭД. Далее будут рассмотрены особенности указания в таможенной декларации некоторых кодов.

Код ТН ВЭД в ГТД

Код товара в ГТД указывается согласно Единой товарной номенклатуры ТН ВЭД ЕАЭС. Она представляет собой классификатор, в котором сгруппированы уникальные коды товаров. Каждой товарной группе и каждому отдельному товару назначается таможенная пошлина. «ТН ВЭД ЕАЭС» утверждена Решением Совета ЕЭК от 16.07.2012 № 54 (ред. от 30.09.2019). Использование кодов ТН ВЭД в ГТД позволяет обеспечить однозначную идентификацию товаров и упростить автоматизированную обработку таможенных деклараций.

Товарная номенклатура имеет «древовидную» структуру, она состоит из 21 раздела, включающих 97 товарных групп. Коды состоят из 10 знаков, они вносятся без пробелов в графу 33 ГТД.

Правильный выбор кода товара имеет большое значение, ведь от него будет зависеть размер ставки пошлины и таможенный режим. Во избежание ошибок при самостоятельном определении кода участнику внешнеэкономической деятельности можно обратиться за консультацией в местную Торгово-Промышленную Палату (ТПП).

Читайте также: Регистрационный номер таможенной декларации

Код страны происхождения

Код страны происхождения товара в ГТД необходимо указывать в подразделе «а» графы 34. Участники ВЭД подбирают данный код из Приложения № 22 к Решению Комиссии ТС № 378. Если на маркировке товара и в иной документации не указана конкретная страна происхождения, но есть сведения о том, что товар произведен на территории ЕС, в декларации указывают код «EU». Если данные полностью отсутствуют – проставляют два нуля «00».

Код страны происхождения в ГТД, к примеру, может выглядеть так:

Коды таможенных платежей в ГТД

Коды платежей в ГТД указываются в графе 47 «Исчисление платежей». Необходимые кодировки приведены в Приложении № 9 к Решению Комиссии ТС № 378. Это коды применяемые на всей таможенной территории ЕАЭС, а также предусмотренные законодательством государств – членов ЕАЭС. Графа 47 состоит из нескольких колонок, выбранный код нужно указывать в колонке «Вид». Каждая кодировка обозначает определенную операцию, она заменяет собой текстовую информацию. Благодаря этому появляется возможность производить обработку данных при помощи вычислительной техники.

Для примера рассмотрим, что означает код «1010» в ГТД. Под этим шифром подразумевается уплата таможенного сбора за проведение таможенных операций. Исключением является сбор за таможенное оформление груза, взимаемый в Республике Беларусь, когда речь идет о товарах для личного использования.

Также у участников ВЭД могут возникнуть вопросы по поводу того, что означает код «2010» в ГТД. Расшифровку данного кода также можно найти в Приложении № 9. Это ввозная таможенная пошлина и иные налоги и сборы, обязанность по уплате которых возникла с 01.09.2010 г.

Приведем расшифровку основных кодов платежей:

  • код «1010» в ГТД и код «1020» подразумевают уплату таможенного сбора за выполнение таможенных операций и за таможенное сопровождение соответственно;

  • код «2010» в ГТД и код «2020» используются для обозначения ввозной таможенной пошлины, обязанность по уплате которой возникла после 01. 09.2010 г. и до 01.09.2010 г. соответственно;

  • код «2040» обозначает специальную пошлину;

  • код «2050» в ГТД используется для обозначения антидемпинговой пошлины;

  • код «2060» – компенсационная пошлина;

  • код «5010» в ГТД – НДС (кроме НДС, взимаемого в Казахстане).

Полный перечень кодировок и подробная расшифровка к ним приведены в Приложении № 9 к Решению Комиссии ТС № 378.

Читайте также: ГТД в декларации по НДС

В графе 47 можно прописать несколько кодов. К примеру, «2010» и «5010». Затем по каждому из них следует указать основу для начисления, ставку (%) и сумму. Суммы, подлежащие уплате, рассчитываются в национальной валюте РФ (раздельно по каждому виду). Если ставка предусматривает сложение адвалорной и специфической составляющей – необходимо заполнять две строки по данному виду платежа (раздельно по каждой составляющей).

Читайте также: Как проверить ГТД по номеру онлайн?

ГТД на автомобиль, что это такое

На чтение 4 мин. Просмотров 83

Иногда, владельцы транспортных средств в своей практике сталкиваются с аббревиатурой ГТД, которая может употребляться в контексте с двигателем на автомобиль, или кузовом. Что это означает для ТС и можно ли на нем ездить — зачастую даже те, кто всю жизнь провёл за рулём, этого не понимают. Такое понятие употребляется в профессиональных кругах, эти знания также полезны для рядового пользователя авто.

Рекомендуется иметь хотя бы поверхностное представление о том, как оформить документы и ситуациях, когда они необходимы. Чтобы не попасть впросак, когда придётся с этим столкнуться, уделите внимание изучению вопроса.

Расшифровка ГТД

ГТД — это грузовая таможенная декларация. Назначение документа — учёт импортируемых и экспортируемых грузов на границе страны. Заполнение бланка на машину, обязательно для физического и для юридического лица, которое доставляет авто или его силовые агрегаты. Документы содержат информацию о пересекаемом границу ТС, или его отдельных силовых составляющих и непосредственно лице, которое осуществлянт эту транспортировку. При регистрации и любых последующих действиях номера авто, оформление ГТД – это важный бланк в полном пакете бумаг на кузов и двигатель.

При его оформлении, уполномоченные органы могут вести учёт тех движимых объектов, что пересекают границу государства.

ГТД, это такое свидетельство, которое дают в Таможне на авто, оно имеет свой индивидуальный номер. Это не случайный набор цифр, а структурированная информация, её расшифровка содержит следующие данные:

  1. Первые 8 цифр указывают данные конкретного таможенного поста, где состоялось оформление документа на автомобиль.
  2. Последующие числовые значения содержат информацию о дате составления документа.
  3. Семизначный порядковый номер — декларация.
  4. Номер транспортируемого товара.

К оформлению документов необходимо подходить со всей ответственностью. Правильно заполненная грузовая таможенная декларация позволит избежать последующих проблем.

Виды ГТД

Аббревиатура может распространяться на двигатель или на автомобиль, в зависимости от того, с какой целью, в каком виде они доставляются.

На двигатель

ГТД на двигатель оформляется в случае его отдельной доставки. Автомобили могут перевозить через границу в разобранном на отдельные запчасти виде. После пересечения таможни ТС вновь собирается для использования в личных целях. По этой причине появляется необходимость учёта экспорта и импорта силовых составляющих авто.

Заполненные и утверждённые бланки необходимо сохранять, так как последующие операции с ТС без него невозможны. При замене двигателя, продаже или переоформлении авто уполномоченные органы попросят предъявить соответствующий документ. Его отсутствие или несоответствие будет расцениваться как мошенничество.

В декларации на двигатель указывается серийный номер ДВС. Дополнительные документы подтверждают законность пересечения границы.

При этом, не имеет значения техническое состояние силового агрегата, ГТД подтверждает, что конкретный объект прошёл таможенный контроль .

Покупая импортируемый автомобиль, внимательно сверяйте серийные номера кузова и двигателя с паспортом ТС.

На транспортное средство

Процедура оформления ГТД на автомобиль требуется, когда авто приобреталось в другой стране. Тогда регистрация авто без декларации невозможна — её обязательно потребуют в отделе ГИБДД.

Оформление пакета документов — прерогатива владельца груза, таможенные органы занимаются только заверением декларации. В случае продажи автомобиля покупателю выдадут заверенную копию ГТД. Необходимо досконально проверить серийные номера при регистрации авто. Любая ошибка, или неточность могут вызвать трудности и лишние вопросы.

Если перевозимое ТС приобреталось за границей физическим лицом, кроме ПТС с ГТД прилагается приходной ордер, который также вправе потребовать сотрудники ГИБДД.

Как заполнить декларацию

Первоначально лицо, которое перевозило автомобиль через границу должно заполнить стандартизированный бланк заявления. Существует два вида бланков: основной ТД 1 и добавочный ТД 2.

ТД 1 состоит из нескольких идентичных листов, экземпляры которых предназначены для:

  • Органов таможни;
  • Ведения статистического учёта экспорта и импорта объектов;
  • Личного пользования заявителем при необходимости предъявления документа сотрудникам ГИБДД;
  • Регионального экземпляра.

Если перевозимый груз состоит из нескольких наименований, используют ТД 2.

Ситуации, в которых не требуется заполнение грузовой таможенной декларации

ГТД содержит несколько информационных бланков. Один из них называется ДТС или декларация таможенной стоимости. Оформление этого документа требуется, когда перевозимый через границу груз облагается налогом. То есть ТС, или его запчасти как товар, ввозимый или вывозимый из страны, должен быть соответственно оформлен. Но существуют  официально установленные и одобренные законодательно ограничения:

  1. Если стоимость оценивается ниже 5000$ (только при условии многоразовых поставок по одному и тому же контакту).
  2. Если ТС перевозится физическим лицом, которое не имеет интерес к коммерческой выгоде.
  3. Законодательно утверждённый перечень груза, не облагающийся пошлинами.
  4. Действие особых таможенных режимов. Например — Таможенный союз.

формат гтд в счет фактуре

К примеру, заполняя декларацию в графе описания продукта, нужно совершить такую последовательность действий:К примеру, по запросу «датчик масла» будут найдены примеры декларирования с несколькими типами описания продукта вида: «. датчик давления . » «. устройство для измерения давления — датчик специал. «Из предложенных вариантов ответов на запрос нужно избрать наибольшее совпадение по ключевикам, которые относятся к мотивированной товарной группе по заявленному грузу в декларации.
Пишут на основном бланке: «см. на обороте».

  • Коды дублировать нельзя, допустимо указать на ранее вписанные данные со ссылкой «см. графу №».
  • Декларация заверяется подписью и печатью декларанта.
  • Задачки распорядителя груза

    Приложения к нему: спецификации, счета (инвойсы), упаковочные листы.

  • Оригинал договора.
  • Квитанции об оплате таможенных платежей после определения цены продукта.
  • Тогда номер декларации по этим данным будет записан так:Номер ГТД, расшифровка его цифровых частей определяется содержанием инфы, сокрытой в нем и сгруппированной в три блока:

    1. 1-ый блок — код таможенного подразделения, осуществляющего контроль над ввозом продукта.
    2. 2-ой — дата регистрации декларации, указываются денек, месяц, две последние числа текущего года.
    3. Пройденный контроль удостоверяется разрешительными отметками на ГТД, в итоге чего она становится типичным паспортом продукта, который имеет юридическую силу в управляющих и таможенных структурах зарубежья.

      ГТД: расшифровка и пример нужной инфы в документе

      В нашем случае — это условия СИП (CIP) определений Инкотермс, что значит, что перевозка и страхование груза оплачены до определенного пт на пути следования. Может быть до границы, до склада, в нашем случае — до таможенного склада в Москве.

    4. Графы для указания платежей и пошлин. Каждый показатель указывается в собственной графе: таможенные сборы — 1010, пошлины — 2010, НДС — 5010.
    5. Правила для наполнения полей декларации при экспорте и импорте схожи:

    • 1-ый раздел обозначает тип декларации, маркируется знаками ИМ (импорт) либо ЭК (экспорт). В случае ввоза продукта на таможенную местность РФ без ограничений в отношении использования 2-ой подраздел графы проставляется кодом 40.

      Для наполнения ГТД по ввозу, при расшифровке полей декларации, потребуются дополнительно:

      • Подтверждение соответствия ввозимых грузов. Спецификация оформляется на фирму-получателя.
      • Список документов для дизайна ГТД

        Неважно какая декларация, независимо от того — экспорт либо импорт оформляет участник внешнеэкономической деятельности, начинается с номера. Ах так смотрится он в икс-формате:Все элементы номера декларации располагаются через разделитель, при всем этом пробелы меж ними недопустимы.Пример с цифрами: допустим, код таможенного органа 10101020, дата выпуска (ввоза продукта) — 6 декабря 2012 года, порядковая запись в журнальчике — 00012503.

      • Таможенным брокером, который производит декларирование от имени распорядителя.
      • Декларант и (либо) брокер представляет и предъявляет продукты таможенному органу в согласовании с заполненной ГТД.

      Она заполняется таможней.

    • 2 графа — отправитель, 8 графа — получатель. Пишутся полные наименования, юридический адресок, страна отправления-получения указывается в виде кода в согласовании с правилами таможенного дизайна.
    • Графа 9 показывает лицо, ответственное за фин. урегулирование, обычно это контрагент по договору.

      Может совпадать с получателем груза.

    • В 12 графе указывается общая сумма поставки. 22 и 23 — указывают, в какой валюте поставка, с кодами валютной единицы договора и курсом валюты на дату дизайна декларации.
    • Поле графы 20 — условия поставки — заполняется по инфы, предоставленной контрактными документами. Тут фиксируется место доставки.

      Документы для дизайна импорта

    • Другая информация, нужная для наполнения ГТД.

    Принципиально! Хоть какое расхождение меж заявленными в декларации и фактическими данными повлечет задержку таможенных процедур, обернется дополнительными расходами на кругленькую сумму.

  • Сертификат формы СТ-1 (сертификат страны происхождения продукта).
  • Прайс-лист, счет, инвойс, в каком есть указание на номер ГТД. Расшифровка кодов продукта в прайс-листе не требуется.
  • Сертификаты свойства, эксплуатационные документы, оформленные за рубежом в стране-производителе.
  • Особенность: при реэкспорте может пригодиться сертификат формы А, доказывающий происхождение продукта в Рф.

    К примеру, запчасти для автомобилей, с одним кодом по ТН ВЭД до девятого знака.

  • ТД 2 – дополнительные сброшюрованные листы таможенной декларации. Заполняются при наличии грузов, не попавших в основной лист декларации. Сюда можно внести менее 3-х разных товарных номенклатур, при всем этом общее число единиц груза не может превосходить 33 позиций на один основной лист декларации.
  • При всем этом расшифровка ГТД в счет-фактуре схожа набору частей при формировании номера декларации.

  • Товарная позиция: через символ косой черты в счет-фактуре указывается порядковый номер продукции из 32 графы основного либо дополнительного листа таможенной декларации.
  • Она подменяет ТД 2 и используется при отсутствии неотклонимой уплаты пошлин, налогов и сборов, лицензий и квот.Главные требования к наполнению грузовой таможенной декларации заключаются в последующем:

    • Информация в графах ГТД, расшифровка их содержания в согласовании с систематизацией и кодами вносится на российском языке.
    • Записи должны быть разборчивы, чтоб просто читались.
    • Особенности документов для грузов в таможенном режиме экспорта/импорта

      Характеристики должны соответствовать практически перевозимым грузам. При таможенном оформлении значение придается правильному декларированию грузов, соответствию их товарной номенклатуре внешнеэкономической деятельности – ТН ВЭД. От того, как точно избранный код соответствует товару, зависят таможенные пошлины, сборы и платежи.ТН ВЭД – это систематизированные коды грузов, которые приняты для воззвания в интернациональной торговле.

      • Счет-фактура, которая содержит номер ГТД. Расшифровка товарных кодов в этом документе не неотклонима, потому что в ней указываются итоговые характеристики экспорта либо импорта.

        С 1 октября 2017 года оформление счет-фактур проводится заного. Конфигурации задели правил наполнения графы 11. На сей день номер ГТД в счетах фактурах при таможенном оформлении грузов — неотъемлемая часть документа.

      Информационные данные, отраженные в ГТД, свидетельствуют о легитимности сделки и перемещаемого груза. Обосновывают отсутствие контрафактной продукции в полном согласовании с правилами ввоза и вывоза продукта на местности РФ.

      Требования к ГТД

    • Порядковый номер, присваиваемый по журнальчику регистрации грузовых таможенных деклараций таможней, которая производит регистрацию декларации. Раз в год начинается поновой, с единицы.
    • Ну и, естественно, не следует забывать о позиции «остальные» продукты. На таможенном сленге такие группы именуются «плетенкой». Употребляется, когда вашего груза нет в поименованных товарных разделах и позициях. Тогда в описании употребляется цепочка «прочие-прочие-прочие».
      И сначала это правило распространяется на оформление ГТД – расшифровка аббревиатуры значит грузовую таможенную декларацию.При экспортных и привезенных из других стран перемещениях грузов главным действием участника ВЭД остается его декларирование и оформление соответственного документа на вывоз (ввоз).Оформление грузовой таможенной декларации при перемещении продуктов делается последующими лицами:

      • Декларантом — распорядителем груза.
      • Поля декларации — правильное наполнение

      • Информация о грузе в согласовании с кодовым классификатором продуктов (товарной номенклатурой ВЭД).
      • Сведения о таможенных пт пропуска, в том числе о месте дизайна декларации и месте прохождения границы.
      • Данные о приобретенной квоте на продукт (если на ввоз либо вывоз продуктов они имеются).
      • Сведения о таможенных пошлинах и сборах, рассчитанных зависимо от заявленной цены перемещаемого груза.
      • Это осуществляется при помощи разделения листов декларации. Они распределяются в последующих направлениях:

        • 1-ый — остается в таможенном отделении для архива выпуска декларации.

        Ниже представлен эталон полного наполнения ГТД по ввозу: расшифровка по графам с указанием заполненной инфы.Более тщательно о правилах наполнения деклараций, в том числе в электрическом виде, можно выяснить из видео ниже.

        В представленном образчике — 1 продукт, 1 место. Это принципиальный показатель, он должен соответствовать реальной перевозке.

      • Седьмая графа заполняется, если было проведено предварительное декларирование, проставляются особенности дизайна.
      • Список документов, подтверждающий данные о таможенной оценке груза и финансовом контроле.
      • Наличие лицензий, официальных разрешений от представителей власти, если того просит перемещаемый продукт, наличие сертификатов свойства и происхождения от завода-изготовителя.
      • Пакет документов, дающий право распорядителю груза совершать его перемещение — свидетельство о гос регистрации, ИНН и сертификат участника ВЭД, регистрационные документы личного бизнесмена, паспорт.

      Перемещение продуктов через таможенную границу РФ может быть ориентировано на ввоз либо вывоз. Документы, сопровождающие оформление ГТД для внешнеторговых сделок, различны.

    • Заглавие и коды страны заключения договора – основания для перемещения груза (экспорт либо импорт).
    • Сведения о стране происхождения и стране предназначения с кодами, принятыми Таможенным кодексом РФ.
    • Условия поставки, тс на границе, валюта договора. Эти сведения дублируются из паспорта сделки, который оформляет банк отправителя либо получателя продукта.
    • Левый последний раздел значит форму декларации, где 1-ая цифра 1 значит, что это основной лист — ТД1, а 2-ая показывает на число дополнительных листов. Если их не будет оформлено, проставляют 1/1.
    • Графа 4 заполняется, если находятся погрузочные спецификации.
    • В пятой и 6-ой графах указывается общее ввозимых продуктов и количество грузовых мест.

      Набираем верно: номер ГТД, расшифровка, пример сотворения

      Транспортировка грузов меж разными государствами просит наличия неотклонимого пакета документов, предъявляемых участником ВЭД на таможне.Для прохождения контроля и дизайна ГТД будет нужно:

      • Договор (контракт купли/реализации), заключенный меж физическими либо юридическими лицами.

        Декларантами могут выступать только русские юридические лица и приравненные к ним в рамках таможенного законодательства личные предприниматели, перемещающие продукт через границу РФ для коммерческих целей.Нужные сведения о товаре, его цены, отправителе, получателе и другие данные фиксируются в декларации.

      • Исправления в декларации допускаются только для цифр. При всем этом их заносят, аккуратненько зачеркивая и надписывая верные (уточненные) данные.
      • Все корректировки заверяются подписью и печатью декларанта.
      • Специфичность номера в счет-фактуре

      Принципиально. В неких случаях продукты оформляются по описи.

      Если продукт оформлен перечнем, в этом элементе номера счет-фактуры указывается количественный порядковый пункт из перечня продуктов. Пробелы меж элементами номера не допускаются.Есть случаи, когда номер ГТД в счет-фактуру вносить не надо, к примеру в случае импорта продукта из государств ЕАЗС (Евразийско-азиатского союза).В грузовой таможенной декларации указываются разные характеристики, соответствующие для каждого определенного варианта перемещения грузов через таможенную границу РФ.

      хххххххх/хххххх/хххххххх/хх

      Или оформляется проформа-фактура в виде приложения к договору, либо спецификации.

    • Документы, подтверждающие закупку продукта на местности РФ, сертификат формы А.
    • При авто перевозке грузов непременно предоставление в таможенные органы TIR-carnet (документ страхования автоперевозчика) и CMR – интернациональная автотранспортная затратная.
    • Технические свойства продукции, отраженные в соответственных актах, приложенных к спецификациям либо счет-фактуре договора.
    • Пример того, как будет смотреться номер ГТД в счет фактуре, (расшифровка цифровых блоков дана в серьезном согласовании с декларацией) — видно из последующей схемы:Как обозначено в представленном формате, номер счет-фактуры состоит из последующих частей:

    1. Номер грузовой таможенной декларации, которая оформляется к соответственному бухгалтерскому документу.

      Секреты ТН ВЭД, либо как верно найти код продукта

      Правила наполнения декларации регламентируются ФЗ № 113 «О таможенном регулировании в Русской Федерации» в редакции от 27.11.2010 г.По собственной структуре бланк таможенной декларации состоит из 2-ух форм:

      • ТД 1 – основной лист декларации, на нем проставляется символ экспорта либо импорта (ЭК, ИМ соответственно). Заполняется на идиентично называемые продукты.

        Разделы, подразделы и позиции товарных групп

        В ТН ВЭД продукты систематизированы на категории и типы, снабжены коротким наименованием и описанием.

        Товарные характеристики формируются по:

        Для тех грузов, которые не классифицированы в разделах либо группах, применяется в ГТД расшифровка кодов последующая: «остальные» и «остальные из иных» позиций товарной номенклатуры.

        Будьте всегда в Настроении

        ГТД: расшифровка, правила и эталон наполнения

        От Masterweb

        Юридические и физические лица, которые перемещают продукт через границу Рф в коммерческих целях, именуются участниками внешнеэкономической деятельности – ВЭД. Таможенные органы РФ держут под контролем законность внешнеэкономической деятельности участников. Для того чтоб бизнес, связанный с вывозом (импортом) либо ввозом (экспортом) продукта через границу был удачным, участники ВЭД должны соблюдать правила дизайна соответственной документации.

        Например, на слово «трактор» поисковик ТН ВЭД может выдать коды трактора сельскохозяйственного, также игрушечного. Пристально обусловиться с товарной группой – залог удачного декларирования. Чем полнее будет запрос, тем поточнее коды оформляемого груза.

      • ГТД принимается таможней в печатном виде. От руки может быть наполнение стоимостных характеристик со значением более 9 символов.
      • Неприемлимо внесение инфы, не содержащейся в графах бланка. На обороте указывают сведения, которые не уместились в поля декларации.

        Статистика, учет и контроль

        Грузовая таможенная декларация неотклонима при скрещении границы в 98 странах, с которыми Наша родина находится в торговых отношениях. Не считая того, ГТД употребляется в качестве муниципального учетно-статистического документа. Если документ оформляется в электрическом виде, то в 3-ем подразделе ставится маркер ЭД — электрическая декларация. В нашем образчике декларация оформлена в картонном виде, и этот подраздел в декларации не заполнен.

      • В правом верхнем углу бланка в разделе А указывается номер ГТД, расшифровка включает три группы цифр, под которыми указан код таможни, дата составления декларации и порядковый номер по журнальчику учета.
      • 2-ой лист ГТД направляется в отдел статистики.
      • 3-ий — отдается декларанту для отчетности участника ВЭД в налоговой инспекции и банке.
      • 4-ый лист при экспорте прикладывается к сопроводительным документам и направляется в пункт пропуска на границе, при импорте остается в отделе цены таможни, оформившей досмотр ввезенного груза.
      • Без дизайна этого документа таможня не пропустит груз к перемещению через границу.Список сведений, содержащихся в грузовой декларации, разделяется на последующие главные блоки:

    Управляйте своим рабочим процессом: доводим дело до конца с Дэвидом Алленом

    Кто такой Дэвид Аллен?

    Дэвид Аллен - автор, консультант, исполнительный коуч и международный лектор. Он широко признан ведущим мировым авторитетом в области личной и организационной производительности. Он является основателем компании Дэвида Аллена, которая через своих глобальных партнеров предоставляет услуги, направленные на повышение производительности, пропускной способности и согласованного исполнения. В число клиентов входят некоторые из самых престижных корпораций мира, в том числе более 40% из списка Fortune 100.

    Его тридцать пять лет новаторских исследований, коучинга и обучения некоторых из самых эффективных профессионалов в мире принесли ему признание Forbes в качестве одного из «пяти лучших тренеров для руководителей» в США и «100 лучших идейных лидеров» журнала Leadership Magazine . Fast Company провозгласила Дэвида Аллена «одним из самых влиятельных мыслителей в мире» в области личной продуктивности за его выдающиеся программы и работу по управлению временем и стрессом, силу согласованного внимания и видения, а также его новаторские методологии. в менеджменте и топ-менеджменте
    пик производительности.

    Дэвид - автор трех книг; международный бестселлер Getting Things Done: The Art of Stress-Free Productivity (широко известный под сокращенным названием GTD ® ), Ready for Anything и Making It All Work: Winning at the Game of Work и Бизнес жизни . Getting Things Done был постоянным бизнес-бестселлером с момента его публикации в 2001 году, а пересмотренное издание 2015 года теперь опубликовано на 30 языках.Журнал TIME объявил Getting Things Done «определяющей деловой книгой своего времени по самопомощи».

    GTD имеет международное признание среди корпоративных предприятий, учреждений и предпринимателей. Это дало начало процветающей индустрии GTD веб-сайтов, блогов и программных приложений. Поиск в Интернете дает десятки миллионов ссылок. Дэвид Аллен - большая редкость в мире Твиттера, поскольку он один из немногих людей, не являющихся знаменитостями, у которого более миллиона подписчиков зависят от его информативного остроумия и вдохновения. PC Magazine отметил его как одного из «сотни самых популярных» в Twitter.

    Декодирование сверхчеловека - Управляйте своим рабочим процессом с Дэвидом Алленом на сшивателе

    Дэвид Аллен - автор международного бестселлера «Как добиться успеха: искусство продуктивности без стресса». Forbes назвал его одним из пяти лучших тренеров для руководителей в США. Fast Company заявила, что Дэвид Аллен является «одним из самых влиятельных мыслителей мира». Сегодня Дэвид рассказывает о своем опыте и о том, как началась работа «Getting Things Done».


    Кто такой Дэвид Аллен?

    Дэвид Аллен - автор, консультант, исполнительный коуч и международный лектор. Он широко известен как ведущий мировой авторитет в области личной и организационной продуктивности. Он является основателем компании Дэвида Аллена, которая через своих глобальных партнеров предоставляет услуги, направленные на повышение производительности, пропускной способности и согласованного исполнения. В число клиентов входят некоторые из самых престижных корпораций мира, в том числе более 40% из списка Fortune 100.

    Его тридцать пять лет новаторских исследований, коучинга и обучения некоторых из самых эффективных профессионалов в мире принесли ему признание Forbes как одного из «пяти лучших тренеров для руководителей» в США и как одного из лучших тренеров. «100 лучших идейных лидеров» по ​​версии журнала Leadership Magazine . Fast Company приветствовала Дэвида Аллена как «одного из самых влиятельных мыслителей в мире» в области личной продуктивности за его выдающиеся программы и письма о времени и управлении стрессом, силу согласованного фокуса и видения, а также его новаторские методики в менеджмент и исполнитель

    пиковая производительность.

    Дэвид - автор трех книг; международный бестселлер Getting Things Done: The Art of Stressless Productivity (широко известный под сокращением GTD®), Ready for Anything и Making It All Work: Winning at the Game of Work and Business Жизни . Getting Things Done был постоянным бестселлером в бизнесе с момента его публикации в 2001 году, а пересмотренное издание 2015 года теперь опубликовано на 30 языках. Журнал TIME объявил книгу Getting Things Done «лучшей деловой книгой своего времени по самопомощи».

    GTD имеет международное признание среди корпоративных предприятий, учреждений и предпринимателей. Это дало начало процветающей индустрии GTD веб-сайтов, блогов и программных приложений.Поиск в Интернете дает десятки миллионов ссылок. Дэвид Аллен - большая редкость в мире Твиттера, поскольку он один из немногих людей, не являющихся знаменитостями, у которого более миллиона подписчиков зависят от его информативного остроумия и вдохновения. PC Magazine отметил его как одного из «сотни самых популярных» в Twitter.


    Особенности

    [3:22] Почему Дэвид и его жена переехали в Амстердам

    [7:22] Обучение за рубежом в Швейцарии

    [14:33] 35 вакансий до 35

    [21:19] Организация списка следующих действий

    [25:01] Введение в договоры

    [35:07] Захват и ваши следующие действия

    [38:51] Если вы ведете календарь, вы можете это сделать

    [40:48] Экстернализируйте свой мозг

    [44:01] Создание хороших следующих действий


    Ресурсы

    Закат Запада Гельмут Вернер, Освальд Шпенглер

    Спринг

    Как все делается, Дэвид Аллен

    Рабочая тетрадь «Как добиться успеха», Дэвид Аллен

    Как добиться успеха Гуру Дэвид Аллен и его культ сверхэффективности

    Джон-Роджер

    Рассел Бишоп


    Продолжите свое путешествие в мир высоких достижений с Дэвидом Алленом

    Твиттер

    Сайт



    Заявление об ограничении ответственности

    Эта информация предоставляется вам только в образовательных и информационных целях. Это предоставляется в качестве инструмента самопомощи, чтобы помочь вам понять свою генетику, биологические данные и другую информацию для повышения вашей производительности. Это не медицинский или психологический совет. ООО «Виртуозность», или «Расшифровка сверхчеловека», не врач. ООО «Виртуозность» не занимается лечением, профилактикой, лечением или диагностикой заболеваний. Эта информация должна использоваться на ваш страх и риск, исходя из вашего собственного суждения. Чтобы ознакомиться с полным отказом от ответственности, перейдите на (Decodingsuperhuman.com/disclaimer).


    См. Acast.com / privacy для обеспечения конфиденциальности и отказа от рассылки.

    Как использовать «Помни о молоке», чтобы получить систему GTD за 10 простых шагов… бесплатно | автор: Davide Mastromatteo

    Если вы следите за мной на Medium , вы, вероятно, задаетесь вопросом, почему я решил написать что-то, не связанное с Python и программированием, как я обычно делаю.

    Легкий ответ заключается в том, что лучший язык программирования в мире не может сделать вас продуктивным сам по себе.

    Вам нужно нечто большее.

    Я был энтузиастом GTD некоторое время и хочу поделиться с вами кое-чем о том, как я использую эту методологию.

    Обратите внимание: эта статья не спонсировалась Дэвидом Алленом, его организацией или веб-сайтом «Помни о молоке».

    Еще нет… 🙂

    GTD - это аббревиатура от «Getting Things Done». Это один из самых популярных методов повышения производительности, используемых сегодня… и один из самых «разветвленных», если использовать термин ИТ. 🙂

    Эта статья не предназначена для полного объяснения методологии GTD; Я предполагаю, что вы уже знаете GTD и то, как она работает.Однако, если вы этого не сделаете, в Интернете есть множество бесплатных руководств и ресурсов о GTD и всех его клонах (например, ztd и других), но чтобы узнать больше, я советую купить книгу «Getting Things Done» автора Дэвид Аллен, автор данной методики.

    Вы можете легко найти его на Amazon, возможно, воспользовавшись моей рекламной ссылкой;)
    (в данном случае… спасибо!).

    Remember the milk ( RTM ) - популярный сервис для управления списками задач и их синхронизации на всех ваших устройствах.Поскольку методология GTD основана на списках задач и Remember The Milk доступна из любого браузера или из специального приложения, доступного для iOS и Android, это отличный инструмент для управления вашей повседневной системой GTD.

    Помните, что молоко - это проект « freemium ». Вы можете использовать множество функций бесплатно, и в основном , все функции, которые вам понадобятся, чтобы следовать этой статье, бесплатны. Обновление до учетной записи «pro» (то есть $ 39,99 в год) дает
    гораздо больше функций (например, возможность использовать интеграцию с If This Than That для автоматизации чего-либо или приложения Apple Watch и т. Д.…).

    Однако в настоящее время у меня есть бесплатная учетная запись, и меня это вполне устраивает. 🙂

    Итак, если вы знаете, как работает GTD, и что вы создали учетную запись Помните учетную запись milk , мы можем начать.

    Прежде всего, мы будем основывать нашу систему на трех основных списках:

    • Входящие : Это системный список, вы не можете удалить или изменить его.
      Поместим сюда все задачи, которые создадим. Имея существующий системный список… вам не нужно ничего делать в данный момент.
    • Ожидание : Это список, в который мы поместим все задачи, которые мы делегировали другим. Нам нужен этот список, так что создайте его сейчас.
    • Может быть, когда-нибудь : Это список, в который мы поместим все задачи, которые еще не применимы, что-то, что мы начнем когда-нибудь… может быть… Однако нам нужен этот список, так что давайте и создадим его сейчас.

    Теперь вы, вероятно, задаетесь вопросом… почему мы создали именно эти два списка? Почему у нас нет списка Next Actions ?

    Что ж, на самом деле нам не нужен «настоящий список» для этого, мы можем легко создать умный список .

    Итак, создайте интеллектуальный список и назовите его « Следующие действия ». Будучи «умным» списком, это не настоящий список, это просто запрос, который показывает некоторые результаты, извлеченные из реального списка, который у вас есть. Если вы программист, думайте об этом, как о представлении в базе данных.

    Итак, запрос для списка Next Actions выглядит следующим образом:

     list: Inbox и dueBefore: Tomorrow 

    Примечание: вы можете создать запрос также с помощью мастера, но я предпочитаю использовать редактор запросов.Узнайте больше о редакторе запросов по этой ссылке).

    Поняли? Ваш список Следующие действия - это просто список входящих сообщений, отфильтрованный по всем элементам, срок выполнения которых до Завтра (следовательно, Сегодня или когда-нибудь в прошлом).

    Хорошо, теперь у нас есть список Next Actions для всех задач, которые должны быть выполнены до завтра, но что делать с теми, которые должны быть выполнены завтра или когда-нибудь в будущем?

    Давайте создадим для них умный список « Scheduled ». Запрос для этого умного списка:

     список: Входящие и срок после: Сегодня 

    Довольно просто, не правда ли? Готов поспорить, вы поняли идею, поэтому нет необходимости объяснять это.

    Теперь… последняя проблема. Если мы перейдем к списку входящих, мы увидим все созданные нами задачи, потому что это реальный список, который содержит все задачи, которые мы создали. Это настоящий беспорядок! Как это решить?

    Вот и все! С очередным умным списком ! 🙂

    Давайте создадим еще один смарт-список и назовем его « Мой почтовый ящик ».Запрос для этого умного списка будет:

     список: Входящие и срок: никогда 

    Это так просто!

    Вся наша система основана на сроках. Если у задачи есть срок выполнения сегодня или раньше, это задача Next Action , если у нее есть срок выполнения завтра или послезавтра, это задача Scheduled и если у нее нет срока выполнения дата, она все еще находится в папке "Входящие" и ждет, чтобы ее запланировали.

    Таким образом, каждый день, просматривая свой список Next Actions , вы будете иметь актуальную картину того, что вам нужно сделать, не правда ли?

    Теперь основная часть системы сделана, чего нам не хватает?

    « контекстов » и « проектов ».

    Для GTD « Projects » я просто использую теги. Когда я создаю новую задачу, я назначаю ее тегу (или создаю новый тег, если это первая задача нового проекта) с именем проекта. Так что мои проекты - это мои теги, а RTM показывает мне все мои проекты в разделе Теги.

    Для « Contexts » я использую только четыре контекста: @work, @home, @phone и @pc, но, конечно, вы можете создать столько контекстов, сколько захотите.

    Итак, для контекстов @work и @home я использую функцию « Location ».Я создал эти два места со своим настоящим адресом. Для «виртуальных» местоположений, таких как @phone или @pc, я создал еще два местоположения, и, поскольку RTM действительно хочет иметь физический адрес для каждого отдельного местоположения (я бы предпочел, чтобы это было не так), я назначил адрес «Antartica " им. Это гарантирует мне, что я никогда не получу уведомлений о задачах в этом месте ... То есть, я живу в Италии, Восток довольно далеко (и довольно холодно) отсюда. 🙂

    Хорошо, почти готово. Вот несколько дополнительных советов:

    • Если вы щелкните контекстное меню списка, вы можете добавить список в раздел « Избранное ».Сделайте это для следующих списков
      : Мой почтовый ящик , Следующие действия , Ожидание , Может быть, когда-нибудь , Запланировано , и в разделе «Избранное» у вас будут только списки вашей системы GTD.
    • Если вам нужен список Archive , в котором вы можете увидеть все выполненные задачи, просто создайте еще один умный список с именем Archive и со следующим запросом: status: completed (вы также можете добавить этот список в раздел «Избранное» также).
    • Если хотите, создайте умный список для каждого проекта, который у вас есть, и не добавляйте их в раздел «Избранное». При этом у вас будет раздел « Избранное », заполненный всем списком вашей системы GTD, и раздел « Smart List » - смарт-списками всех созданных вами проектов.

    Использовать эту новую настройку очень просто.

    Если вам нужно освободить мозг от всех задач, которые вам нужно выполнить, просто перейдите в список Мои входящие и начните создавать задачи.Не делайте ничего прямо сейчас, просто очистите свой мозг и заполните список Мои входящие всем, что вам нужно сделать.

    Позже перейдите к списку Мои входящие и просмотрите все эти задачи по очереди. Щелкните по нему и назначьте контекст и проект. Когда будете готовы, просто спланируйте это, выбрав дату выполнения. Если задача должна быть выполнена сейчас или как можно скорее, установите «Сегодня» в качестве срока выполнения, если она должна начаться когда-нибудь в будущем, просто выберите конкретную дату начала. Каждый раз, когда вы устанавливаете срок выполнения, задача будет перемещаться из умного списка Мои входящие в один из двух других умных списков ( Запланированный или Следующее действие ).

    Теперь, если у вас есть задача, которую вы хотите делегировать, просто переместите ее физически в список Waiting For и сделайте то же самое, если вы хотите поместить ее в список Someday, Maybe .

    Завершение задачи - тривиальная операция: просто выберите ее и нажмите кнопку на верхней панели, чтобы установить статус как завершенный. Чтобы удалить задачу, выберите ее и нажмите клавишу DEL на клавиатуре.

    Наконец, чтобы отложить задачу, которая находится в списке «Следующее действие», просто измените дату выполнения.Это можно сделать одним щелчком мыши на панели.

    Давайте просто подведем итог 10 шагов, необходимых для запуска системы.

    1. Создайте список под названием « Ожидание »
    2. Создайте список под названием « Может быть, когда-нибудь »
    3. Создайте умный список под названием « Следующие действия » со следующим запросом
      list: Входящие и подлежащие оплате : Завтра
    4. Создайте интеллектуальный список под названием « Запланировано » со следующим запросом
      список: Входящие и срок выполнения После: Сегодня
    5. Создайте интеллектуальный список под названием « Мой почтовый ящик » со следующим запросом
      list: Входящие и срок сдачи: никогда.
    6. Создайте интеллектуальный список под названием « Архив » со следующим запросом
      статус: завершено
    7. Создайте набор тегов , по одному для каждого вашего проекта
    8. Создайте набор местоположения , по одному для каждого контекста, который вы хотите создать
    9. Установите весь свой список GTD и умный список как избранных и отсортируйте их все по своему усмотрению
    10. наслаждайтесь!

    Вот и все!

    Ваша система GTD запущена и работает бесплатно! 🙂

    Д.

    A Сброс ГТД. 1 января каждый год я люблю делать… | Рэйчел Эндрю

    Каждый год 1 января мне нравится делать «сброс GTD». Для меня это шанс убедиться, что моя система GTD подготовлена ​​к еще одному напряженному году, оценить, насколько хорошо система работает для меня, и отказаться от некоторых проектов, которые не были выполнены в прошлом году.

    Даже самый заядлый специалист по GTD может немного отстать в сборе всего. Моя личная проблема - это то, что нужно сканировать. Несмотря на то, что у меня есть отличный сканер и система, что делать с отсканированными элементами, я помещаю их в свою папку дел и оставляю там.Итак, первая фаза - собрать действительно хороший набор вещей, лежащих вокруг, вещей в папках электронной почты, всего в моей голове. Так же, как вы делаете, когда начинаете работать с GTD или в своем еженедельном обзоре. Однако я трачу на этот этап гораздо больше времени в моем ежегодном сбросе.

    Если вы сделаете это после установления некоторых целей на год, это может оказаться полезным процессом. Какие проекты являются частью этих целей? Что тебе нужно сделать? Продолжайте добавлять все, что думаете, в свой почтовый ящик.

    На этом этапе я часто сбрасываю список задач в существующих проектах обратно в папку «Входящие».У меня есть несколько проектов, которые заканчиваются странным набором задач. Я довольно часто использую списки отдельных действий в OmniFocus, и они могут оказаться немного дезорганизованными. Я помещаю идеи для статей и сообщений блога в списки единого действия. Часто сообщение может быть представлено как одно дело. Однако многие идеи написания на самом деле являются проектом сами по себе, включая исследование, интервьюирование людей или написание примеров кода. Отправляя их обратно в свой почтовый ящик, я могу глубже задуматься о том, хочу ли я, чтобы эта работа стала проектом прямо сейчас.

    Прежде, чем я начну обрабатывать свой почтовый ящик, я посмотрю, как система работала за последний год. Я сначала нахожу проекты, которые по той или иной причине действительно потеряли актуальность. Я решаю, отбросить их или переместить в «Когда-нибудь / Может быть».

    Я храню проекты в папках в OmniFocus, и в этом году я реорганизовал их, чтобы лучше отразить различные аспекты моей жизни и работы. Как уже упоминалось, я могу чрезмерно полагаться на списки единого действия, поэтому в этом году я оптимизировал их, чтобы попытаться переместить больше элементов в соответствующие проекты.

    Я использую повторяющиеся и запланированные задачи в OmniFocus. В рамках проверки я убеждаюсь, что все повторяющиеся задачи, заданные в прошлом году, были удалены, если теперь они не требуются. Многие из моих целей на год включают в себя выполнение чего-либо неоднократно - например, публикацию на одном из моих сайтов раз в неделю. Я добавляю эти вещи как повторяющиеся задачи, поэтому действие просто появится в моем списке, когда придет время его сделать. Я также использую повторяющиеся задачи для вещей, которые должны происходить регулярно - задач по обслуживанию сервера и таких вещей, как подача НДС.Я проверяю, все ли это имеет смысл, и добавляю все, о чем думаю.

    При этом я должен быть осторожен, чтобы не допустить, чтобы проверка этой системы подтолкнула меня к желанию изменить способ организации электронной почты, командных досок Trello, Evernote или Dropbox. Если это произойдет, я добавлю его как проект и продолжу. В противном случае я отвлекусь на попытки все организовать!

    Теперь я могу обрабатывать почту в обычном режиме. Я уделяю немного больше внимания тому, чтобы задачи, которые на самом деле являются проектами, превратились в настоящий проект с помощью следующего действия.Если что-то является регулярной задачей, я обязательно настраиваю ее как таковую, назначаю сроки и откладываю дела, о которых мне не нужно беспокоиться на некоторое время. Например, у меня уже есть довольно напряженный график выступлений и написания статей на следующий год, поэтому я запланировал все презентации и семинары, статьи и книги, которые мне нужно написать, с разумными датами отсрочки.

    Во время обработки я снова обращаюсь к моей проверенной системе и оцениваю все относительно моих целей на год. Цель состоит в том, чтобы иметь хороший обзор всего, что мне нужно сделать, в упорядоченном виде.Система должна действительно отражать мои следующие действия по отношению ко всем моим проектам, обязательствам и целям на предстоящий год.

    Мне очень нравится этот процесс. Это шанс начать все сначала с ясным умом. Шанс отказаться от проектов, которые мне действительно не нужно было делать, и которые просто теребили меня. Это шанс подумать о том, что сработало в прошлом году, а что нет, и перенести лучшее на следующий год. К тому времени, как я это сделаю, у меня уже есть хорошее представление о своих планах и целях - этот процесс гарантирует, что у меня есть система для их выполнения.

    Дайте мне знать в комментариях, если вы сделаете что-то подобное, или если у вас есть какие-либо советы по сбросу рабочего процесса GTD.

    Анализ глобальной базы данных по терроризму

    В качестве финального задания курса Социальные данные (2017) в DTU

    Проект поддерживается polakowo Этот проект выпущен на условиях лицензии MIT.

    Содержание


    Далее вы найдете оглавление. Чтобы перейти к разделу, щелкните соответствующий заголовок.

    1. Введение


    Задача этого проекта - изучить террористические события в мире с 1970 по 2015 год.

    Основные цели:

    • для выявления и выделения географических и временных моделей терроризма,
    • , чтобы раскрыть основные параметры успешного теракта, и
    • , чтобы пользователь мог настраивать анализ и исследовать данные наиболее интерактивным способом.

    Идея проекта заключается в том, чтобы выяснить, как терроризм развился в западном мире и нужно ли нам возводить высокие стены, чтобы защитить себя от будущих угроз. Мы выбрали нашу тему более глобальной, потому что

    • Он позволяет агрегировать на многих географических уровнях, включая земной шар, регионы, страны, штаты и города
    • Он очень разнообразен и содержит много интересных атрибутов
    • Имеются временные и географические данные

    Более общую информацию о проекте вы найдете в видео ниже.

    SocialData2017 из polakowo на Vimeo.

    2. Набор данных


    Набор данных является очень полным и содержит много информации, связанной с терроризмом. Мы загрузили весь набор данных Global Terrorism Database , доступный на домашней странице Gtd. Он содержит 156 772 теракта x 137 элементов, и занимает 142,3 МБ дискового пространства. Стоит отметить, что он почти полностью закодирован (строки / длинные числа в короткие числа).Чтобы декодировать набор данных, мы просмотрели кодовую книгу, доступную здесь. После изучения кодовой книги мы обнаружили, что некоторые столбцы являются избыточными или неактуальными, которые мы удалили. См. Соответствующий блокнот Cleaning Data для получения дополнительной информации о нашем подходе.

    Мы закончили работу над 23 колонками, которые содержат как количественную, так и качественную информацию, представляющую основной интерес. После этапов декодирования, очистки, фильтрации и кодирования мы получили 156772 строки x 23 столбца, или эквивалентно 26.8 МБ дискового пространства

    Вы можете скачать очищенный набор данных по этой ссылке, чтобы попробовать его самостоятельно!

    2.1. Колонны


    Ниже вы найдете основную информацию о столбцах, которые мы использовали в диаграммах.

    Первая таблица содержит числовые данные:

    Название столбца Тип Мин. Максимум NaN Описание
    год int 1970 г. 2015 г. Никто Год
    убито int 0 1500 Никто Общее количество погибших
    nkilledter int 0 500 Никто Число погибших преступников
    раненых int 0 5500 Никто Общее количество раненых
    nwoundedter int 0 200 Никто Количество раненых преступников
    шир. плавать -53.1546 74,6336 Никто Широта (города)
    лон плавать -176,176 179,367 Никто Долгота (города)

    Вторая таблица содержит категориальные данные:

    Название столбца Уникальный верхний NaN Описание
    регион 12 Ближний Восток и Северная Африка Никто Область, край
    страна 204 Ирак Никто Страна
    оружие тип 12 Взрывчатка / бомбы / динамит 7. 59% Тип оружия
    тип атаки 9 Бомбардировка / взрыв 3,38% Тип атаки
    targettype 22 Частные лица и собственность 2.46% Тип цели / жертвы
    gname 3216 Неизвестный 46,41% Название группы преступников

    Подсказка: каждая категориальная функция закодирована целыми числами для экономии места. Поэтому мы вводим глобальный словарь JSON с именем строк.json , содержащий карту всех целых чисел в соответствующие им строки. Процесс декодирования происходит после того, как данные были успешно загружены во внешний интерфейс, поэтому ни одна из диаграмм не должна заботиться об этом.

    Возможно, вы уже заметили, что количество столбцов меньше 23. Мы ограничили объем информации, чтобы иметь возможность быстро доставлять информацию и сделать диаграммы более гибкими (= менее запаздывающими). Ниже вы найдете необязательные столбцы, которые мы пропустили.

    Название столбца Описание
    состояние Провинция / административный район / штат
    город город
    расширенный Расширенный инцидент?
    кратное Часть множественного инцидента?
    успех Успешная атака?
    самоубийство Самоубийственная атака?
    nter Количество преступников
    заявлено Требование об ответственности?
    недвижимость Материальный ущерб
    собственностьэкстент Размер имущественного ущерба
    Чтобы получить дополнительную информацию об этих столбцах, смело переходите к Блокноте объяснения, где вы найдете дополнительные диаграммы (с использованием Python и Plotly ), также захватывающие эти столбцы.

    3. Графики


    Диаграммы жизненно важны для представления данных. Они используются как в исследовательском, так и в описательном анализе. Поскольку большинство агрегаций требует много времени, мы передаем их на аутсорсинг. Каждую важную задачу мы выполняем в два этапа:

    1. Используйте iPython для обработки данных, например, для применения фильтров, выполнения агрегирования и т. Д.
    2. На стороне клиента используйте d3.js , который облегчает создание и обработку веб-документов с данными для создания красивых интерактивных визуализаций данных.

    3.1. Гистограмма


    Эта гистограмма направлена ​​на изучение временных моделей терроризма с 1970 по 2015 год.

    Главный вопрос, который мы решаем:

    Как терроризм развивался с течением времени с точки зрения географических единиц, типов или террористических групп?

    Нас интересует временной аспект развития терроризма, который затрагивает множество интересных атрибутов:

    1. Географические единицы в виде регионов, стран, штатов и городов
    2. Типы, такие как типы оружия, атаки и цели
    3. Террористические группы
    По сути, мы можем агрегировать по каждому категориальному столбцу то, что мы на самом деле сделали.

    Мы реализовали следующие интересные функции:

    • Выберите основную категорию (например, Регион )
    • Выберите товар из выбранной категории (например, Западная Европа )
    • Выберите показатель (например, Убито )
    • Наведите указатель мыши на полосу, чтобы отобразить долю за год в% (например, 7% всех жертв в Западной Европе были убиты в год 1988 ).

    3.2. Диаграмма рассеяния


    Вторая диаграмма представляет собой диаграмму рассеяния, которая кодирует 3 числовых атрибута.

    • X: Убито ,
    • Y: раненых и
    • Размер: Количество
    вовремя. Мы используем диаграмму рассеяния для сравнения категориальных атрибутов (например, Тип оружия ) по числовым показателям. Поскольку многие из этих атрибутов по-разному сравниваются в разных регионах или даже странах, мы добавили возможность агрегирования по географическому признаку. единицы.

    Главный вопрос, который мы решаем:

    Что такое
    • наиболее смертоносных видов оружия,
    • наиболее эффективных типов атак и
    • наиболее уязвимых типов целей
    в выбранной географической единице?

    Мы реализовали следующие интересные функции:

    • Выберите уровень агрегирования (например, Страна )
    • Выберите элемент на выбранном уровне (напр.г., Германия )
    • Выберите категориальную переменную (например, Тип цели )
    • Выберите роль ( жертвы или террористов )
    • Переключение между метриками относительных (среднее за атаку) и абсолютных (сумма)
    • Наведите указатель мыши на круг, чтобы отобразить метку и количество атак.

    Родственник Абсолютное

    3.3. Хороплет


    На диаграмме рассеяния выше есть одна большая проблема: мы можем отобразить до ~ 30 кругов, прежде чем у нас закончится место. Но что, если бы мы хотели сравнить страны? Даже на прямоугольной карте с проекцией Меркадор нам нужен какой-то зум. Чтобы решить проблему, мы решили другое, более сложное, но тоже интересное решение: нанесите на карту страны виртуальный глобус и позвольте пользователю вращать его!

    Главный вопрос, который мы решаем:

    Как страны сравнивают друг друга с точки зрения терроризма?

    Мы реализовали следующие интересные функции:

    • Выберите категорию (напр.г., Террористическая группа )
    • Выберите товар из выбранной категории (например, Taliban )
    • Выберите показатель (например, Убито )
    • Выберите год на ползунке или медленно переместите ползунок, чтобы анимировать изменение глобального терроризма
    • Нажмите на Time Machine , чтобы автоматически воспроизвести анимацию с 1970 по 2015 год ...
    • Перетащите земной шар, чтобы повернуть его, или щелкните страну одним щелчком мыши, чтобы перейти к ней
    • Наведите указатель мыши на страну, чтобы отобразить ее название и показатель.

    3.4. К-средние


    K-Means - это первый алгоритм распознавания образов, который мы будем использовать для анализа. Используя K-Means, мы можем разделить террористические атаки на группы (по крайней мере, это идея), чтобы увидеть, как терроризм распространяется географически.

    Главный вопрос, который мы решаем:

    Террористические атаки образуют какие-то географические группы? Есть ли какие-нибудь визуальные закономерности?

    Мы реализовали следующие интересные функции:

    • Выберите категорию (напр.г., Террористическая группа )
    • Выберите товар из выбранной категории (например, Taliban )
    • Выберите показатель (например, Убито )
    • Выберите переменную K, которая представляет количество групп (например, 3 )
    • Наведите указатель мыши на шестиугольник / центроид, чтобы отобразить количество вложенных атак
    • Каждый большой круг представляет собой центроид - центр каждой группы атак
    • Шестиугольники одного цвета принадлежат одному разделу.

    3,5. K-Ближайшие соседи


    Второй алгоритм распознавания образов - k-Nearest Neighbours, который представляет собой алгоритм классификации и регрессии. Используя kNN, мы можем классифицировать любую точку земного шара на основе ее (k-) соседей.

    Главный вопрос, который мы решаем:

    Что, если бы мы знали, что где-то на земном шаре произойдет теракт, какого типа он будет?

    Мы реализовали следующие интересные функции:

    • Выберите тип (например,г., Тип оружия )
    • Выберите количество групп ( k ) на слайдере (например, 3 )
    • Вы также можете настроить k , прокручивая вверх и вниз
    • Наведите указатель мыши на карту, чтобы классифицировать нижележащую точку и отобразить связанных соседей

    4. Дополнительная информация


    Некоторая (необязательная) информация была пропущена, чтобы уменьшить размер веб-страницы, поэтому вы можете продолжить чтение в Блокноте объяснения. Вы также можете быть заинтересованы в тестировании, для этого клонируйте репозиторий, загрузите и импортируйте данные и наслаждайтесь анализом.

    Генетически закодированные датчики позволяют декодировать передачу в здоровом и больном мозге с помощью микро- и наноскопических методов.

    Дисфункция нейронной коммуникации является основной причиной множества психических и неврологических расстройств. Крупные исследования генетических ассоциаций показывают, что структурные и функциональные изменения в быстрой передаче опосредуются быстродействующими передатчиками, т.е.например, глутамат и гамма-аминомасляная кислота (ГАМК) могут быть ответственными за общую патологию, лежащую в основе многих симптоматически различных когнитивных расстройств [1, 2]. Подтверждая эту точку зрения, электрофизиологические и другие функциональные исследования выявили различные аберрантные синаптические механизмы, лежащие в основе патогенеза заболеваний [3, 4]. Исследования нейромодуляции показали, что медленная передача, опосредованная медленными передатчиками, такими как ацетилхолин (ACh), моноамины и нейропептиды, участвует во множестве физиологических и патологических процессов. Точно так же нарушение регуляции медленной нейромодуляторной передачи связано с основными нарушениями мозга, включая зависимость, болезнь Альцгеймера, аутизм, сердечно-сосудистые заболевания, депрессивные расстройства и шизофрению, расстройства пищевого поведения, эпилепсию и нарушения сна [5,6,7,8,9,10] . Однако, в отличие от исследований глутаматергической и ГАМКергической нейротрансмиссии, определение синаптической регуляции и дисрегуляции нейромодуляторных передач остается сложной задачей, которая затрудняет попытки механического понимания поведения и заболеваний, связанных с нейромодуляцией.

    Медленное продвижение в определении свойств передачи нейромодуляторной коммуникации в первую очередь связано с ограничениями доступных в настоящее время инструментов для мониторинга нейромодуляторных передач. Патч-зажим записи, которые могут сделать надежные повторяющиеся измерения выдающихся токовых ответов быстрой передачи, служат основным методом для исследования фундаментальных синаптических свойств глутаматергической и ГАМКергической передачи [11, 12]. Тем не менее, небольшие и быстро десенсибилизирующие нейромодуляторные ответы делают записи патч-кламп или электрофизиологию неэффективными для разграничения синаптических параметров нейромодуляторной передачи [13, 14].Другие доступные в настоящее время инструменты мониторинга нейромодуляторной передачи также не работают с этой проблемой. Например, хотя чувствительность обнаружения микродиализа, часто используемого метода, была улучшена в последние годы, плохое пространственное и временное разрешение по-прежнему ограничивает его способность оценивать динамику холинергических и моноаминергических сигналов [15, 16]. Циклическая вольтамперометрия с быстрым сканированием обеспечивает превосходную наномолярную чувствительность и миллисекундное временное разрешение, но этот подход к обнаружению сдерживается его низким пространственным разрешением и неспособностью различать норэпинефрин (NE) и дофамин (DA) [17].Недавние усилия привели к разработке флуоресцентных сенсоров ACh и моноаминов на основе резонансного переноса энергии Фёрстера и клеток [18, 19]. Однако низкая чувствительность и / или низкое разрешение этих датчиков позволяет обнаруживать только передачу размера объема, что исключает их применение в разрешении синаптических свойств нейромодуляторной передачи. Ограничения, тем не менее, вызывают большее желание разработать удобные для пользователя и широко применимые генетически закодированные сенсоры нейромедиаторов, которые позволяют проводить тканеспецифичные измерения нейромодуляторной передачи с высоким разрешением [20, 21].

    Генетически закодированные сенсоры нейромодулирующего передатчика

    Недавно колоссальными коллективными усилиями инструментальных инженеров и биологов было получено несколько генетически закодированных сенсоров на основе интенсивности для ACh и моноаминов (Рис. 1). Эти сенсоры состоят из конформационно чувствительного GFP с круговой перестановкой (cpGFP) и лиганд-связывающего белка, который изменяет флуоресценцию cpGFP, вызывая конформационные изменения при связывании трансмиттера (рис. 1A). Были созданы две основные группы генетически кодируемых сенсоров-трансмиттеров: сенсоры на основе рецепторов, связанных с G-белками (GPCR) и бактериальных периплазматических связывающих белков (PBP).Сенсоры на основе GPCR, в которых третья внутриклеточная петля первичных GPCR заменена на cpGFP, часто наследуют превосходную мембранную поверхностную транспортировку, сродство связывания лиганда и фармакологические свойства от своих GPCR-прародителей и часто готовы к обнаружению эндогенно высвобождаемых трансмиттеров [22]. , 23]. Однако эти сенсоры могут иметь ограниченную динамику и / или медленную кинетику из-за медленной кинетики прародителей и ограниченных конформационных изменений, связанных со связыванием лиганда [24,25,26].Поскольку PBP имеют более низкое сродство со своими лигандами, создание сенсоров на основе PBP с чувствительностью, соответствующей уровням эндогенного медиатора, может потребовать кропотливой эволюции, однако эти усилия могут привести к созданию высокопроизводительных сенсоров с быстрой кинетикой и большой динамикой [27,28,29, 30]. Транспортировка сенсоров на основе PBP через мембранную поверхность может быть менее оптимальной, но эти сенсоры обычно более пригодны для нацеленной экспрессии в других субклеточных компартментах. Таблица 1 суммирует свойства недавно разработанных генетически кодируемых сенсоров для ACh и моноаминов.

    Рис. 1: Анализ с высоким разрешением генетически закодированной передачи, иллюстрированной сенсорами.

    A Схема генетически кодируемых сенсоров на основе G-белкового рецептора (GPCR) и бактериального периплазматического связывающего белка (PBP) для нейромодулирующих передатчиков. B Схема вирусной экспрессии, применения генетически кодированных сенсоров in vivo и ex vivo. C Схема микроскопического анализа со сверхразрешением и / или деконволюцией данных изображения, полученных с помощью генетически закодированных сенсоров. D Трехмерное пространственно-временное профилирование синаптической передачи. Обратите внимание на сбор образцов экспериментальных данных на животных, сделанный с помощью недавно опубликованного проекта [32].

    Таблица 1 Основные свойства генетически кодируемых сенсоров ацетилхолина и моноаминов.

    Генетически закодированные сенсоры ACh включают GRAB ACh3.0 и GRAB ACh4.0 на основе GPCR [24, 31], а также iAChSnFR на основе PBP с зеленой и желтой флуоресцентными версиями [29] (Таблица 1).Прямое сравнение перфорации сенсоров GRAB ACh и iAChSnFR в одном медиальном энторинальном кортикальном препарате выявило несколько ключевых различий между этими двумя семействами сенсоров [29, 32]. Хотя сенсоры GRAB ACh давали устойчивые флуоресцентные ответы, их унаследованная медленная кинетика значительно ослабляла и задерживала высокочастотные холинергические сигналы; они были отличными детекторами бинарных холинергических сигналов [24, 31]. iAChSnFR намного лучше справлялись с отслеживанием холинергических сигналов во всем частотном диапазоне [29, 32].Хотя флуоресцентный ответ ΔF / F iAChSnFRs меньше оптимального, датчики действительно имеют большой динамический диапазон отклика для улучшения флуоресцентных ответов [29].

    В настоящее время доступны два датчика норэпинефрина (NE) на основе GPCR, GRAB NE1m и GRAB NE1h (Таблица 1), при этом GRAB NE1m лучше справляется с обнаружением эндогенных адренергических сигналов [33]. Мы экспрессировали iAChSnFR и GRAB NE1m в одном и том же препарате миндалины, чтобы сравнить их способность к измерению эндогенных сигналов, и результаты показали, что GRAB NE1m не может соперничать с iAChSnFR по скорости и величине флуоресцентного ответа [32].Тем не менее, GRAB NE1m все еще может следовать относительно более медленной адренергической передаче ([32]; наши неопубликованные данные). Эти результаты вселяют надежду на то, что GRAB NE1m может разрешить основные свойства передачи адренергической модуляции, даже несмотря на то, что эксперименты могут быть технически сложными из-за небольших ответов адренергической флуоресценции [32].

    Существуют генетически кодируемые сенсоры серотонина (5-гидрокситриптамин или 5HT) как на основе GPCR, так и на основе PBP (таблица 1) [34, 35]. GRAB 5HT0.5 и GRAB 5HT1.0 на основе GPCR эффективно детектируют серотонинергические сигналы в популяциях клеток [34]. GRAB 5HT0.5 показал лучшие результаты при оценке эндогенных одноклеточных серотонинергических сигналов и может служить жизнеспособным инструментом для анализа свойств передачи серотонинергической модуляции, предположительно из-за его кинетики и аффинности, более близких к динамике и концентрации эндогенно высвобождаемого 5HT. [32, 34]. ISeroSnFR на основе PBP сообщил о заметных эндогенных серотонинергических сигналах в популяциях клеток [35].Однако, учитывая его относительно более низкую чувствительность (по сравнению с GRAB 5HT ) [34, 35], он ждет, чтобы увидеть, может ли сенсор обнаруживать одноклеточные и субклеточные серотонинергические сигналы.

    Два семейства сенсоров дофамина на основе GPCR (3,4-дигидроксифенэтиламин или DA), человеческий D 2 на основе дофаминового рецептора GRAB DA [25, 36] и человеческий D 1 на основе дофаминового рецептора dLight [ 26, 37], сконструированы (табл. 1). GRAB DA1m , GRAB DA1h , GRAB DA2m и GRAB DA2h являются зелеными версиями генетически кодируемых датчиков DA, ​​в то время как rGRAB DA1m и rGRAB DA1h принадлежат к первым красным версиям генетически кодируемых нейронов. датчики передатчика [25, 36].Датчики dLight также имеют несколько версий с несколько разными свойствами [26, 37]. Наиболее эффективные GRAB DA2m и dLight 1 зарегистрировали устойчивые дофаминергические сигналы от популяций клеток в полосатом теле [32, 36] и базальной миндалине [38], которые получают самые тяжелые дофаминергические иннервации с, вероятно, самыми большими дофаминергическими сигналами [38, 39,40]. Недавнее добавление - это красная версия D 2 на основе дофаминового рецептора генетически кодируемого датчика DA, RdLight 1 [41], еще больше расширяющая набор инструментов для датчиков DA.Прямое экспериментальное сравнение показало, что GRAB DA2m вызывал несколько более выраженные одноклеточные дофаминергические ответы с лучшим отношением сигнал / шум по сравнению с dLight 1 в том же препарате полосатого тела [32, 36]. В то время как чрезвычайно низкая базовая флуоресценция dLight 1 часто препятствует идентификации отдельных экспрессирующих клеток, dLight 1 , по-видимому, имеет немного более высокую селективность по сравнению с NE, чем GRAB DA2m [26, 36]. Остается неясным, способны ли GRAB DA2m и dLight 1 обнаруживать умеренные одноклеточные дофаминергические сигналы в других областях мозга, таких как префронтальная кора и гиппокамп.

    Новый метод анализа на основе сенсоров

    Разработка генетически закодированных передающих сенсоров открывает возможности для революционных достижений в исследованиях нейромодуляции. Хотя многие исследователи используют новые датчики просто как чувствительные детекторы для отслеживания динамических нейромодулирующих сигналов, как утверждают недавние обзоры [22, 23, 42, 43], эти датчики на самом деле могут делать больше. Новые генетически закодированные нейромодуляторные сенсоры случайно испускают большое количество фотонов, причем их флуоресцентные ответы в значительной степени не зависят от уровней экспрессии [29, 32,33,34].Приятные свойства в сочетании с последними достижениями микроскопии сверхвысокого разрешения и / или деконволюции [44, 45] позволяют количественно оценить свойства передачи нейромодуляции [11], что важно для разграничения физиологии поведения и патогенеза заболеваний. [1,2,3,4].

    Первоначальные эксперименты продемонстрировали, что высокопроизводительные сенсоры могут определять синаптические свойства нейромодуляторной передачи [29, 32,33,34]. К сожалению, существует значительное количество недавно опубликованных инструментов или методов «доказательства принципа», которые оказались биофизически не интерпретируемыми, методологически невоспроизводимыми и / или биологически неприменимыми [46, 47].Чтобы неукоснительно представить этот метод микроскопического анализа сверхразрешения и деконволюции на основе генетически закодированного нейромедиатора, сенсора, мы представляем его биофизическую основу, практические решения, биологическую валидацию и широкую применимость.

    Биофизическая основа

    С 16 по 19 века мастерство проб и неудач является основным средством улучшения микроскопических изображений. В конце 19-го века напряженная вычислительная работа Эрнста Аббе, подтвержденная экспериментами, проведенными в мастерской Carl Zeiss, продемонстрировала, что только зная точное поведение света, можно получить представление обо всех решающих факторах, влияющих на характеристики микроскопа, и контролировать их [48]. .Эта работа привела Аббе к выводу, что волновая оптика и дифракция накладывают фундаментальные ограничения на способность изображения или предел разрешения Аббе [49]. Он дает минимальное расстояние ∆ x между двумя различимыми объектами как

    $$ \ Delta X _ {{\ mathrm {Abbe}}} = {\ uplambda} / \ left ({2n \ bullet {\ mathrm {Sin}}) \ alpha} \ right) \ Equiv {\ uplambda} / 2 {\ mathrm {NA}}, $$

    (1)

    , где n дает показатель преломления среды, в которой делается изображение, α - максимальный угол между оптической осью и всеми лучами, захваченными объективом микроскопа, а NA - числовая апертура, используемая для описания разрешения. микроскопа.

    Позже многие исследователи пересмотрели концепцию предела разрешения и предположили, что в принципе совместный захват множества фотонов может увеличить разрешение за пределами дифракционного предела Аббе [50, 51]. На практике только за последние ~ 20 лет стремительный инструментальный и биологический прогресс привел к многочисленным возможным приложениям, особенно в биологии, которые обычно выходят за дифракционный предел, явление, называемое «сверхразрешением». Появился ряд инструментов визуализации с высоким разрешением, включая микроскопию сверхвысокого разрешения, микроскопию световых пластин, микроскопию структурированного освещения, конфокальную микроскопию, многофотонную микроскопию, микроскопию деконволюции и другие.Многие из них можно разделить на две основные группы: микроскопия сверхвысокого разрешения и микроскопия деконволюции, где другие трудно отнести к какой-либо из групп, поскольку они содержат свойства обоих [52, 53].

    Посредством аппаратной оптимизации микроскопия сверхвысокого разрешения (например, микроскопия фотоактивированной локализации, микроскопия стохастической оптической реконструкции и микроскопия истощения стимулированного излучения) может достичь превосходного улучшения разрешения при увеличении числа фотонов, следуя уравнению

    $$ \ Delta X_ {{\ mathrm {superresolution}} \, {\ mathrm {microscopy}}} \ sim \ Delta X _ {{\ mathrm {Abbe}}} \ bullet N ^ {- 1/2}, $$

    (2)

    , где N представляет количество обнаруженных фотонов.Такое благоприятное масштабирование разрешения позволяет микроскопии сверхвысокого разрешения принципиально превосходить классический дифракционный предел и в большинстве приложений достигать диапазона разрешения менее 100 нм с возможностью достижения разрешения ~ 10 нм или вплоть до разрешения одной молекулы [45, 52, 54]. Компромисс микроскопии сверхвысокого разрешения заключается в скорости получения изображений, особенно в приложениях для получения изображений живых существ с широким полем зрения, которые требуют высокого временного разрешения. Кроме того, микроскопические процедуры со сверхвысоким разрешением часто отбрасывают данные от скопившихся молекул с перекрывающимися изображениями, тратя зря ценную информацию изображения, частично ухудшенную из-за перекрытия.{- 1/4}, $$

    (3)

    Быстро расширяющееся применение деконволюционной микроскопии связано, в основном, с новыми генетическими инструментами, которые дают больше собираемых фотонов и оперативно улучшают вычислительные алгоритмы [53, 55, 56]. Учитывая, что высокопроизводительные сенсоры с генетически закодированными нейротрансмиттерами могут достигать плотной экспрессии флуорофоров и испускать большое количество фотонов при связывании передатчика, можно получить живую визуализацию высвобождения передатчика в широком поле с разрешением ~ 100-200 нм и разрешить многие фундаментальные синаптические свойства нейротрансмиссии [32].Конечно, неблагоприятное масштабирование разрешения N -1/4 для микроскопии с деконволюцией означает, что умеренное увеличение разрешения требует большого увеличения числа фотонов, что делает улучшение разрешения менее экономически выгодным. Комбинированные микроскопические методы деконволюции и сверхвысокого разрешения, которые могут обеспечить как высокое разрешение, так и высокую скорость визуализации, являются отличными альтернативными подходами [57, 58].

    Вышеупомянутые оптические свойства предсказывают, что генетически закодированные сенсоры нейротрансмиттеров могут производить надежные измерения высвобождения нейромодулирующих передатчиков с нано- и микромасштабным пространственно-временным разрешением.Измерения могут предложить достаточно точные оценки фундаментальных синаптических свойств нейромодуляторной передачи, таких как степень диффузии передатчика, количество сайтов высвобождения, размер пула высвобождения, вероятность высвобождения, квантовый размер и скорость пополнения [11, 59]. Определение синаптических параметров создает научную основу для исследования регуляции, функции, а также краткосрочной и долгосрочной пластичности нейромодуляторной передачи и устанавливает базовый уровень нейромодуляции для тестирования и разработки лекарств.

    Практические решения

    Следование хорошим практическим решениям является центральным для точных измерений синаптических свойств нейромодуляторной передачи, особенно учитывая то, что многие генетически закодированные датчики еще предстоит оптимизировать, чтобы они соответствовали этой задаче. Выбор наиболее эффективных датчиков - это первый ключевой шаг. iAChSnFR, GRAB NE1m и GRAB 5HT0.5 выявили устойчивые, но вариабельные одноклеточные ответы во всех исследованных ex vivo и in vivo нейрональных и ненейрональных тканях [29, 32,33,34], что подтверждает их применимость в разрешение трансмиссионных свойств в общих тканевых препаратах ([32]; наши неопубликованные данные).GRAB DA2m и dLight 1 могли бы выполнить ту же задачу в полосатом теле [25, 26, 32, 36], но не могли бы в других областях мозга ([32]; наши неопубликованные данные). Остальные датчики требуют дальнейшей оценки. Поскольку существующие генетически закодированные сенсоры нейромодулирующего передатчика разработаны очень немногими строгими исследовательскими группами, можно сделать вывод об относительной производительности сенсоров, созданных из тех же групп, на основе заявленных специфичностей сенсоров (например, чувствительности, ΔF / F, SNR и кинетики). ) (Таблица 1).

    Экспрессия генетически закодированных сенсоров трансмиттера является еще одним ключевым шагом, который может быть достигнут с помощью различных подходов к экспрессии генов, включая часто используемые системы вирусной экспрессии (например, аденоассоциированный вирус (AAV), вирусы lenti и Sindbis) (рис. 1B ). Вирус Синдбис имеет наиболее эффективное время продуцирования ~ 1,5 дня, самое короткое время экспрессии ~ 8–24 ч, наибольшую полезную нагрузку до 15 т.п.н. (готовность для совместной экспрессии нескольких трансгенов) и самые высокие уровни экспрессии (предпочтительны для высоких пространственно-временных разрешений изображений) ), хотя самое короткое жизнеспособное время экспрессии ~ 3-5 дней [60,61,62].Напротив, несколько серотипов вирусов AAV широко используются из-за их минимальной токсичности, стойкого времени экспрессии ≥6 месяцев (предпочтительно для долгосрочных физиологических и поведенческих тестов) и возможности неинвазивной доставки [63, 64]. Однако небольшая полезная нагрузка трансгена до ~ 4,5–5 т.п.н., низкая эффективность продукции вируса и медленное время экспрессии ≥3 недель являются основными ограничениями вирусов AAV. Лентивирус, который имеет относительно более быстрое производство, большую полезную нагрузку до ~ 8-10 kb, более короткое время экспрессии ~ 1-2 недели и долгоживущую экспрессию в несколько месяцев [65,66,67], предлагает решение в компромисс.

    Получение и анализ изображения - это два последних ключевых этапа. Учитывая преимущества низкой потребности в инструментах и ​​применимости широкоугольной визуализации живых организмов, деконволюционная микроскопия практически используется во многих биологических приложениях. Поскольку целью микроскопического анализа с деконволюцией является «переназначение» света на его исходное место, практические решения должны быть сосредоточены на коррекции дрейфа и флуктуаций изображения, минимизации фотообесцвечивания, автофлуоресценции и шума, а также оптимизации коррекции дифракции света, многие из которых применимы к микроскопии сверхвысокого разрешения и комбинированной микроскопии деконволюции-сверхвысокого разрешения.

    Дрейфы и колебания изображения могут привести к значительному артефакту переназначения света. Таким образом, оптимизация системы визуализации для минимизации дрейфа и флуктуаций стоит затраченных усилий. Электрофизиологические установки, разработанные для стабильной множественной записи патч-кламп, обычно оптимизированы для смягчения экспериментального дрейфа и флуктуаций [68, 69], и их можно легко адаптировать для получения стабильных изображений живых клеток с минимальным дрейфом и флуктуациями, легко корректируемыми с помощью функция регистрации по интенсивности [32].Фотообесцвечивание и автофлуоресценция могут привести к неверной оценке реального распределения интенсивности света и привести к ошибкам в переназначении фотонов. Выполнение алгоритмов коррекции позволяет минимизировать фотообесцвечивание и автофлуоресценцию [32, 70]. Шум, случайный процесс, ответственный за деградацию изображения, возникает из двух основных источников, включая фотонный шум, обусловленный распределением Пуассона, и электронный шум гауссовой природы, которым в современных детекторах часто можно пренебречь. Поскольку шум заметно ограничивает эффективность алгоритмов деконволюции, очень желательно включать процедуры шумоподавления на различных этапах алгоритмов деконволюции.

    Дифракция света через оптическую систему, которая соответствует описанию ее функции рассеяния точки (PSF), вызывает оптическое размытие, ограничивающее оптическое разрешение. Устранение размытости - ключевой процесс деконволюционной микроскопии, который использует PSF для устранения оптического искажения, чтобы «переназначить» свет на его исходное место [71]. Следовательно, получение правильного PSF путем теоретических расчетов или эмпирических измерений имеет важное значение для качества восстановленных изображений. Поскольку теоретические модели PSF применимы только к идеальным линзам и четко определенным оптическим путям, а некоторые сферические аберрации трудно предсказать теоретически, на практике предпочтительны эмпирические измерения.Для точного определения PSF оптической системы лучше всего измерять PSF в той же системе при тех же условиях, которые использовались для получения изображения. Один простой способ получить PSF - получить изображения коммерчески доступных флуоресцентных микросфер. Теоретически лучше всего подойдут самые маленькие бусинки. Однако маленькие шарики имеют меньшую интенсивность и быстрее обесцвечиваются, и поэтому на практике более крупные шарики с диаметром меньше половины разрешения работают нормально. Чтобы уменьшить шум от эмпирически измеренных PSF, можно усреднить измерения от нескольких шариков, многократных испытаний одиночных шариков и / или нескольких круговых осей одиночных шариков [32].Важно отметить, что деконволюция больших наборов данных визуализационных эпизодов нейромодуляторных передач является вычислительно-интенсивной задачей, занимающей часы, если не дни [32]. Следовательно, для выполнения этих задач целесообразно использовать оптимизированные алгоритмы анализа и алгоритмы глубокого обучения [44].

    Биологическая валидация

    Для решения фундаментальных биологических вопросов использовался метод анализа изображений на основе сенсоров, который обеспечивает строгую проверку его применимости. Например, генетически закодированные сенсоры нейромедиаторов, которые позволяют впервые с высоким разрешением визуализировать пространственную диффузию эндогенно высвобождаемых нейромодуляторных передатчиков [32] (рис.1C, D), был использован для решения давнего биологического вопроса о первичном нейромодуляторном способе передачи [72, 73]. Широко принятая теория нейромодуляторной передачи, предложенная три десятилетия назад, постулирует, что основным способом межклеточной нейромодуляторной коммуникации является объемная передача, которая происходит между клетками в общих регионах, а не между конкретными клетками, которые образуют прямые цепи или контакты [74, 75] . Эта модель, в частности, предполагает, что ACh и моноамины диффундируют в локальные области, воздействуя на многие различные типы близлежащих клеток, а нейропептиды распространяются еще дальше, влияя как на локальные клетки, так и на отдаленные клетки на расстоянии миллиметров [74, 76].Основа теории основана, прежде всего, на предположении, что эндогенно высвобождаемые нейромодуляторные передатчики ведут себя так же, как и экзогенно применяемые (которые более свободно диффундируют во внесинаптическом пространстве), что еще не подтверждено какими-либо прямыми экспериментальными данными [72, 73]. Генетически закодированные сенсоры нейромодуляторных передатчиков в сочетании с микроскопическим анализом деконволюции позволили впервые непосредственно визуализировать пространственную диффузию нейромодуляторных передатчиков в отдельных местах высвобождения, давая константы длины распространения пространственной диффузии ~ 0.75 мкм как для ACh, так и для моноаминов ([32]; ср. [77,78,79]) (рис. 1C, D). Техника высокоскоростной двухфотонной визуализации позже подтвердила значение эндогенно высвобождаемого ACh в интактном мозге [29]. Эти результаты показывают, что сильно ограниченная нейромодуляторная передача без объема является ключевым режимом межклеточной коммуникации.

    Интересно, что тот же анализ, проведенный с генетически кодируемым датчиком глутамата, iGluSnFR [27], дал константу длины распространения ~ 0,60 мкм для глутамата (рис. 2A – C) [32, 80], немного меньшее значение, ожидаемое для отрицательно заряженный глутамат электрофоретически подвержен влиянию возбуждающих токов [81].Более того, в сочетании с новыми сенсорами нейропептидов на основе GPCR, анализ позволил провести первые измерения нейропептидергической передачи, которые выявили сравнимую константу длины распространения ~ 0,80 мкм (рис. 2D-F). Идентичные пространственные константы длины распространения для быстро- и медленно действующих нейротрансмиттеров в разных клетках подтверждают идею о том, что синапсы оптимизируют свои пре- и постсинаптические организационные элементы в наномасштабе (включая также количество высвобождаемых передатчиков, ширину синаптических щелей и расположение постсинаптических структур). рецепторы) для максимальной эффективности и точности [82,83,84].Это попытка предположить, что, подобно быстродействующим нейротрансмиттерам глутамат (например, через рецепторы NMDA) и ГАМК (например, через рецепторы ГАМК A , содержащие субъединицу δ), нейромодуляторные передатчики могут использовать рецепторы с высоким сродством и / или кластерные высвобождения для достичь определенного объема передачи при физиологических и патологических условиях. Действительно, накапливающиеся данные свидетельствуют о том, что как быстродействующие, так и медленно действующие нейротрансмиттеры осуществляют межклеточную коммуникацию в основном посредством сильно ограниченной передачи, причем объемная передача служит дополнительным способом при определенных условиях [29, 32, 72, 80].

    Рис. 2: Визуализация пространственной диффузии передатчика с помощью генетически закодированных сенсоров.

    A Схема экспериментов по визуализации стимуляции на острых срезах миндалины мышей. Л.А. Боковая миндалина. B Трехмерное пространственно-временное профилирование ΔF / F iGluSnFR, экспрессирующего миндалевидный нейрон, на локальные электрические стимулы. Обратите внимание на один изолированный участок высвобождения, обозначенный розовой стрелкой в ​​ B . C Пиксельный график максимального ΔF / F на изолированном участке высвобождения, обозначенном розовой стрелкой в ​​ B .Подгонка точек данных на этом графике с помощью одной экспоненциальной функции затухания (розовая линия) дает расчетную константу длины распространения глутамата, равную 0,65 мкм. Обратите внимание на сбор образцов экспериментальных данных на животных, сделанный с помощью недавно опубликованного проекта [32]. D Схема экспериментов по визуализации стимуляции на острых срезах ствола мозга мышей. NTS nucleus tractus solitarius. E Трехмерное пространственно-временное профилирование ΔF / F GRAB NP , экспрессирующего нейрон NST на локальные электрические стимулы.Обратите внимание на один изолированный участок высвобождения, указанный розовой стрелкой в ​​ E . F Пиксельный график максимального ΔF / F на изолированном участке высвобождения, обозначенном розовой стрелкой в ​​ E . Подгонка точек данных на этом графике с помощью одной экспоненциальной функции затухания (розовая линия) дает расчетную константу длины распространения нейропептида 0,91 мкм. Обратите внимание на сбор образцов экспериментальных данных на животных, сделанный с помощью недавно опубликованного проекта [32].

    Несколько высокопроизводительных сенсоров с генетически закодированными нейротрансмиттерами могут надежно отслеживать относительно медленную нейромодулирующую передачу, вызванную умеренными (фактически, более физиологическими [11]) темпами стимуляции в течение длительного периода ([32]; наши неопубликованные данные) (рис.3А, Б). Используя ранее установленные модели пула пузырьков [85,86,87,88], можно сделать достаточно точные оценки фундаментальных нейромодулирующих синаптических свойств (например, размер пула высвобождения, вероятность высвобождения и скорость пополнения). Как и в случае с пространственным разрешением, временное разрешение нейромодуляторной передачи улучшается с увеличением сбора фотонов. Наш предварительный анализ показал, что наиболее эффективные сенсоры генетически кодируемых нейротрансмиттеров (например, iAChSnFR, GRAB NE1m и GRAB 5HT0.5 ) испускают достаточное количество фотонов в ответ на выбросы эндогенных передатчиков, вызванные продолжительными сериями стимулов, что позволяет определить основные синаптические свойства нейромодулирующей передачи с микромасштабным разрешением (рис. 3C, D). Комбинирование пространственного и временного анализа может даже позволить декодировать количество сайтов высвобождения, вероятность высвобождения и количественный размер в отдельных участках высвобождения для нейромодуляторной передачи ([59]; для примера см. [29, 32]). Пилотный анализ показывает, что медленная нейромодуляторная передача имеет некоторые, но не все свойства, с быстрой глутаматергической и ГАМКергической передачей.

    Рис. 3: Расшифровка холинергических синаптических свойств с помощью генетически кодированного сенсора iAChSnFR.

    A Схема экспериментов по стимуляции-визуализации на препарате ex vivo мыши базолатерального миндалины (BLA). B Флуоресцентные ответы iAChSnFR, экспрессирующего нейрон миндалины, вызванные длительной серией из 1920 стимулирующих импульсов с частотой 16 Гц. Графики совокупного ( C ) и индивидуального ( D ) высвобождения в зависимости от количества стимулов позволяют оценить размер легко высвобождаемого пула, скорость пополнения, вероятность высвобождения холинергических синапсов в миндалевидном нейроне.Обратите внимание на в C прямую голубую линию ( f (x) = 0,081 ● x + 0,0068), подогнанную к поздним точкам синей совокупной кривой с ее пересечением по оси y и наклоном, взятым в качестве пула оценка и скорость пополнения везикул, соответственно, и в D голубая кривая, представляющая средние значения синих индивидуальных выбросов, соответствующих вероятности высвобождения. Обратите внимание на сбор образцов экспериментальных данных на животных, сделанный с помощью недавно опубликованного проекта [32].

    Широкая применимость

    Новый метод микроскопического анализа со сверхразрешением и / или деконволюцией на основе сенсоров имеет широкое применение в различных биологических и клинических приложениях. В частности, этот метод выявил неожиданный точный контроль и точность нейромодуляторной передачи [29, 32], которые сразу же дают объяснение некоторым загадочным клиническим наблюдениям и предлагают новые методы лечения различных психических и неврологических расстройств, включая болезнь Альцгеймера.Например, единственная доступная терапия для лечения болезни Альцгеймера основана на обнаружении уменьшения высвобождения АХ и ухудшения холинергических нейронов в мозге Альцгеймера - холинергическая гипотеза [89]. В настоящее время все одобренные FDA препараты от болезни Альцгеймера прямо или косвенно ингибируют ацетилхолинэстеразу, усиливая холинергические сигналы. Эти лекарства имеют ограниченную эффективность в улучшении когнитивных функций, а после прекращения приема лекарств вызывают необратимое ускоренное ухудшение состояния [90, 91]. Тонкий пространственно-временной контроль холинергической передачи, проиллюстрированный генетически закодированными датчиками, проливает свет на эти два клинических наблюдения [29, 32].Во-первых, ингибиторы ацетилхолинэстеразы могут снизить физиологическую точность холинергической передачи (ср. [72, 73]), что объясняет ограниченное улучшение когнитивных функций. Во-вторых, длительное применение ингибиторов ацетилхолинэстеразы может гомеостатически повышать уровень ацетилхолинэстеразы у пациентов с болезнью Альцгеймера и / или подавлять высвобождение пресинаптического АХ [91], что объясняет ускоренное ухудшение после прекращения приема лекарств.

    Точно так же нарушение регуляции адренергической передачи часто проявляется как ранний патологический коррелят когнитивного спада при болезни Альцгеймера [92, 93].Генетически закодированные датчики выявили удивительный набор адренергических синаптических свойств, по-видимому, предназначенных для противодействия естественной тенденции синапсов достигать точных линейных вычислений ввода-вывода ([32]; наши неопубликованные данные). Эти свойства отличают адренергическую передачу от всех других нейрональных передач, включая быструю глутаматергическую и ГАМКергическую передачу [12], а также другую медленную нейромодуляторную передачу [29, 32]. Полученные данные подчеркивают уникальный вклад адренергической передачи в тонкую настройку внимания [94], оптимизацию поведения в сложных социальных и физических средах [95] и нарушение сложных умственных задач (напр.g., рассуждение и абстрактное мышление) у пациентов с болезнью Альцгеймера [96].

    Зависимость, ведущая проблема со здоровьем, которая приводит к нескольким миллионам людей каждый год, представляет собой сложное подкрепляющее поведение, проявляющееся в навязчивом употреблении психоактивных веществ, несмотря на пагубные последствия [97]. Аддиктивные расстройства связаны с первичными нарушениями дофаминергической системы, хотя не следует недооценивать значение недофаминергических систем, которое было менее изучено [8, 10, 97].Аддиктивное поведение состоит из процессов внимания, мотивации и обучения, которые, по-видимому, по-разному регулируются различными локальными субклеточными и быстрыми субсекундными дофаминергическими сигналами [98]. Основным недостатком существующей литературы является то, что до сих пор ни одно исследование не смогло зафиксировать связанную с поведением быструю клеточную и субклеточно-специфичную динамику дофаминергического сигнала. Генетически закодированные датчики DA могут (по крайней мере, в полосатом теле) квалифицировать динамику отдельных дофаминергических высвобождений с микроскопическим пространственно-временным разрешением [32] и впоследствии определять синаптические параметры и чередования, ответственные за специфические вызывающие привыкание поведенческие события.Понимание, полученное в результате исследований аддикции, должно также способствовать пониманию некоторых других связанных психических и неврологических расстройств, таких как болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, синдром Туретта, синдром дефицита внимания / гиперактивности и шизофрения [8].

    Реакции на стресс и невзгоды инициируют скоординированные нейромодулирующие действия в различных областях мозга, чтобы изменить внимание, тревогу, эмоции, удовольствие, поощрение, отвращение, моторные, исполнительные и другие поведенческие процессы, а неадаптивные реакции могут привести к меланхолической и атипичной депрессии [99 , 100].Депрессия поражает примерно каждого шестого человека в течение жизни, а в настоящее время - более 300 миллионов человек во всем мире [99, 101]. Раннее клиническое наблюдение приводит к моноаминовой гипотезе депрессии, согласно которой депрессивные расстройства возникают из-за пониженного содержания моноаминов [102]. Сегодня антидепрессанты на основе моноаминов остаются первой линией терапии депрессии, однако лечение имеет медленное начало, низкую скорость ответа и низкую скорость ремиссии (около 30%), поскольку механизмы их действия остаются неуловимыми [99, 100] .Недавние достижения в области генетического профилирования, анализа цепей и разработки моделей на животных открыли многие идеи о стрессовых реакциях и депрессии, подчеркнув гетерогенные подтипы моноаминергических нейронов и цепей, участвующих в различных стрессовых и депрессивных поведенческих процессах [103, 104]. Однако ограничения электрофизиологического подхода до сих пор препятствовали попыткам функционально связать определенные изменения передачи в определенных моноаминергических нейронах и цепях с конкретными стрессовыми и депрессивными поведенческими эпизодами [104].Генетически закодированные сенсоры нейромодулирующего передатчика позволяют напрямую определять специфические синаптические изменения моноаминергической передачи на специфических моноаминергических аксональных концах специфических подтипов нейронов в специфических нейронных цепях [32]. Такой анализ должен пролить новый свет на стрессовые реакции и депрессивные расстройства.

    Сон - одно из самых загадочных, но широко распространенных видов поведения животных, а расстройства сна, наиболее распространенные клинические проблемы, вызывают множество проблем со здоровьем, включая депрессию, снижение когнитивных функций, иммунную недостаточность и ожирение [105,106,107].ACh и моноамины играют сложную и центральную роль в регуляции поведения во сне и бодрствовании. В то время как в ранних исследованиях сообщалось, что нейроны в холинергических ядрах важны для инициации и поддержания бодрствования [108, 109], поздние результаты приписывают эту роль частично глутаматергическим нейронам в ядрах. До сих пор ведутся споры о том, необходимы ли холинергические нейроны для бодрствования [105]. Генетически кодируемые сенсоры ACh детектируют вызванные нейрональной активностью большие начальные и небольшие устойчивые выбросы ACh из холинергических нейронов [29, 32]; эти сенсоры позволили напрямую оценить синаптические свойства холинергической передачи в естественных циклах сна и бодрствования для определения холинергического вклада [105, 106].Coerulear нейроны не требуются для бодрствования, но имеют решающее значение для обеспечения бодрствования при определенных условиях [95]. Адренергическая передача, проиллюстрированная генетически закодированными сенсорами NE, по-видимому, действует вопреки естественной тенденции синапсов выполнять линейный вычислительный процесс ввода-вывода ([32]; наши неопубликованные данные), что идеально для тонкой настройки бодрствования и внимания [94]. Эта операция, однако, сделает адренергическую передачу уязвимой для выхода системы из строя. Адренергические синапсы, кажется, устанавливают небольшой пул выброса и крошечную скорость пополнения, чтобы гарантировать истощение нейромедиаторов после определенного количества нейрональной активности, чтобы создать аварийную точку останова ([32]; наши неопубликованные данные), которая предположительно ответственна за наблюдаемые поведенческие остановки [ 94].Очевидно, что всесторонний анализ с помощью генетически закодированных сенсоров NE должен разграничить синаптические механизмы адренергического вовлечения в циклы сна-бодрствования и нарушения сна.

    Серотонинергическая и дофаминергическая роли в циклах сна и бодрствования еще менее ясны. Хотя в некоторых сообщениях предполагается, что 5HT может инициировать и поддерживать сон, в других было обнаружено, что серотонинергические нейроны способствуют бодрствованию, предположительно отражая первичные и вторичные эффекты большого разнообразия серотонинергических процессов [105, 106].Определение синаптических изменений серотонинергической передачи в естественных циклах сна и бодрствования с помощью генетически закодированных датчиков 5HT должно дать новое понимание серотонинергической роли в поведении во сне и бодрствовании [34]. DA участвует в регуляции сна и бодрствования так же, как и другие его подкрепляющие элементы (например, еда, вода и секс), потому что дофаминергическая нейрональная активность и внеклеточные уровни DA коррелируют с циркадными колебаниями и поведением, ориентированным на сон [110, 111]. Однако то, как DA регулирует и / или регулируется циркадными часами и другими регуляторами сна и бодрствования, остается неясным из-за умеренных изменений высвобождения DA и различных дофаминергических эффектов в среднем мозге, гипоталамусе и других связанных областях мозга, что подчеркивает важность декодирования. синаптические изменения дофаминергической передачи, специфичной для определенного типа и проекции клеток, на разных этапах цикла сна-бодрствования [105, 106].Конечно, учитывая умеренное высвобождение DA, связанное с циклами сна-бодрствования [106], может потребоваться следующее поколение датчиков DA с улучшенными флуоресцентными ответами для анализа синаптических дофаминергических механизмов, лежащих в основе поведения сна-бодрствования.

    Таким образом, генетически закодированные сенсоры сделали экспериментальную проверку вышеупомянутых гипотез и возможностей осуществимой на различных моделях болезней. С помощью технологий плюрипотентных стволовых клеток человека (ИПСК) модели заболеваний могут быть распространены на препараты нейронов, полученные из здоровых и больных ИПСК человека [112,113,114].Новаторское исследование показало, что быстрая передача между нейронами, дифференцированными с помощью ИПСК человека, ведет себя так же, как и между нейронами грызунов, с их синаптическими свойствами, разделяющими сопоставимые числовые параметры [115]. Это вдохновило нас на экспрессию генетически закодированных сенсоров в препаратах культур холинергических и моноаминергических нейронов человека (рис. 4А), которые применимы для исследования нейромодуляторной передачи между человеческими нейронами и ненейрональными клетками [29, 32, 114]. Анализ микро- и наноскопических изображений показал, что нейромодуляторная передача в препаратах культуры нейронов человека демонстрирует прекрасную регуляцию и точность (рис.4Б – Г), напоминающую таковую в срезах мозга грызунов и препаратах in vivo [29, 32]. Эти предварительные эксперименты устанавливают индуцированную человеком нейронную систему для определения синаптических параметров нейромодуляторной передачи здорового человека, определения дефицита нейромодуляторной передачи у человека, скрининга терапевтических препаратов и генов, вызывающих болезнь -, а также разработки потенциальных методов лечения на основе трансплантации клеток, вызывающих захватывающие возможности для регенеративных и персонализированных лекарств.

    Фиг.4: Визуализация холинергической передачи человека с помощью iAChSnFR.

    A Схема дифференциации холинергических нейронов от индуцированных человеком плюрипотентных стволовых клеток (hiPSC). Окрашивание CAT антихолинацетилтрансферазой (Abcam, # ab223346), окрашивание MAP2 антимикротрубочко-ассоциированным белком 2 (Abcam, # ab32454), DAPI 4 ', 6 - диамидино - 2 - окрашивание фенилиндольной нуклеиновой кислотой ( Sigma-Aldrich, D9542). Обратите внимание на аутентификацию hiPSC в предыдущем отчете [67]. B Визуализация флуоресцентных ответов iAChSnFR, экспрессирующего нейрон, происходящий от ИПСК человека, вызванный серией из 20 стимулирующих импульсов, доставляемых с частотой 32 Гц. C Деконволюционный микроскопический анализ трехмерного пространственно-временного профилирования ΔF / F iAChSnFR, экспрессирующего нейрон, полученный из ИПСК человека, на локальные электрические стимулы. Обратите внимание на один изолированный участок высвобождения, указанный розовой стрелкой в ​​ C . D Пространственное профилирование изолированного сайта высвобождения, указанного розовой стрелкой в ​​ C с пиксельным графиком максимального ΔF / F.Подгонка точек данных на этом графике с помощью одной экспоненциальной функции затухания (розовая линия) дает расчетную константу длины распространения ACh 0,88 мкм.

    Преднамеренные титулы ГТД

    Когда я начал работать с GTD пять лет назад, я был уверен, что это недостающий элемент в моей загадочной головоломке. Это была пятиступенчатая структура, которая удерживала меня от откладывания на потом и давала мне мотивацию выполнить все, на что я продолжал говорить «да».

    И хотя это возможные результаты, они далеко не подразумеваются.GTD может помочь вам сосредоточиться на задаче и дать вам возможность работать над правильным следующим действием, но не без вашей дисциплины и настойчивости. И тогда это работает, только если вы полностью обдумываете задачу или проект, когда они изначально обрабатываются. Возьмем, к примеру, эти проекты:

    День рождения жены

    • Торт
    • Настоящее время
    • Тарелки и столовое серебро
    • Пригласить друзей

    example.com

    • Полный веб-дизайн
    • Определиться с хостом
    • Электронная почта?
    • Дата запуска?
    • Торговая секция

    Новый товар

    • Фото для сайта
    • Качество по всем линиям
    • Рынок?
    • Розничные торговцы
    • Пресс-релиз

    На первый взгляд это может показаться нормальным.У меня есть список проектов и список задач, которые связаны с каждым проектом. Но здесь вы можете увидеть вопиющую проблему; есть еще некоторая интерпретация, необходимая, чтобы решить, что каждый требует от вас делать. «Тарелки и столовое серебро» - это напоминание накрыть стол или это часть вашего списка покупок? Вы спрашиваете о добавлении адресов электронной почты на веб-сайт или настройке рассылки новостей по электронной почте? Означает ли «пресс-релиз», что его нужно написать, опубликовать или просмотреть? Конечно, некоторые детали, отсутствующие здесь, могут подразумеваться в зависимости от контекста, назначенного каждому.Если «тарелки и столовое серебро» имеет контекст @Errands, у вас есть свой ответ.

    Но и сами проекты ставят под вопрос и вас. У вас есть список покупок на день рождения жены или список настроек, которые необходимо выполнить в этот день? Вы пишете код для сайта или курируете проект? Вы изучаете добавление нового продукта для своей компании или это новая вещь, которую вы изучаете лично? Опять же, отчасти это может подразумеваться из-за назначенных вами метаданных, но само название все еще отсутствует.Этот набор проектов оставляет много вопросов и требует от вас расшифровать ряд предположений, прежде чем вы сможете действовать.

    Часть , почему GTD устраняет необходимость хранить информацию в нашем сознании, поскольку мы ужасно можем вспомнить ее, когда она нам нужна. Но у нас неизбежно возникает потребность помнить о нашем намерении в отношении этих проектов и задач, если мы рассматриваем их как не более чем список триггеров. Мы оставили себе завершенной только половину мышления, а вторую половину сохранили в уме, что противоречит цели, которую мы изначально намеревались достичь.Нам лучше обслуживать себя, если мы завершим процесс и укажем в названии все данные, которые нам нужны или есть для элемента.

    Возникает естественный вопрос: «Как следует назвать ?» Ответ прост в принципе и сложен на практике. Эти заголовки должны рассказывать вам, что именно нужно делать, без необходимости дополнять это информацией, которую вы все еще пытаетесь запомнить. С тактической точки зрения это означает, что нужно начинать с глагола и давать столько деталей, что вы можете проснуться посреди ночи и при этом знать, что делать, когда читаете его.

    • День рождения жены → Отметить день рождения жены дома
    • example.com → Создайте example.com для клиента xyz
    • Новинка → Запустить новую линейку свитшотов

    Переименовав эти проекты, вы сразу же заметите повышение ясности и узнаете, что сделал , просто прочитав заголовок. Чтобы придать такой уровень определения, потребуется больше работы, но я могу сказать вам по опыту, что эти дополнительные несколько секунд сэкономят вам время и избавят вас от лишних хлопот, связанных с их переосмыслением каждый раз в будущем.

    • Торт → Call Deli re: индивидуальный торт на день рождения жены
    • Электронная почта? → Почтовый клиент xyz re: сколько учетных записей электронной почты необходимо до запуска?
    • Пресс-релиз → Написать первый черновик онлайн-пресс-релиза по новой линейке толстовок

    Подробно рассказать об этом - задача не из легких, но преимущества бесценны. Вместо того, чтобы видеть несколько слов, требующих интерпретации (что само по себе становится задачей), я вижу действие, которое необходимо предпринять.Устранение этого крошечного сопротивления может стать отличием продуктивной работы от прокрастинации. Не позволяйте желанию сэкономить время заранее, чтобы не делать ничего позже.

    «Наука и опыт аналогового письма 38: Использование нескольких рабочих столов в одном офисе »

    аналоговый ум в цифровом мире

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *