Тюнинг ваз 21 0 7: Тюнинг на ВАЗ 2107 (семерка) купить с доставкой по РФ

Тюнинг автомобиля ВАЗ 21 0 7, салон 2107

Какой тюнинг можно сделать для ВАЗ 2107?

Практически каждый владелец авто хотя бы раз в жизни задумывался об усовершенствовании своего транспортного средства. Тюнинг ВАЗ-2107 позволит улучшить внешние данные машины и характеристики, отвечающие за производительность.

На отечественном рынке до сих пор именно «Семерка» пользуется наивысшей популярностью, что обусловлено относительно невысокой ценой авто и легкостью в ремонте и в тюнинге. Реализовать и то, и другое можно своими руками. Тюнинг ВАЗ-2107 можно недорого воплотить в жизнь, обратившись к специалистам.

Виды работ по тюнингу «Семерки»

Какие же бывают разновидности работ по апгрейду такого отечественного авто? Как правило, улучшению характеристик подвергается салон авто, двигатель, а еще внешний вид транспортного средства.

Каждому известно, что машины отечественного производства не отличаются излишней «начинкой». Для водителя, который любит прежде всего комфорт, у которого есть желание эксплуатировать исправное, безопасное авто, тюнинг ВАЗ-2107 просто необходим.

В салоне можно поменять руль, обшивку, установить хорошую аудиосистему и многое другое. Что касается апгрейда «начинки», то автолюбители добираются до свечей, цилиндров, карбюратора и прочего. Внешние преображения осуществляются за счет замены дисков, покраски авто.

Тюнинг салона ВАЗ-2107

Итак, тюнинг салона ВАЗ-2107. Намного приятнее и комфортнее находиться в красивом салоне, ведь от этого прямо или косвенно зависит и настроение, и отношение к самому процессу вождения. Тюнинг салона ВАЗ-2107 может включать в себя различные манипуляции.

Большинство автовладельцев «Семерок» недовольны рулевым колесом. Даже тем, которое идет в машинах, выпущенных за последние 2 года. Водители сетуют на то, что с такой «баранкой» управление авто значительно затрудняется, вождение не приносит удовольствия, а доставляет только дискомфорт. Поэтому такая проблема требует доработки. Большинство владельцев рулевое колесо меняют на меньшее по размеру.

Доработка действительно необходима и в вопросе обшивки сидений. Естественно, что сидеть комфортнее не станет, но внешний вид будет намного лучше. Как вариант, можно приобрести готовые комплекты для обшивки сидений. К «Семерке» хорошо подходят комплекты от Тойоты Короллы 1993 года выпуска. Иным вариантом является просто покупка материи и замена с помощью специального клея обшивки сидений. Приборную панель можно обтянуть различными по составу и цвету материалами. Все зависит от личных предпочтений автовладельца.

Можно сделать преобразования, касающиеся зеркала заднего вида. В этом деле все просто: закрепить на штатном новое большое зеркало. Следующим этапом улучшения авто может стать замена солнцезащитных козырьков на тюнинговые.

Очень часто бывает так, что места в салоне не хватает для распределения всяких мелочей, их просто некуда положить, разместить. Для устранения такой проблемы можно сделать следующее: в продаже имеются готовые комплекты с различными подставками, кармашками, которые станут отличным дополнением к торпедо.

Не стоит забывать и про аудиосистемы. Для любителей качественного звука салон авто должен быть оснащен хорошей аудиосистемой, которая превратит процесс вождения в одно удовольствие.

Улучшение багажника тоже нельзя оставить без внимания. Многие владельцы «Семерок» и ВАЗ-2105 прибегают к довольно простым методам преобразования багажника. Часто своими руками создается фальшпол для багажника. Для этого нужны обычные доски, которые нужно соединить в таком порядке, чтобы получилась удобная конструкция с отсеками, секторами, в которые потом можно поместить различные предметы, дабы в багажнике был порядок. Кроме этого, многие прибегают к ввариванию запаски в пол багажника (подходит и для ВАЗ-2105, и для ВАЗ-2107), вклеиванию специального материала для шумоизоляции (в основном это необходимо, если в багажное пространство будет размещен сабвуфер — так звук становится чище и качественнее).

Тюнинг двигателя ВАЗ-2107

Внутренние характеристики «Семерки», которые отвечают за производительность авто и нормальную его эксплуатацию, часто требуют доработки.

Стандартная мощность двигателя ВАЗ-2107 не отличается особо высокими показателями. В самом техническом паспорте на авто можно это легко проверить. Занявшись тюнингом данного элемента, можно с легкостью и без особых затрат сил, времени и денег сделать авто лучше. Ресурсы и характеристики преобразованного двигателя будут куда выше заводских. Следует учитывать, что перед началом выполнения работ нужно определиться, какие качества хочется получить на финише, ведь любой апгрейд выполняется строго индивидуально, под себя.

Доработка двигателя может быть направлена как на улучшение мощности, так и на настройку его работы, регулировку существующих фаз распределения газа и другое. Доработка ВАЗ «Семерки» может включать в себя тюнинг цилиндров (выбор подходящего коленвала, расточки, выбор правильной балансировки поршней), иногда необходима установка компрессора или же турбины (тюнинг турбонаддува), тюнинг впуска и выпуска. Для автолюбителя нужно определить, какую именно мощность двигателя хочется (верхнюю или нижнюю).

Сделать тюнинг двигателя ВАЗ-2107 своими руками — это, как ни крути, дело хлопотное, и разбираться в технике нужно очень хорошо. Но когда нет возможности обратиться к специалисту или же нет определенных навыков и знаний, возможен простой и не менее эффективный вариант: заменить сам двигатель. Рабочий объем стандартного двигателя лучше не менять (в «Семерках» он идет на 1800 см³). При замене двигателя на новый дома самостоятельно интерес представляют такие элементы двигателя, как головка блока, цилиндрический блок, шатуны и коленвал. Идеальным «двигателем-донором» для доработки можно назвать новый двигатель 21213.

Апгрейд подвески ВАЗ-2107

Тюнинг подвески ВАЗ-2107 производится таким же образом, как для ВАЗ-2105 или любой другой модели из этой категории авто. Подбор тех параметров, которые требуют замены, выполняется в соответствии с пожеланиями самого владельца транспортного средства. Чаще всего это пружины, шаровые опоры, амортизатор и стабилизатор поперечной устойчивости. Спортивная подвеска для данного авто будет более жесткой, с ней управление автомобилем станет более надежным и безопасным. Наиболее распространенным вариантом переделки подвески является замена пружин (берутся пружины от «Нивы») и замена шин и дисков. Таким образом выходит спортивная подвеска. Решение сменить подвеску снимает вопрос о том, как поднять «Семерку». Тюнинг ходовой части этого авто, как наглядно видно, является очень полезным.

Внешний тюнинг ВАЗ «Семерки»

Внешний тюнинг ВАЗ выполняется чаще всего. На втором месте по популярности апгрейда ВАЗ-2107 тюнинг салона, о котором выше уже шла речь. Внешняя доработка доставляет огромное удовольствие владельцам авто, так как красивая картинка всегда будет радовать глаз, может стать изюминкой владельца. Главное — это дать волю фантазии. Спектр довольно широкий: от покраски и до замены фар. Затрагивать тему перекраски авто или нанесения рисунков, наклеек на кузов нет смысла, так как это очень просто и не требует специальных навыков.

Тюнинг фар ВАЗ-2107 требует подбора понравившихся светодиодов, дрели, герметика, панели под фары, резисторов и соединительных проводников.

В первую очередь нужно подобрать размер панели под фары в соответствии с их параметрами. Затем в ход идет дрель. Нужно сделать несколько отверстий на одинаковом расстоянии для установки светодиодов, которые впоследствии нужно соединить между собой с помощью контактных проводков (плюс к плюсу, а минус к минусу). К колодкам питания фар подключаются собранные схемы из светодиодов. На каждые 4 светодиода необходим резистор для обеспечения сопротивления в цепи.

Тюнинг ВАЗ 2107 и ВАЗ 2105

ВАЗ 2107 — невероятно популярный в народе автомобиль. Часто его называют «Русский мерседес» или «Хочу быть мерседесом» за характерную радиаторную решетку и общий вид передней части автомобиля.

В сравнении с современными автомобилями (особенно иномарками), любой ВАЗ 2107 да и ВАЗ 2105 (в этой статье мы решили объединить их) значительно уступают им и в конструктивном совершенстве, и в мощности, и в эргономике, и в дизайне. Хотя, последний момент весьма спорный, поскольку откровенно страшных машин и зарубежом производят немало.

Зато отечественная ВАЗовская «классика» предоставляет своему владельцу невероятно широкий простор для творчества, отделки и тюнинга своими руками.

Тут стоит отметить, что некоторым молодым людям иногда кажется, что тюнинг классики ВАЗ заключается лишь в установке литых дисков под низкопрофильную резину, различных надписях, тонировке по кругу и сабвуфере. Некоторые также снимают бамперы, ставят «юбки» и «фартуки», а также конструкцию на багажник, внешне напоминающую приподъездную лавочку…

Но на самом деле, тюнинг ВАЗ 2107 и ВАЗ 2105 включает в себя, в первую очередь, увеличение мощности двигателя, то есть, его конструктивную доработку, включая системы питания, зажигания и газораспределения.

Тюнингованный мотор на 2107 может легко может выдавать на несколько «лошадок» больше, нежели стандартный. Но иногда бывает гораздо более целесообразным поменять весь агрегат целиком. Конечно, при наличии на то достаточных средств.

Во-вторых, при тюнинге ВАЗ 2107 и 2105 переделке придется подвергнуть трансмиссию, причем, вместе со сцеплением. Передаточные числа решают многое, но увы, на мощность почти не влияют. Однако, добиться поддержки постоянной скорости при меньших оборотах двигателя весьма реально.

Карданную передачу и редуктор можно не менять, лишь произвести профилактику (протянуть-помазать-заменить изношенные детали). В-третьих, следует заменить оригинальную мягкую подвеску «классики» на более жесткую. К примеру, установить японские стойки и пружины. А вот с шаровыми ничего не поделать — их аналогов не имеется.

Лишь закончив с внутренностями 2107 тюнинг, стоит переходить к экстерьеру «семерки». Не стоит думать, что круговая тонировка машины — это «круто». Если в тонировке действительно есть необходимость, то стоит затонировать лишь заднее ветровое стекло и боковые окна задних дверей.

Тонировка лобового стекла неприемлема, поскольку в темное время суток вы лишитесь хорошего обзора. Точно также не стоит в качестве тюнинга Лада 2107 устанавливать, так называемый, «спойлер» на багажник, поскольку на аэродинамику он почти не повлияет, а на высоких скоростях наоборот — приведет к неоправданно большому расходу бензина. Не забывайте, что «классика» на скорости более 100 км/ч становится плохо управляемой, а до этой «сотни» в спойлере совершенно нет нужды.

Внешний тюнинг ВАЗ 2107 и ВАЗ 2105 должен обязательно включить в себя установку солнцезащитного козырька над лобовым стеклом, так как это освободит водителя от необходимости опускать солнцезащитные козырьки во время движения в солнечном направлении.

А вот литые диски на VAZ 2105-07 стоит устанавливать непременно, но это уже скорее опция, а не правило. Дело в том, что литой диск (при условии его высокого качества) не только эстетично выглядит и добавляет экстерьеру агрессии, но и менее подвержен коррозии.

Занимаясь тюнингом 2107, не стоит пренебрегать установкой боковых зеркал заднего вида с подогревом и канавками для отвода влаги с его поверхности. Правильно тюнингованная «классика», если уж и не приблизится к иномаркам, то, по крайней мере, будет радовать своего владельца достаточной мощностью, динамикой и приемистостью.

Смотрите также тюнинг классики ВАЗ 2106 — легендарной «шестерки», а также куда более современный тюнинг ВАЗ 2112 — хэтчбека на базе «десятки», одного из самых привлекательных внешне автомобилей производства Волжского автозавода.

Полезные доработки

Индикатор уровня газа в баллоне ВАЗ-2107

На свой Ваз ГБО я установил давно, и все это время отслеживал уровень газа «по одометру». Иногда приходилось открывать багажник и поглядывать на стрелку. Но хотелось чтобы все было по человечески. Машина у меня карбюраторная, а ГБО второго поколения. На рынке существует много различных индикаторов уровня газа выполненных в виде ряда светодиодов. У товарища такой стоит. Мне он показался малоинформативным, и я решил собрать адаптер, который позволял бы синхронно отображать уровень газа на бензиновом индикаторе уровня топлива.

• Подробнее о Индикатор уровня газа в баллоне ВАЗ-2107
• Войдите, чтобы оставлять комментарии

Установка салонного зеркала с автоматическим затемнением

И так, тема для тех, чьи машины по любой из причин не имеют тонировки заднего стекла и кто испытывает дискомфорт при ночной езде по трассам и городу из-за засветки фарами сзади идущих машин.
Хватит это терпеть!
Решений этой проблемы несколько: можно просто затонировать заднее стекло или притонировать само зеркало. Думаю что объяснять все недостатки этого метода нет необходимости. Так случилось, что у меня нет ни тонировки и зеркало не имеет переключателя режимов “день/ночь”. Посему было принято решение установить салонное зеркало заднего вида от иномарки с автоматическим затемнением.

• Подробнее о Установка салонного зеркала с автоматическим затемнением
• Войдите, чтобы оставлять комментарии

Доработка штатной работы ЭПХХ на ВАЗ-2104, ВАЗ-2105, ВАЗ-2107, ВАЗ-2121

Для начала предлагаю рассмотреть принцип работы обычной штатной системы экономайзера принудительного холостого хода на ВАЗ-2107 с карбюратором ОЗОН и штатным блоком управления ЭПХХ. Что бы понять для чего эта система нам нужна и нужна ли вообще, так как многие просто анулируют этот блок, подключая напрямую +12 вольт от зажигания у электро-магнитному клапану и привет, что есть клапан, что нету. Итак, цитируем мурзилку:

• Подробнее о Доработка штатной работы ЭПХХ на ВАЗ-2104, ВАЗ-2105, ВАЗ-2107, ВАЗ-2121
• Войдите, чтобы оставлять комментарии

Автоматическое открытие и ЗАКРЫТИЕ багажника на ВАЗ-2107

Автоматическое открытие и ЗАКРЫТИЕ багажника на ВАЗ-2107 с брелка сигнализации.

• Подробнее о Автоматическое открытие и ЗАКРЫТИЕ багажника на ВАЗ-2107
• Войдите, чтобы оставлять комментарии

Какие КПП бывают на ВАЗ классику

Далеко не все в курсе, что существует как минимум три типа КПП на ВАЗовской классике. И 4 типа редукторов заднего моста. И все они отличаются своими тяговыми и скоростными характеристиками. И комбинируя эти узлы и агрегаты можно из классики сделать тяговую лошадку, скоростной болид, дрифт-корч или универсальный автомобиль на все случаи жизни. В этой статье мы вам и расскажем, о том какие виды КПП встречаются, чем отличаюся, и чего можно добиться той или иной их комбинацией 😉 Коробки бывают 2101, 2105, 2106. Передачи (1я, 2я, 3я) в 2101 короче, чем в 2105, в 2106 — длиннее. Редукторы бывают с передаточным числом 3.9, 4.1, 4.3, 4.44.

• Подробнее о Какие КПП бывают на ВАЗ классику
• Войдите, чтобы оставлять комментарии

Установка и подключение магнитолы на ВАЗ-2107 в штатное место на консоли

• Подробнее о Установка и подключение магнитолы на ВАЗ-2107 в штатное место на консоли
• 2 комментария
• Войдите, чтобы оставлять комментарии

Улучшаем фонари освещения заднего хода на ВАЗ-2107

Дорогие друзья. Ни для кого уже давно не секрет, что стоковые фонари заднего хода на ВАЗ-2107 светат не очень, лампочки 2х21 Вт. явно не справляются с поставленной им задачей, а если машина еще и затонирована и фонари немного “уставшие” то движение задним ходом в темное время суток очень сильно затрудняется.

• Подробнее о Улучшаем фонари освещения заднего хода на ВАЗ-2107
• Войдите, чтобы оставлять комментарии

Заедает педаль газа на карбюраторной классике? Вам сюда 🙂

Я думаю что практически каждый классиковод на карбюраторной классике сталкивается с моментом, когда начинает заедать педаль газа в самом начале хода. Это вносит некоторые неудобства – тронуться очень плавно не получается – ибо при легком нажатии на газ педель заклинивалао и машина глохла а если надавить сильнее то педаль газа проскакивает этот “заедающий” участок, но обороты сильно резко возрастают и машина начинает дергаться.
Как вариант в таких случаях – использовал прегазовку. Но газовать перед каждым троганьем с места рано или поздно надоест! Что интересно – при отсоединенных тягах карбюратора в самом карбюраторе ничего нигде не заедает. Точно так же не заедает и сама педаль газа при отсоединенных тягах от карбюратора. А вот все в сборе – подклинивает маленько педаль и все тут.

• Подробнее о Заедает педаль газа на карбюраторной классике? Вам сюда 🙂
• Войдите, чтобы оставлять комментарии

Установка тросиковой педали газа на классику

Вот обещанное описание процесса установки тросиковой педали газа с солекс 21053 под двигатель 2103 (может кому пригодиться)

Начнем с того, что объясним для чего это мне надо было делать.
Дело в том, что при установке солекса на классику привод педали газа имеет много люфтов, из-за чего корректной работы всего этого механизма не наблюдается. при установке тросика подача топлива происходит адекватно нажатия на педаль газа, без рывков и провалов.

ВАЗ-2107: тюнинг салона. Описание LADA-2107 (“семерка”)

В классической линейке моделей Волжского автомобильного завода одной из самых популярных является ВАЗ-2107. Тюнинг салона сможет подарить владельцу незабываемые ощущения новизны. О том, как его провести с минимальными затратами, и пойдёт речь в этой статье.

Типичный владелец

Среднестатистический портрет хозяев этой модели «Жигулей» таков:

• возраст средний и выше;
• они всегда знают, сколько денег у них в кошельке;
• практичны и непритязательны;
• умеют экономить средства.

Для такого типа людей предпочтительней обновить салон во время проведения ремонтных работ, связанных с кузовом. Это избавит он необходимости разбирать салон автомобиля – сварочные и покрасочные работы требуют этого априори. Не потратить «лишних» денег – одно из желаний владельцев ВАЗ-2107.

Тюнинг салона своими руками позволит также сберечь определённую сумму. Но при условии, что владелец умеет работать руками. То есть руки у него растут из нужного места. В противном случае придётся оплачивать эту работу отдельно. При этом никто не сделает лучше тюнинг салона авто, чем его владелец.

План работ

Чтобы сразу оценить необходимую стоимость преобразований, необходимо составить список того, что вы решитесь улучшить в своём ВАЗ-2107. Тюнинг салона, который здесь описывается, подразумевает работы по замене или улучшению следующих позиций:

1. Шумоизоляция салона.
2. Замена дверных карт.
3. Установка электростеклоподъёмников.
4. Замена переднего ряда сидений.
5. Доработка либо замена торпедо и приборной панели.
6. Установка консоли для стереосистемы и подлокотника.
7. Установка задней акустической полки и акустических карманов на передние двери.
8. Замена потолочного покрытия.
9. Замена пластиковых деталей салона.

Вышеперечисленные изменения позволят владельцу вдохнуть новую жизнь в старое авто, получая удовольствие от комфорта во время ежедневных поездок.

Шумоизоляция салона

Эта процедура позволит существенно изолировать салон от шума дороги и двигателя автомобиля, что, несомненно, увеличит комфортабельность поездок. Для качественной шумоизоляции салона, включая потолок, необходимы следующие материалы и инструмент:

1. Шумоизоляционный материал – 15 листов.
2. Виброизоляционный материал – 15 листов.
3. Мастика.
4. Уайт-спирит.
5. Щётка по металлу и канцелярские ножи.
6. Фен (строительный).

Без установки шумоизоляции на автомобиль ВАЗ-2107 тюнинг салона, кроме декоративного эффекта, комфорта не добавит.

Эта процедура является основополагающей для достижения заданного результата. Эффективность работ напрямую зависит от толщины укладываемого материала. Чем он толще, тем большее шумопоглощение будет достигнуто. Если вы ограничены в средствах, но всё равно желаете изменить свой ВАЗ-2107, тюнинг салона можно сделать поэтапно. И шумоизоляция является первым, что вам надо установить.

Итак, освободив салон от внутренней обшивки, сняв потолок, сиденья и торпедо, можно приступать к подготовке поверхности. Работы выполняем в следующем порядке:

1. Зачистить щёткой всю внутреннюю поверхность, куда собираетесь клеить изоляцию.
2. Убрать полученный мусор с помощью пылесоса.
3. Обработать поверхность уайт-спиритом.
4. Приступаем к поклейке виброизоляционного материала.
5. Клеим шумоизоляцию.

При поклейке виброизоляции необходимо пользоваться феном, нагревая приложенный материал со стороны фольги. Сильно нагревать нет необходимости. Достаточно так, чтобы смола, входящая в состав материала, стала более эластичной. После этого приглаживаем лист с помощью резинового валика или обычной ветоши.

Если у вас не хватает материала, то можно пропустить зону под задним сиденьем. Но двери обработать крайне важно. Целым куском эту работу выполнить практически невозможно, поэтому наносите материал удобными отрезками, укладывая их встык. Затем сверху клеится шумоизоляционный материал. Не переживайте, все элементы салона станут на свои места. Плотно, но станут.

Кроме того, при монтаже торпедо рекомендуется дополнительно покрыть места соприкосновения с кузовом специальным материалом, предотвращающим появление скрипа – звука, способного вывести из равновесия даже самых флегматичных и уравновешенных людей.

Электроприводы стёкол передних дверей

Монтаж этого оборудования не должен вызвать больших трудностей при установке. Самые подходящие и надёжные – рычажные приводы “Урал”, производство которых находится в Сарапуле. Их установка полностью описана в прилагаемой инструкции и требует просто внимательности и неспешности в работе.

От точности места сверления отверстий (их всего два) будет зависеть величина перекоса при подъёме стекла. Этот момент является самым сложным во всей операции по установке электрических подъёмников на передние двери авто. Кнопки управления можно разместить на торпедо слева от рулевого колеса, а можно установить на центральной шахте (консоли) рядом с переключателем скоростей. Второй вариант представляется мне более комфортным.

Особенности при подключении

Делая тюнинг салона авто и установив электроподъёмники на стёкла, ни в коем случае не экономьте на проводах. От их качества и места подключения к автомобильной сети зависит безопасность и надёжность их работы. Двигатели подъёмника являются очень мощными потребителями энергии, поэтому подключать их к первому попавшемуся предохранителю не рекомендуется. Лучше сделать отдельную ветку через реле и со своим предохранителем прямо от аккумулятора или же подключить к самому мощному вводу на щитке предохранителей ВАЗ-2107. Тюнинг салона своими руками подразумевает большую ответственность со стороны владельца: за допущенные ошибки, нарушившие безопасность машины, винить кроме себя будет некого.

Торпедо и обшивка

Поскольку мы стремимся к рациональному расходованию средств, торпедо останется без изменений. Мы не будем делать её перетяжку или заменять на более современную от какой-либо иномарки. В качестве экономичного варианта я бы посоветовал приобрести специальный комплект для преобразования ВАЗ-2107.

Тюнинг салона с его помощью займёт немного времени, а эффект будет ощутим сразу. В этот набор входят все пластиковые декоративные накладки салона, накладка на торпедо, консоль, дверные карты, панель солнцезащитных козырьков, акустическая задняя полка, акустические карманы на передние двери и дверные карты. Есть несколько вариаций изделий, позволяющих подобрать предпочитаемый цвет и графический рисунок. Приобретая весь комплект, вы сэкономите средства – по отдельности детали выйдут гораздо дороже.

Установив сразу весь комплект, вы сможете оценить, как преобразилась ваша машина. ВАЗ-2107 после такого вмешательства сможет порадовать своей новизной.

Приборы ВАЗ-2107

Тут есть два варианта для творчества: изменить подсветку на диодную и наклеить на сам щиток новую декоративную плёнку, визуально меняющую панель, либо установить альтернативную панель GF 608 Gamma. Второй вариант стоит значительно дороже, но кроме новой панели вы получите отличный бортовой компьютер.

Кроме маршрутного контроля и сервисных напоминаний, новая панель обладает такими свойствами:

• парктроник;
• таксометр;
• регулировка яркости панели;
• множество других функций и операций.

Внешний вид приборки обязательно вызовет интерес у окружающих, и завистливые взгляды соседей по гаражу вам обеспечены.

Сиденья ВАЗ-2107

Если есть желание, можно установить сиденья от иномарки. Оптимальный вариант – от “Опеля” или “Фиата”. В последнем случае переделки креплений будут минимальны.

А “Опель” отличается тем, что его сиденья расположены низко. Установив их, вы не будете биться головой об потолок. Если же на сиденья сил и средств не хватило – ограничимся новыми чехлами.

В результате всех приложенных усилий ваша машина ВАЗ-2107 обрела способность удивлять и снова радовать своей новизной.

Тюнинг — чума! Самые лихие переделки 90-х — журнал За рулем

Многие отечественные тюнеры взялись за Оку — динамика=то у нее была слабенькой! Сам собой напрашивался украинский мотор МеМЗ‑245 объемом 1,1 л, мощностью 49 л.с. Некоторые фирмы экспериментировали и с системой впрыска для этого мотора. Скорость машин с мотором МеМЗ возросла до 150 км/ч.

Тут и смелым стало ясно, что надо что-то делать и с остальным. Ведь тормоза даже стандартной Оки при относительно резкой езде были склонны к перегреву и деформации дисков. На микролитражку приспосабливали тормоза от Самары и 13‑дюймовые колеса. Заодно уж меняли ШРУСы и амортизаторы. По несколько десятков подобных микролитражек в месяц делала, в частности, фирма «Астро-Кар». Эта же компания совместно с ЗМА КамАЗ построила и удлиненную версию Алсу. До бизнес-класса, к счастью, не дошло! Машину удлинили всего на 120 мм, а попутно снабдили мотором в 49 л.с. Но дело в 2000 году ограничилось несколькими опытными образцами.

Челнинская компания РИАТ, занимающаяся, в основном, грузовиками КАМАЗ, тоже внесла вклад в дело улучшения Оки, соорудив версию с доработанным двухцилиндровым впрысковым мотором ВАЗ, развивающим 40 л.с., и игривым пестреньким, «плюшевым» салоном.

Материалы по теме

Дальше всех в деле «убыстрения» Оки пошла московская фирма Виста, ставивщая опыты над микролитражками Серпуховского завода. Виста смело заправляла под капот британские моторы Rover: литровый мощностью 44 л.с., а позднее и 63‑сильный рабочим объемом 1.3 л. Но всё это могло существовать, лишь пока существовала сама Ока. А спрос на нее в начале 2000‑х совсем упал.

Волга: с мотором Rover и Toyota

Материалы по теме

На другом полюсе отечественного тюнинга стояла Волга. Даже с появлением 130‑сильного двигателя ЗМЗ‑406, сделавшего автомобиль заметно резвее, желание придать нижегородским седанам больше прыти не исчезло. Тем более, что под капот Волги некогда умещали и моторы V8. До этого на сей раз дело не дошло. Но импортные двигатели в ГАЗ‑3110 и ГАЗ‑3102 ставили с энту­зиазмом.

Заводские испытатели относились к таким изделиям с сарказмом. Ведь они отлично понимали: плодами тюнинга надо еще и как-то управлять. А у Волги с управляемостью и так было не всё благополучно.

Пример «скрытого» тюнинга — неотличимая внешне Волга ГАЗ‑3102 с британским двигателем Rover.

Пример «скрытого» тюнинга — неотличимая внешне Волга ГАЗ‑3102 с британским двигателем Rover.

Материалы по теме

Материалы по теме

Самыми скромными для Волг стали 2‑литровые агрегаты Rover мощностью 130–135 л.с. с пятиступенчатой механической коробкой передач и импортным сцеплением. Такие машины делала фирма «Техноволга». Максимальная скорость ГАЗ‑3102 составляла уже 180 км/ч, а разгон до 100 км/ч — 11 с, против паспортных 17 с со стандартным мотором.

Компания «Техносервис» предлагала двигатели Toyota: 152‑сильный, четырехцилиндровый объемом 2,7 л и даже V6 в 3,4 л мощностью 190 л.с., с механической или автоматической коробками передач. Скорость самых мощных версий переваливала за 200 км/ч. Поэтому на них повадились ставить еще и задние мосты Volvo.

Помимо автомобилей с заметно измененной внешностью, чаще делали Волги, почти не отличимые с первого взгляда от стандартных. Ведь они не вызывали повышенного интереса окружающих, поэтому подходили чиновникам, в те годы еще стеснявшимся демонстрировать свое богатство.

Сумасшедшая Волга

Материалы по теме

Довелось близко познакомиться и с неприметной внешне Волгой ГАЗ‑3110 не с импортным, а с тюнинговым отечественным двигателем ЗМЗ‑4064. Наддувный агрегат мощностью 200 л.с. при 5200 об/мин работал с импортным сцеплением, задним мостом от Volvo и штатной пятиступенчатой коробкой передач. Сумасшедшая Волга на полигоне достигла 100 км/ч за 9,6 с (машина с серийным ЗМЗ‑4062 — 14,7 с) и набрала в итоге 197,2 км/ч. Но всё это пиршество закончилось прогаром прокладки головки блока. Как сознался владелец — не первым.

ВАЗ: «Желтая акула», роторная Самара…

Конечно, больше всего умельцы работали с Ладами. Тон задал сам завод, показав в 1996‑м ВАЗ‑21106 по имени Желтая Акула (прототип был, действительно, желтым) с 1,8‑литровым 150‑сильным двигателем Opel. Машина со спортивным, вполне гармоничным, обвесом достигала 205 км/ч.

ВАЗ‑21106, он же «Желтая акула», — ­один из первых примеров профессионального, грамотного тюнинга.

ВАЗ‑21106, он же «Желтая акула», — ­один из первых примеров профессионального, грамотного тюнинга.

ВАЗ‑21106, в том числе и в двухдверном варианте, позднее мелкосерийно выпускала фирма «Моторика».

Двухдверные ВАЗ‑21106 с моторами Opel в небольших количествах делали под заказ.

Двухдверные ВАЗ‑21106 с моторами Opel в небольших количествах делали под заказ.

Под капотом «десятки» плотно расположили 150‑сильный двигатель Opel.

Под капотом «десятки» плотно расположили 150‑сильный двигатель Opel.

Скромнее были мелкосерийные трехдверные хэтчбеки ВАЗ‑21123, на которые ставили отечественные двигатели 1,6–1,8 л.

ВАЗ‑21123 выпускали малыми партиями с отечественными моторами рабочим объемом 1,6 л-1,8 л.

ВАЗ‑21123 выпускали малыми партиями с отечественными моторами рабочим объемом 1,6 л-1,8 л.

Материалы по теме

Пример заводского, по сути, тюнинга — мелкосерийные Самары с роторными моторами. Двухсекционный агрегат в 140 л.с. при 6000 об/мин обеспечивал максималку 190 км/ч. Внешне автомобили не отличались от серийных. Что придавало им даже дополнительный шарм, поскольку поведение роторной Самары для окружающих становилось сюрпризом.

Довольно скромно, но гармонично выглядели Самары тюнинговой фирмы Lada Engineering. Основной упор делали именно на грамотную технику. Фирма разработала несколько вариантов двигателей с измененными фазами газораспределения, импортными поршнями и иными изменениями: объемом от 1,5 до 1,7 л и мощностью 92–130 л.с. Самые мощные моторы для полупрофессионального и даже профессионального спорта имели, соответственно, невеликий ресурс.

«Восьмерка» от Lada Engineering в комплектации Sport с мотором 1,7 л с двумя карбюраторами Weber и дисковыми тормозами «по кругу».

«Восьмерка» от Lada Engineering в комплектации Sport с мотором 1,7 л с двумя карбюраторами Weber и дисковыми тормозами «по кругу».

Материалы по теме

Иные двигатели вполне подходили и для ежедневной езды. Под моторы грамотно подбирали и передаточные числа трансмиссии. Устанавливали передние четырехпоршневые суппорты Lockheed, а на самые мощные версии — и задние дисковые тормоза. Конечно, занимались и подвеской. В общем, это был нечастый пример профессионального тюнинга — автомобили для умелой езды, а не борьбы мотора с шасси и водителем.

Продолжение — на следующей странице.

20 оригинальных примеров тюнинга ВАЗ-2107: как дорабатывают легендарную «семерку»

Её называли «советский Mercedes». Она была элитной вершиной линейки заднеприводных автомобилей ВАЗ. Речь идет о ВАЗ 2107 — в простонародье «семерка». Многие просто жаждали стать владельцем подобного аппарата, престижность которого даже внешне не вызывала ни у кого и тени сомнения. Одна только решетка радиатора «под-Mercedes» чего стоила! И не мудрено, что нынешняя современная молодежь берет «семерку» в качестве исходного материала для своих амбициозных тюнинг-проектов, адаптируя её к современным условиям с помощью доступных сегодня передовых технологических решений. Представляем вам подборку самых крутых вариантов тюнинга ВАЗ-2107.

«Lucky seven» или ВАЗ 2107 — «воплощение мечты»

У Владимира из Москвы все началось с детских воспоминаний об отцовском автомобиле. И он решил сделать своеобразный «экшн-проект» в виде качественного навороченного саунд-тюнинга для ВАЗ-2107.

Слово «экшн» здесь ключевое для описания доработок автомобиля в плане звучания, которые предусматривали тщательную аудиоподготовку с вибро-шумоизоляцией кузова и изменением интерьера, установку двух новейших генераторов на 115А, двух гелиевых аккумуляторов Optima 55А, 4 усилителя, сабвуферов KICKER, динамиков PEONEER и потолочного монитора MYSTERI.

Да и динамические характеристики автомобиля тоже задаются 1,6-литровым двигателем от Chevy Niva, готовым в будущих планах к установке турбины GARETT GTX 28. В результате получился уникальный динамичный мультимедиа экспонат, который уже 5 лет выигрывает различные конкурсы по автозвуку. Просто мечта! Подробнее читайте в нашей статье про этот автомобиль.

Стильный тюнинг ВАЗ-2107 из Польши

Европейские тюнеры, особенно из стран бывшего СССР, тоже иногда ностальгируют, тюнингуя недорогие советские автомобили. Но как же классно они это делают! Посмотрите на этот брутальный, на грани стиля «милитари» тюнинг нашей «семерки» и скажите нам в глаза, что вы бы не отдали многое, чтобы прокатиться на нём.

Проект сразу подкупает внешним видом сочетанием матового военного оливкового цвета кузова с глубоким черным цветом колесных дисков и кузовного обвеса VFTS.

А применение двигателя V8, аскетично-спортивного салона с каркасом безопасности, огромной рукояткой гидравлического ручника, спортивным рулем, заниженной подвеской, говорит о дрифтовой направленности тюнинга этого ВАЗ-2107. Благо, что это заднеприводный автомобиль. Настоящая «боевая классика» получилась.

ВАЗ-2107 как «испытательный полигон» от ClubTurbo Tuning Shop

Для испытаний и показа своих возможностей умельцы из компании ClubTurbo Tuning Shop создали этот потрясающий автомобиль на базе «семерки». Здесь есть все: и эффектный, даже немного гротескный, внешний вид шоу-кара, и модернизированная заниженная подвеска с точной настройкой под стритрейсерскую езду.

А самое главное, под капотом у него новый турбо-мотор собственной разработки конструкторов из ClubTurbo, работающий на сжиженном природном газе, с избыточным давлением в 0,8 бара, которое в планах увеличить до 2 бар. А это уже достаточно внушительная цифра! Читайте подробнее про этот проект в нашей статье.

Потрясающее «драг-купе» из ВАЗ 2107 в явном «дьябло-стайл»

Автомобиль, как внешне, так и по конструкции, явно спроектирован для драг-заездов по прямой. И кто из вас определит в нем «базовый элемент» — классическую модель ВАЗ 2107?!

Автором данного потрясающего шедевра стало тюнинг-ателье Stinger sport. Если спереди еще можно как-то угадать принадлежность этого инопланетного авто-существа к «седьмому» ВАЗовскому семейству, то сзади — это настоящий маскл-кар с явными элементами драгстера: огромными задними колесами и мощным высоким антикрылом. Правда для полноты картины не хватает вилли-бара и тормозного парашюта, но это все возможно появится в ближайшем будущем.

ВАЗ 2107 купе с V8 от Mercedes-Benz CLK430

Еще одно уникальное и эффектное купе из «семерки» с агрегатами от элиты мирового автопрома Mercedes-Benz CLK430. В основе проекта лежит шасси от купе CLK430 поколения W208, и это заметно по значительно расширенным колесным аркам. Но от этого наша «классика» стала смотреться как-то «по-раллийному» солиднее.

Под капотом этого красавца находится двигателя V8 рабочим объемом 4,3 литра и мощностью 279 л.с., что в сочетании с автоматической КПП разгоняет купе до 100 км/ч за 6,5 секунды. Т.е. данному ненастоящему «русскому Мерседесу» по-настоящему повезло — он стал наполовину немецким!

Британский чопорный лимузин из… экспортного ВАЗ 2107

В 80-90-е годы прошлого столетия ВАЗовская классика активно поставлялась на экспорт, причем на самый, что ни на есть буржуазный Запад. Так, например, ВАЗ 2107 некоторое время поставлялся в Великобританию под именем Lada Riva. И некоторые западные тюнинг-ателье дорабатывали дешевые советские автомобили по своему усмотрению.

Посмотрите на эту необычную трансформацию экспортной «семерки» в настоящий праворульный британский лимузин — или по-английски — Lada Riva Stretched Limousine. Работа по удлинению выполнена очень качественно с перекройкой задних дверей и поднятием крыши для соблюдения пропорций и удобства перевозимых VIP-персон.

Венгерский способ скрестить ВАЗ-2107 и Nissan с турбо V6

Внешне это почти заводской стоковый, но качественно отреставрированный автомобиль ВАЗ 2107 ярко-оранжевого цвета. Но присмотревшись, а еще лучше послушав, как звучит его двигатель, понимаешь, что умельцы из Венгрии сделали с нашим автомобилем что-то особенное.

Открыв капот сразу понимаешь, что создатели с большим трудом, но и с огромным умением интегрировали в подкапотное пространство турбированный 3,5-литровый двигатель V6 VQ35DE от Nissan. Его примерная мощность составляет сейчас 450-500 л.с.

Однако для этого пришлось значительно перекроить моторный щит и тоннель трансмиссии, изготовить новую выхлопную систему и много еще чего технологически сложного.

Вьетнамский Rolls-Royce из ВАЗ-2107

В обзоре самых интересных тюнинг-проектов нельзя обойтись без действительно фриковых воплощений ВАЗ-2107. И самое удивительное, что эрзац-пародия на известный люксовый бренд исходит не из Китая — родины всяческих подделок.

Этот ВАЗ-2107, стилизованный под Rolls Royce, был изготовлен вьетнамским умельцем. Купив советскую «семерку» за 500 долларов и потратив на переделку еще 1000 долларов, владелец получил эксклюзив, на который не могут не обратить внимание прохожие и другие участники дорожного движения. А мы примем этот проект за небольшую веселую передышку перед рассмотрением следующих более серьезных работ по тюнингу «классики».

Дрифт-кар ВАЗ-2107 16v Hater

Это настоящая «боевая классика» из серии созданных в простых гаражных условиях. Автомобиль явно готовили для дрифтовых соревнований путем глубокого корчевания. Изначально была взята довольно старенький экземпляр, который не жалко было пустить на эксперименты. А дрифт-кар — это постоянный процесс переделок и настроек, до первой серьезной аварии… и снова ремонт и переделка.

На автомобиль установлен двигатель ВАЗ 2112 Turbo td05, дополнительные выносные масляные радиаторы, коробка передач ZF 320 и много дополнительных «вкусных» корчевых штучек. В конце сменили имидж на стиль «All Black» с кричащей наклейкой на боку.

Лада 2107 LWorks

Нижегородский тюнинг ВАЗа — это то же самое, что тольяттинский тюнинг «Волги»! Кажется изначально проект должен быть обречен на неудачу. Но, посмотрите, какой классный и стильный получился лоурайдер или стэнс-проект, как уж назовете. Под капотом, кстати, находится 1,5-литровый мотор ВАЗ-2112.

Очень многое в стиле решает правильная посадка кузова в сочетании с крутыми колесными дисками в стиле концептов 70-х годов, черными накладными расширителями арок и, конечно, броскими покрышками с контрастными надписями. Несмотря на всю «тазовость» автомобиля, обратите внимание как элегантно он смотрится сзади. Поднятый чуть вверх задний бампер и антикрыло на срезе багажника, а также решетка на заднем стекле создают отличный олдскульный эффект.

Ростовский тюнинг ВАЗ-2107 с тяжелым аэрообвесом

В этот проект автором было вложено довольно много средств. «Трус не тюнит ВАЗ» — под таким девизом его создавали. Как видим, получилось очень даже неплохо, самобытно и эффектно. Другой такой «семерки» больше не найдешь.

Центральный элемент дизайна — гиперболизировано большая зубастая решетка радиатора в одном блоке с массивным передним бампером. Новая «глазастая» оптика и накладки «бровей» над ней делают весь облик автомобиля очеловеченным, с серьезным выражением лица. Как ни странно, но даже при таком глубоком тюнинге у этого автомобиля существует достаточно высокий процент узнаваемости исходного оригинала.

Приводится автомобиль 152-сильным прокачанным 1,9-литровым двигателем. Заниженная подвеска с амортизаторами Plaza sport + пружины «Клаксон», обрезанные на 2,5 витка, спереди амортизаторы Monro Adventure + пружины от Chevy Niva, обрезанные на 2,5 витка. Тормозная система фирмы Lucas. Диски 17 дюймов, резина Michelin. И много еще чего. Результат: 12 кубков и две статьи в двух специализированных журналах. Явный успех!

ВАЗ-2107 для дрифта с двигателем Nissan

Представим еще один проект дрифт-кара из классической «семерки». В настоящее время превращать заднеприводные ВАЗ в дрифт корчи — это настоящий тренд. У этого автомобиля был заменен родной двигатель на SR-20 DET от Nissan вместе с японской же трансмиссией.

После двигателя у дрифтового автомобиля самое основное — это подвеска. Передние рычаги: Турбо тема (зеленая), усиленный стабилизатор, амортизаторы Koni Heavy Track, родной мост (заварка), рулевая рейка от Subaru и колонка от RAV4. Т.е. после таких серьезных модернизаций этот ВАЗ-2107 не может «валить боком» хуже самых навороченных «японцев».

И при этом внешний вид максимально приближен к оригинальному стоковому автомобилю. И это очень радует, так как большинство тюнеров, адаптируя 30-летний автомобиль к современным реалиям, совсем забывают об «авто-патриотизме». Здесь все по-другому. Браво!

ВАЗ-2107 с претензией на стэнс из Барнаула

Не скажем, что этот проект выделяется чем-то особенным. Многие могут сказать о нем, как об одной из многочисленных попыток сделать в гаражных условиях что-то пониже из нашей легендарной классической «семерки». Да, скорее всего это так. Но проект находится в постоянной доработке и уже видны основные идеи и достижения.

Довольно органично занижена подвеска, что в сочетании с ретро-дисками Focus Racing Esprit R14 6.5 +10 спереди и Herculy R14 6.5 +5 сзади, создает очень даже благородный стэнс. Эффект усиливается низкой юбкой — обязательным атрибутом подобного стиля.

О динамике развития тюнинг-процесса можно судить по последней коррекции «семерочного» облика в сторону «пятой модели», что показывает смена решетки. Авторам видимо захотелось от проекта большей скромности и «тазовости», что больше присуще ВАЗ-2105, чем немного пафосному ВАЗ-2107.

ВАЗ-21078 «Краснодарский Кирпич»

Давайте сравним этот проект с предыдущим в нашей подборке. Здесь присутствует явный набор стильности, который свойственен направлению Low Stance. Этот автомобиль обладает одним броским элементом — это гипер-широкие колесные диски в стиле «разварок», установка которых потребовала наличия довольно больших контрастных накладок на колесные арки, создающих весь сбитый стиль всему автомобилю.

Черно-белая строгость всего внешнего вида, обрамлена хромированными элементами, в первую очередь знаменитой «семерочной» радиаторной решеткой. Но при этом внешний вид, как и в предыдущем проекте, практически стопроцентно определяется как ВАЗ-2107. И это тоже можно причислить к огромному плюсу данного варианта тюнинга «семерки».

Стритрейсерский вариант купе ВАЗ-2107 с претензией на GT

Перед нами вариант тюнинга, который как-то очень ностальгично выделяется на фоне новомодных стэнс- и лоурайдерских вариантов. Каноны тюнинга времен 15-20-летней давности в этом автомобиле, когда такие переделки были в фаворе, как-то по особому греют душу… совсем как старый добрый винил в музыке.

Чисто белый кузов с черным кругом, широкой солнцезащитной белой полосой на лобовике, высокое двухуровневое антикрыло на обрезе стокового гражданского седановского багажника, белые раллийные диски и набор рекламных брендовых наклеек на водительской двери и по порогам — все это элементы классического тюнинга и подхода к доработкам автомобилей конца прошлого века.

Но из особенностей проекта следует отметить трудоемкую кузовную работу по формированию из металла всех обводов от низкой юбки, плавно переходящей в расширители арок, а те в пороги, до интересных аэродинамических крылышек на обрезе заднего крыла.

ВАЗ-2107 команды Inguch Motor Sport

От стритрейсеров стремительно переходим к драг-заездам и представляем уникальную работу ингушских автомехаников, в основе которой лежала гражданская «семерка», преобразившаяся в результате до неузнаваемости. Из нее сделали мощнейший болид для драг-рейсинга, легко выезжающий из 9 секунд, с максимальной скоростью в 245 км/ч.

Здесь все как положено: мощный тойотовский двигатель JZ-GTE с турбиной Garett GTX 45, огромные задние драгстерные шины с расширенной колеей, броский выносной радиатор с эмблемой команды, и конечно же, вилли-бар от опрокидывания при резком старте и тормозной парашют.

В целом автомобиль имеет дерзкий вид, который является обязательным атрибутом для подобных автомобилей, с целью полного устрашения и морального разгрома соперника.

Розовый кабриолет из ВАЗ-2107

От кричащей брутальности предыдущего автомобиля переходим к настоящему гламурному экземпляру для блондинок. Кабриолет приторного розового цвета из классической «семерки» — работа её владельца Александра Кадышева.

Автор срезал крышу, усилил кузов, перешил салон и установил мощную аудиосистему. Перекрасил кузов в розовый цвет, отделал розовым белые матовые колесные диски, зачернил хромированную окантовку радиаторной решетки. Получился довольно цельный «бисквит-кар» для выезда на вечеринку с определенным уклоном. Единственно, что не в стиле — это коричнево-бежевый салон. Белый и только белый должен быть интерьер, господин «гламурный» тюнер!

«ВАЗеЛИН» — Стреч-лимузин-кабриолет из ВАЗ-2107

Где розовый кабриолет, там обязательно должен быть громадный розовый лимузин-кабриолет. И опять, как и в предыдущем случае, автором этого автомобиля является брутальный 42-летний деревенский автомеханик Сергей Федулов.

На строительство одного лимузина ушло два кузова ВАЗ-2107, с которых взяли переднюю и заднюю части. Затем был сварен каркас для удлинения лимузина, к которому намертво приварили боковую обшивку. Внутренняя часть лимузина полностью позаимствована от ВАЗ-2109.

Этот стиль назовем «деревенский гламур». «ВАЗеЛИН», как по-кавказски назвали этот объект, передвигается на переднем приводе, выдерживает нагрузку до 1300 килограммов и вмещает около 20 человек. Почти половину жителей деревни!

Необычный вездеход-переломка

Тюнинг бывает не только со спортивным уклоном, но и с внедорожным. В деревне, как и на 60% территории нашей необъятной родины — полное бездорожье. Там бывает невозможно проехать не только на лимузине, но и на неприхотливом гражданском седане. Да что говорить, и «Нивы» садились по самое брюхо в распутицу. Тут на выручку может придти необычный вездеход с болотоходными шинами низкого давления, изготовленный на базе ВАЗ-2107.

Если быть точными, то не совсем на базе «семерки», а только с использованием некоторых кузовных элементов, таких как передняя часть с моторным отсеком и капотом, радиаторная решетка и головная оптика. Все остальное — это индивидуальные доработки до требуемых критериев по всепроходимости, функциональности и безопасности.

В качестве двигателя использован надежный 2-литровый 75-сильный дизель Nissan с японской автоматическкой коробкой передач и нашей раздаткой от ГАЗ-69. Для водителя и пассажиров в суровые русские зимы предусмотрен специальный комфорт с применением подогревателя Вебасто, сухого фена в будке, лебедки, дополнительной печки с помпой.

«Городской стиляга» — идеальный вариант для хипстеров

Несомненно, это сугубо городской житель и по конструкции и по стилю. Он отлично вписывается в ритм жизни стильных молодых ребят, которые не особо куда торопятся и обращают внимание больше на детали, чем на суть вещей. Эта «семерка» с тюнингом в стиле стэнс, с тщательно отрегулированной подвеской, заниженной, но не совсем экстремально.

Как у всех моделей этого направления основным броским элементом являются полированные колесные диски, настолько широкие, чтобы низкопрофильная резина максимально плотно подходила к колесной арке. В идеале должно быть так, чтобы не пролезала рука, но и не было трения при движении. Это по-настоящему искусство настройки механиков.

Салон вмещает два спортивных ковшеобразных сидения, спортивный руль, трехточечные спортивные ремни безопасности, хорошую музыку… и пожалуй все, остальное просто не особо важно. Этот автомобиль дал нашей классике ВАЗ-2107 совершенно новую жизнь в новых реалиях и в новых скоростях.

Ему повезло! И поэтому автомобиль так гордо и с достоинством смотрится на городской трассе. А его водители из тех, кто хранят ключи под правым задним колесом и смотрятся в зеркало заднего вида, проверяя качество утреннего бритья. Городские хипстеры на «Городском стиляге» ВАЗ 2107 — вот кто они.

Подпишись на наш Telegram-канал

Панель приборов ВАЗ 2107 Светодиоды. Тюнинг приборной панели своими руками

Часто водители ВАЗ выражают недовольство подсветкой приборов на автомобилях (спидометр, тахометр и т.д.). Ее работа оставляет желать лучшего, а в темноте разглядеть что-либо непросто. Вариантов тюнинга 2107 своими руками много, например, замена комбинации приборов на «волговскую», но этот способ финансово затратный и подходит не всем.Именно поэтому предлагается менее дорогой и более качественный тюнинг ВАЗ 21 07 приборной панели, а именно доработка ее подсветки. Для этого сначала нужно приобрести светодиодные лампочки (любимого цвета).

Обратите внимание на цвет воронкообразной светодиодной линзы. В данном случае линзы синие, так как получается довольно интересный эффект стрелок и шкал приборов (светятся как у иномарки). Однако если вы не ищете подобных эффектов, то можете остановить свой выбор на белых лампах.

Теперь нужно уточнить, сколько лампочек вам нужно. При этом для маленьких приборов будет использоваться один светодиод, а для больших (спидометр и тахометр) приборов — по 4 светодиода, а также одна диодная лампа (показана на фото).

Эти лампы должны быть вставлены вместо стандартных ламп. Но менять их просто так бесполезно, потому что на силу освещения они не повлияют. Для этого нужно достать устройства, а затем разобрать их. Доработка приборов освещения ваз 2107 представлена ​​в следующем порядке действий:

1.Аккуратно снимите приборную панель с автомобиля (см. «») и отнесите ее в удобное для дальнейшей работы место. Отогните хромированное кольцо по периметру устройства с помощью отвертки. Сделайте это, чтобы появилась возможность снять его с устройства. Хотя это и повлияет на качество кольца, это необходимо сделать.

3. Теперь нужно осмотреть мелкие приборы (в случае пятиторпеды это вольтметр), т.е. шкалу и черную накладку над ней. Между ними есть расстояние, в котором будет располагаться светодиод.

4. Возьмите дрель со сверлом 7 мм и сделайте отверстие в самом низу шкалы.

5. Приклеиваем светодиод герметиком ко второй черной крышке.

6. Необходимо просверлить отверстие в корпусе устройства, чтобы провести туда провода от светодиода.

7. После высыхания герметика (этот процесс можно ускорить с помощью простого фена) соберите всю конструкцию в обратном порядке. Просверленное отверстие не будет заметно, как и светодиоды, так как они будут скрыты под накладкой.

8. Установите стакан с кольцами на прибор и зажмите хромированное кольцо. Самый подходящий инструмент для этого – отвертка. Плоскогубцы использовать нельзя, так как есть риск повредить внешнюю часть хромированного кольца.

9. Затем необходимо подключить провода от светодиода к штатным проводам подсветки на приборах. Стандартная лампа больше не нужна.

10. Проверяем работоспособность осветительных приборов.

Процедура разборки крупной бытовой техники аналогична разборке мелкой бытовой техники.Однако стоит учесть несколько нюансов:

1. В корпусе спидометра возле лампы будет перегородка, которую необходимо убрать, чтобы свет лучше рассеивался внутри прибора.

Несмотря на кажущуюся простоту внутренней отделки ВАЗ 2107, этот автомобиль имеет все шансы преобразиться в лучшую сторону и встать в один ряд с дорогими иномарками… Простой и сдержанный дизайн оставляет много места для совершенствования, большинство из которых можно легко сделать своими руками.

Прежде всего, приборная панель дает поле для фантазии, ведь именно на нее обращено основное внимание как водителя, так и пассажиров. Вполне естественно, что полностью уникальный тюнинг ВАЗ 2107 можно произвести только в профессиональных мастерских с привлечением значительных материальных средств. Это не наш вариант, поэтому здесь мы рассмотрим тюнинг, который несложно сделать своими руками, в домашних условиях.

Самый простой вариант модификации приборной панели — купить готовые детали тюнинга в сборе и установить их вместо стандартных, классических.Здесь, как правило, не возникает проблем, так как разборка и сборка приборной панели осуществляется одной отверткой, а все электрические разъемы настраиваются индивидуально, что значительно снижает вероятность неправильного подключения.

Другое дело, сделать совершенно уникальный тюнинг своими руками, потратив при этом минимум денег. Первый вариант — замена наклеек и стрелок на устройствах. Специальные наборы наклеек для ВАЗ 2107 имеются в продаже, вы можете ими воспользоваться.Но настоящие ценители разрабатывают наклейки индивидуального дизайна – это удорожает их стоимость, но гарантирует совершенно уникальный тюнинг панели приборов вашего ВАЗ 2107. Стрелки и штифты для их установки – довольно хрупкие детали, поэтому снимать и регулировать их нужно с особой осторожностью. Малейшая небрежность может привести к поломке, исправить которую своими руками будет невозможно.

Перед тем, как приступить к приклеиванию новых циферблатов, необходимо:

• Разметить границы существующей шкалы и установить стрелку в нулевое положение, чтобы исключить ошибку после приклеивания новой;
• Тщательно обезжирить поверхность панели приборов, чтобы предотвратить ее отслаивание;

Кроме того, совершенно неповторимый стиль приборной панели ВАЗ 2107 поможет создать установка новой светодиодной подсветки. Эта работа тоже не представляет особой сложности, и сделать ее самостоятельно не составит труда.

Существует два способа установки светодиодной подсветки:

• За шкалой в штатные места лампочек освещения;
• Подсветка всей панели приборов по периметру или сверху и снизу.

Первый способ более предпочтителен, так как обеспечивает эффективное освещение приборов, но при этом требует больших трудозатрат на разводку схемы подключения светодиодов своими руками. Устанавливаемые светодиоды должны быть рассчитаны на напряжение, соответствующее бортовой сети автомобиля – для ВАЗ 2107 оно составляет 12В.

В первом случае устанавливаются вместо штатных лампочек, с обязательным соблюдением полярности. Во втором светодиоды расставлены по периметру или вверху и внизу приборной панели, и для их подключения нужно удлинить штатные провода. Для фиксации в не предназначенных для этого местах можно использовать обычный быстросхватывающийся клей.

Помимо подсветки приборной панели, также заменяются лампочки в переключателях и кнопках управления ВАЗ 2107.В общем, самостоятельный тюнинг, как по объему, так и по качеству, ограничивается только фантазией автовладельца и суммой денег, которую он готов потратить.

Помимо мер, описанных выше, большинство автомобилистов вкладывают в понятие тюнинг дополнительный смысл – устанавливают на приборную панель новые устройства, которые, помимо эстетического, имеют и практическую пользу. К таким устройствам относятся:

• Эконометр;
• Бортовой компьютер;
• Цифровые часы;
• Датчик температуры салона/наружного воздуха и многое другое.

Вышеперечисленные устройства подобраны таким образом, чтобы органично вписаться в общий тюнинг панели приборов.

«Семерка» отличается довольно простым и скромным по современным меркам дизайном салона. Поэтому автовладельцы самостоятельно преображают салон автомобиля, делая его внешний вид индивидуальным и ярким. Тюнинг панели приборов ВАЗ 2107 – один из основных способов улучшить простой и неброский внешний вид «приборки» автомобиля.

Почему на «приборку» ВАЗ при тюнинге обращают особое внимание? Именно на приборную панель приковано внимание водителя и пассажиров во время поездки. Поэтому тюнинг салона следует начинать с доработки «приборки».

Направления тюнинга приборной панели ВАЗ 2107

Выбор метода доработки приборной панели зависит от материальных возможностей и навыков автовладельца.

1. Приобретите готовые тюнингованные детали и установите их вместо «родных».Это не самый оригинальный и дешевый, но простой способ преобразить внешний вид «приборки» и всего салона. Проблем с установкой купленных деталей не возникает: для работы нужна только отвертка, а разъемы выполнены таким образом, что ошибиться при подключении устройств практически невозможно. Также можно обратиться в специализированное тюнинг-ателье.
2. Приобретите дополнительные устройства (бортовой компьютер, эконометр, термометр, датчики приближения и другие) и органично впишите их в классический или тюнингованный дизайн приборной панели «семерки».
3. Тюнинг приборки ВАЗ 2107 своими руками путем установки подсветки, замены шкалы и стрелок на приборах. Вы можете сделать новую шкалу и стрелки прибора самостоятельно или купить уже готовые изделия. Этот ход открывает большие возможности для придания автомобилю индивидуальности, но требует определенных навыков и затрат времени.

Вне зависимости от того, собираетесь ли вы устанавливать готовые устройства или тюнинговать торпеду ВАЗ 2107 самостоятельно, начинать работу следует со снятия «приборки».

Демонтаж приборной панели ВАЗ 2107

«Приборка» ВАЗ 2107 — набор индикаторов и устройств, помогающих водителю следить за состоянием автомобиля, работоспособностью систем и скоростью. Также к приборной панели можно отнести панель управления отоплением и вентиляцией «семерки».

Перед снятием приборной панели обязательно отсоедините клемму заземления аккумуляторной батареи.

Дальнейшие операции выполняются в следующей последовательности:

Совет: для удобства сборки пометьте их маркером перед отсоединением разъемов.Это самый простой тюнинг панели ВАЗ 2107, который можно выполнить.

Установка готовых тюнингованных устройств на ВАЗ 2107

Размеры и разъемы готовых устройств, которые предназначены для модернизации «приборки», не отличаются от стандартных. Установить их не проблема.

Спутать подключение разъемов к устройствам практически невозможно — они отличаются по форме.

Единственное, на что следует обратить внимание, если вы выбрали этот способ тюнинга торпеды ВАЗ 2107, это трос спидометра.Он установлен в оплетке, чтобы его можно было свободно снимать в сторону салона. При этом он может выйти из зацепления с приводом спидометра на КПП. Если это произойдет, то после затяжки гайки крепления спидометра последний работать не будет. Чтобы не пришлось снова снимать приборную панель и устранять неисправность, перед установкой гайки следует проверить положение троса.

После присоединения троса остается закрутить винт крепления приборной панели и установить на место декоративные накладки и кнопку сброса дневного пробега.

Установка дополнительных устройств и индикаторов на ВАЗ 2107 торпеда зависит только от вкусов и фантазии автовладельца.

Самостоятельное изготовление стрелок и наклеек на приборы

Чтобы доработать приборную панель ВАЗ 2107, сделав тюнинг своими руками, вам потребуются новые стрелки и наклейки на приборы. Их можно купить, а можно разработать наклейки индивидуального дизайна самостоятельно. Последний сложнее и дороже, но гарантирует уникальный вид «приборки».

При замене наклеек и стрелок следует учитывать следующие моменты:

• стрелы и штифты, на которых они установлены, являются очень хрупкими изделиями. Неосторожные действия могут повредить не только устанавливаемые детали, но и сами устройства;
• Перед наклейкой новой шкалы поверхность следует тщательно очистить и обезжирить, иначе можно испортить внешний вид прибора;
• необходимо правильно выставить стрелки, иначе приборы будут показывать неверное значение.

Настройка приборов производится следующим образом:

• удалить устройства;
• осторожно снять стрелки приборов;
• удалить старые наклейки;
• очистить и обезжирить поверхность;
• наклеить новые наклейки;
• установить новые стрелки приборов.

Стрелки удобно снимать пассатижами. Тянуть нужно равномерно, чтобы не погнуть ось, на которую одевается стрелка.

Важно: стрелка спидометра лежит на ограничителе, установленном между 0 и 20 км/ч.Исходное положение стрелки без упора находится в положении меньше нуля. На задней части устройства находится механический диск, вращающийся вместе со стрелкой. Чтобы спидометр давал правильные показания после установки новой стрелки, необходимо нанести на диск и корпус спидометра метки, соответствующие положению стрелки на ограничителе. При установке новой стрелки нужно просто совместить положение меток на диске.

Установка светодиодной подсветки приборов ВАЗ 2107

Тюнинг приборной панели ВАЗ 2107 с изменением подсветки создаст неповторимый стиль интерьера «семерки» в темное время суток.Установить светодиодную подсветку несложно, для этого не нужны специальные навыки и приспособления.

Светодиоды могут быть размещены за приборной панелью, в местах установки штатных ламп или по периметру приборов.

Установка светодиодов вместо штатной подсветки обеспечивает лучшее освещение шкалы прибора, поэтому предпочтительнее. При подключении светодиодов обратите внимание на полярность, иначе подсветка работать не будет.

Так же стоит заменить штатную подсветку переключателей и кнопок управления на светодиоды того же цвета, что и на подсветке приборов. Это позволит создать единый, гармоничный стиль приборной панели.

10. (!) Основы преднамеренной практики с Александром Вазом, доктором философии • Подкаст • Интервью EWS • EWS

Осознанная практика 🔵  – это хорошо проверенная концепция (и инструмент!), о которой должны знать люди, желающие пройти Путь Мастерства при любом развитии навыков, и начать применять ее ценные принципы.

На первом интервью EWS наш основатель беседует с экспертом в этой области: Александром Вазом. У него замечательный опыт, EWS любит свою работу в области психотерапии, и мы не могли начать лучше!

Он работает с другими профессионалами в этой матрице Практики (в основном из мира психотерапии и для психотерапевтов) @DP_Institute

Во всяком случае, это не ограничивалось этим. Он также великолепный музыкант, учитель, оратор и постоянный ученик (любит биографии!) — послушайте вступление, чтобы правильно представить его.

Макет (сокращенно):
— Мы представляем тему с акцентом на спортсменов и студентов.
 – Мы просматриваем воображаемые сценарии и реальные примеры.
 – Мы расходимся по связанным и релевантным компонентам, чтобы хорошо заниматься практикой и идти к постепенным и устойчивым улучшениям
 – В основном выражая роль психологических и эмоциональных аспектов при представлении такого рода практик и процессов.

ПРИМЕЧАНИЕ. Из-за технических проблем первые 5–10 минут не записывались моим микрофоном.Таким образом, вы услышите ярко выраженный разрез, информирующий о времени включения. Вы должны слушать с лучшим качеством оттуда. ( Интро также было сделано совместно с Алексом)

_____

 Цитаты:

• «Проблема в том, что если вы тренируетесь, не думая об этом, это как бы полагаться на удачу, чтобы узнать, находитесь ли вы в этой оптимальной зоне или нет. Но если вы тренируетесь таким образом (…), тренировка поможет».
• «(…) так одно только повторение само по себе очень мало кому дает (…) что ты повторяешь, как, когда… это самое главное…»
• «Попытка мотивировать людей — опасное дело. (…) Я не думаю, что роль учителя состоит в том, чтобы полностью мотивировать и вовлечь своего ученика… (уточняет)»
• «Мы не хотим говорить людям: «Вы не должны себя критиковать» или «Вы не должны стыдиться (…) они просто почувствуют себя неподтвержденными. Самый эффективный способ — это…»
• «Преднамеренная практика — это столкновение с неудачей: вы должны чувствовать себя комфортно, когда терпите неудачу. И если вам комфортно только не показывать себя, вы, вероятно, не станете лучше».
• «Необходимым условием для того, чтобы стать лучше в чем-то, является (способность быть) плохим в чем-то»

_____

Временные метки:

• Начало (после гостевого интро) — 4:10
• Инструмент «Форма реакции» — 6:00
• Граница зоны комфорта (зона ближайшего развития) — 12:45
• Проблема с повторением на практике — 14:30
• Характеристики плохой тренировки — 21:47
• Проблема воли спортсменов + правильный подход — 26:35
• О фильме Whiplash — 33:10
• Принося мудрость Альберту Эллису — 48:36

Больше о:

Гостевой веб-сайт для услуг психотерапии, публичных выступлений и преднамеренной практики: alexandrevaz.ком

Кредиты (Атрибуция в соответствии с рекомендациями CC4.0) : Intro & Outro Song: Affection (отредактировано) Исполнитель: SappheirosИсточник: Link2SongLicense: Creative Commons

_____

— Мы ценим ваши отзывы: оставляя отзыв о EWS ЗДЕСЬ, вы автоматически помогаете нуждающимся спортсменам/подросткам (см. веб-сайт)
— Узнайте больше
— Сообщите нам свои мысли/вопросы по аудио – быстро и анонимно, если хотите 😉
— Мы даем вам советы, мы можем получить от вас несколько СОВЕТОВ?

Сверточные нейронные сети (СНС): концепции и приложения в фармакогеномике

Доступность источников, из которых можно извлечь данные, увеличивается (рис.3). Эти данные могут быть одномерными биологическими последовательностями, такими как последовательности ДНК, РНК или белков. Для малых молекул для представления химических структур можно использовать такие форматы данных, как SMILES, SMARTS, InChI, бинарные отпечатки пальцев. Кроме того, медицинская литература, включающая текстовые сводки о биомолекулярных мишенях и биомаркерах, также одномерна. Эти данные могут не давать сведений об анализе на основе прогнозирования, если они не обработаны в моделях машинного обучения. Точно так же модели машинного обучения неэффективны без включения соответствующих наборов данных.В следующем тексте рассматривается взаимосвязь между инструментами прогнозирования и обучающими данными. Мы ограничиваем подход CNN в качестве инструмента прогнозирования и одномерный ввод данных в качестве обучающих данных, чтобы обобщить приложения и улучшения в прогнозировании фармакогеномики за последние годы. Для биологических последовательностей мы разделили фармакогеномный анализ на предсказание SNP в ДНК, предсказание регуляторных областей в ДНК и предсказание сайтов связывания ДНК/РНК в белках; мы включили представление SMILES в прогнозирование взаимодействия лекарство-мишень и, наконец, медицинские тексты в предсказание взаимодействия лекарство-лекарство.Сводка всех моделей, описанных в этой статье, представлена ​​в таблице 1.

Таблица 1. Сводка моделей CNN, а также приложений и задач

Прогнозирование однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) в ДНК

Мутации в геномных последовательностях может привести к заболеваниям и расстройствам. Интерпретация этих признаков необходима для раннего выявления и лечения. Хотя проведение биологических экспериментов помогает записывать данные об экспрессии генов, которые делают выводы о фенотипах или функциях клеток, профилирование таких данных для болезней является сложным из-за количества и сложности генов.С другой стороны, характеристика SNP была сложной из-за проблем с чувствительностью, поскольку моделирование функций требует точного предсказания чувствительности к одному нуклеотиду [38, 40]. Другие недостатки, с которыми сталкиваются методы машинного обучения, включают недостаточность данных о редких заболеваниях, риск переобучения и трудности интеграции образцов данных с разных платформ экспрессии генов [40].

Хотя CNN еще предстоит смоделировать как идеальный метод, они продемонстрировали многообещающие результаты по сравнению с другими методами машинного обучения в определенных границах.Фреймворк для обнаружения некодирующих вариантов, DeepSEA, был разработан Чжоу и Троянской [38]. Он был обучен с использованием данных о связывании факторов транскрипции; положение некодирующего варианта диктовало его регуляторные свойства. Эта модель может предсказать влияние нескольких SNP на связывание фактора транскрипции. Например, мутация «C на T» в локусе SNP rs4784227 фактора транскрипции FOXA1 вызывает риск рака молочной железы, а SNP «T на C» в сайте связывания GATA1 может привести к α-талассемии.DeepVariant может обнаруживать варианты indel в данных полногеномного секвенирования (WGS) и данных экзома с высокой чувствительностью даже после ограничения набора обучающих данных [15]. В отличие от DeepVariant, который использует накопление считываний в качестве входных данных, NeuSomatic работает с базовой частотой в качестве входных данных и обнаруживает соматические мутации, используя выравнивание последовательностей, имея дело с большей точностью [39]. NeuSomatic может предсказать тип и длину соматической мутации и имеет структуру CNN, вдохновленную ResNet [72]. Обучение этой модели на двух реальных наборах данных WGS, состоящих из данных о хроническом лимфоцитарном лейкозе и меланоме, позволило получить точность теста  > 99% и  > 93% соответственно.Этот метод был предложен для более широкого применения при обнаружении соматических мутаций. Модель Бассета предсказала исследования геномных ассоциаций (GWAS) SNP, которые, вероятно, влияли на локальную экспрессию генов [73]. SNP из GWAS были протестированы для интерпретации связи между генетикой и биполярным расстройством [74]. Эта модель дала точность теста 91% и 92% и выявила 137 и 407 генов риска, соответственно, из которых 22 и 51 ген, как сообщалось, были связаны с возникновением биполярного расстройства.

Алгоритм многозадачного глубокого обучения (MTDL) был разработан для классификации различных видов рака [40]. Недостаточность наборов данных в алгоритмах обучения была решена с использованием различных признаков генов для одной и той же выходной метки в двух наборах оценок (например, задачи, связанные с острым миелоидным лейкозом в качестве результата). Всего было использовано 12 заданий для оценки его показателей, таких как аденокарцинома, семинома, рак яичников и рак толстой кишки. Фэн и др. разработал двухпотоковую модель, которая одновременно вводит две карты SNP [41].Эти карты были получены путем преобразования интенсивностей SNP на каждом участке в хромосомные карты SNP на начальных этапах. Эта модель была создана для прогнозирования синдрома Дауна человека, расстройства интеллектуальной нестабильности, вызванного геномными дупликациями и дисбалансом доз, например, микродупликациями на хромосоме 21 человека.

Прогнозирование регуляторных областей в ДНК сложные заболевания; следовательно, жизненно важно понимать компоненты последовательности ДНК, которые составляют регуляцию генов.Прогнозирование точного воздействия таких регуляторных элементов может способствовать прогрессу в диагностике и медицине. Такая модель, как Deopen, может считывать регуляторные коды ДНК и предсказывать доступность хроматина [42]. Энхансеры представляют собой последовательности, далекие от промоторов, которые связываются с факторами транскрипции, чтобы регулировать экспрессию генов, и они имеют решающее значение для здорового клеточного развития и дифференцировки [75]. Изучение энхансеров в последовательностях привело к многослойной модели CNN, предложенной Chen et al. для захвата сложных последовательностей [43].Тестирование этой модели для разных видов показало сохранение этих последовательностей у млекопитающих. Другими моделями CNN, которые предсказывают сайты энхансеров, являются iEnhancer-ECNN [44], BiREN [45] и DeepEnhancer [46]. Алгоритм ансамблевого обучения, состоящий из CNN, был представлен в iEnhancer-ECNN. Анализ площади под кривой рабочих характеристик приемника (AUC) и точности зафиксировал более высокие значения в iEnhancer-ECNN, чем в таких моделях, как iEnhancer-2L, EnhancerPred и iEnhancer-EL. Элементы энхансера обучения с использованием BiRen достигли высокой эффективности с AUC, равным 0.945. DeepEnhancer использовал наборы данных из проектов ENCODE и FANTOM5 [76]. FANTOM5 состоял из карт промоторов и энхансеров, присутствующих в клеточных линиях млекопитающих. По сравнению с машиной опорных векторов k-mer с пробелами (gkmSVM) DeepEnhancer имел более высокую AUC [46].

Промоторы — это участки ДНК, обозначающие начало транскрипции. Принцип дизайна этих сайтов сложен, поскольку промоторы являются геноспецифичными, и, следовательно, их разнообразие велико [77]. Разработка вычислительных методов здесь является сложной задачей, поскольку функции последовательности из других моделей трудно использовать повторно.Несколько моделей распознавания промоторных сайтов включают CNProm [47], PromID [78] и DeeReCT-PromID [48]. CNNProm изучали с использованием хорошо известного класса промоторов, промоторов ТАТА для эукариот, присутствующих в базе данных промоторов EPDnew, и промоторов подкласса sigma70 E.coli . PromID был улучшенной моделью, которая превзошла свою предшественницу, CNProm, с улучшенной точностью и меньшей вероятностью ложных срабатываний. DeeReCT-PromID оказал аналогичное влияние и мог изучать более длинные последовательности с большей точностью.

Принцип «достижения изобилия мРНК за счет распознавания промоторных последовательностей в геноме» был применен для предсказания уровней экспрессии генов по заданной последовательности [36]. Несколько других попыток зарегистрировать экспрессию гена, сопоставив ее со связыванием фактора транскрипции, привели к проблемам с ожидаемым связыванием мотива и идентификацией сигнала, что привело к маловероятным ложным срабатываниям и шуму в данных секвенирования [79]. Построение новых моделей, не использующих такие экспериментальные данные, могло бы дать многообещающие механизмы регуляции.В этом эксперименте модель точно предсказала уровни экспрессии в генах клеток, таких как лимфобластоидные клетки человека и клетки миелогенного лейкоза человека. На основе этой модели было подсчитано, что промоторные последовательности вызывают  ~ 50% изменчивости экспрессии генов. Однако другие аспекты экспрессии генов остаются неоткрытыми, что может привести к созданию более сложных моделей в будущем.

Предсказание участков связывания ДНК/РНК в белках

Белки, связывающие ДНК, — это белки, имеющие общий домен связывания ДНК, но дискретную последовательность аминокислот, обеспечивающую специфические связывающие взаимодействия.Примеры ДНК-связывающих белков включают ДНК-полимеразы, коактиваторы, корепрессоры. Они участвуют в нескольких аспектах генетической активности, таких как упаковка, репликация, транскрипция, репарация [80]. Связанные с ними генетические сигналы играют решающую роль в экспрессии генов и развитии клеток, что напрямую связано с исследованиями сложных признаков, патогенеза заболеваний и характеристик таких заболеваний, как диабет и рак [81].

Модели CNN для идентификации специфических белковых последовательностей, которые связываются с ДНК, были разработаны вместе с наборами данных, такими как PDNA-543, PDNA-224 и PDNA-316, и использовались для оценки характеристик позиционно-специфичной матрицы оценки признаков (PSSM). , однократное кодирование и предсказанная доступность растворителя (PSA), которые в дальнейшем приводят к предсказанию сайтов связывания ДНК в белке [49].Эта модель представляла собой комбинацию функций CNN с ансамблевым классификатором. Он получил точность теста  ~ 90% на наборе данных PDNA-543, что выше, чем в моделях предикторов TargetDNA и EC-RUS (WSRC). DeepBind был усовершенствованием традиционных оценочных матриц и мог применяться к микрочипам и данным секвенирования [50]. Его оценивали вместе с 26 другими алгоритмами [82] с использованием данных белкового связывающего микрочипа (PBM), и он превзошел все другие методы. Хитрость в представлении лучших алгоритмов обучения состоит в том, чтобы следовать двум приведенным правилам; обратную комплементацию цепи ДНК и обращение с ней как с другим образцом; удлиняя последовательность ДНК и разделяя ее на три более короткие последовательности [81].Это позволило модели CNN лучше понять отношения между последовательностями двухцепочечной ДНК. Эта стратегия применялась к DeepSea [38], и модели DeepBind значительно улучшили AUC. DeepDBP-CNN, вдохновленный ранее существовавшими моделями, такими как DeepBind, использовал предварительно изученное встраивание и CNN и обеспечил точность обучения  > 94%, чувствительность 0,83 и AUC 0,986 [28]. Сравнение DeepDBP-CNN с другими методами показало многообещающие результаты. Модель классификатора SVM, такая как HMMBinder, обученная с тем же набором данных (PDB 1075), имела точность   ~   86%, чувствительность 0.87 и AUC 0,902, в то время как другие модели на основе SVM работали еще хуже. Полезной тактикой для предотвращения переобучения является добавление отсева в конце [83]; этот слой будет случайным образом отбрасывать узел со всеми его соединениями и, следовательно, заставит модель в некоторой степени предотвратить переоснащение.

РНК-связывающие белки (RBP) могут распознавать определенные последовательности РНК или структурные паттерны, называемые мотивами. Подобно DBP, такие белки играют роль в стабильности, клеточной локализации и транспорте, одновременно участвуя в ко-транскрипционных и пост-транскрипционных процессах [84].Эти мотивы, наблюдаемые в RBP, могут быть получены с помощью анализов in vitro, таких как RNAcomplete [85]. Поскольку такие результаты различаются в разных клеточных средах и оказываются дорогостоящими, альтернативный подход заключался в применении глубокого обучения, в частности, моделей CNN, использующих первичную последовательность РНК в качестве входных данных для обнаружения мотивов связывания последовательности. Глобальный модуль iDeepE, iDeepE-G, использовал методы, аналогичные тем, что используются в DeepBind, и заполнение РНК (расширение всех последовательностей до самой длинной доступной последовательности) [52]. Этот модуль, оцененный с помощью набора данных RBP-24, имел среднее значение AUC, равное 0.931, и эта модель работала лучше других предикторов последовательности, таких как ResNet-E, Pse-SVM, GraphPlot и Deepnet-rbp. Недостатком iDeepE является то, что для создания лучшей модели требуется более широкий набор обучающих данных. iDeepS, предложенный тем же автором [52], ввел идентификацию структурных связывающих мотивов. Примеры обнаружения связывания с использованием структурных мотивов с помощью iDeepS включают предпочтение связывания белка hnRNPC со структурами шпилек, богатых U, и взаимодействие белка PUM2 с богатыми UA областями стебля.Модель CNN для прогнозирования взаимодействий энхансер-промотор была разработана Zhuang et al. (2019) и работала так же эффективно, как сложный гибрид модели CNN-RNN [86]. Argonaute представляет собой белок, связанный с посттранскрипционным регулятором микроРНК (miRNA) с образованием РНК-индуцированных комплексов молчания (RISC) [53]. Этот комплекс приводит к подавлению экспрессии генов и дальнейшей деградации мРНК. Макгири и др. подошли к этому предсказанию репрессии с помощью модели, которая рассчитала значения K _d для сайтов связывания miRNA [87].

Прогнозирование взаимодействия лекарство-мишень

Прогнозирование взаимодействия лекарство-мишень (DTI) необходимо для оценки взаимодействий, которые приводят к идентификации новых лекарств-кандидатов и могут предсказывать многие из их побочных эффектов до начала клинических испытаний [88]. Методы in vivo дороги, и, хотя они точны, предложение исследовать все возможные лекарственные средства для мишени на практике кажется трудоемким и утомительным [89]. Более того, очень немногие соединения, над которыми работали, попадают на рынок в качестве лекарств после многих лет исследований, в основном из-за их токсичности и побочных эффектов.Методы in silico могут намного быстрее сузить круг этих химических веществ, что позволяет экспериментально работать только с кандидатами из короткого списка. Фундаментальная идея открытия лекарств заключается в том, что химически сходные лекарства взаимодействуют с аналогичными белковыми мишенями в нашей системе. Эти прогнозы могут быть сделаны на основе трехмерных белковых структур с использованием таких методов, как подходы на основе лигандов, которые сканируют базы данных для идентификации существующих лигандов, подходящих для данного рецептора [90], или подходы на основе структур, которые строят лиганды из небольших фрагментов молекул, связывающихся с разными местами. в целевом сайте [91].В любом из этих методов требуется получение трехмерной структуры белка и лиганда, и это сложная задача, поскольку она выполняется с помощью напряженных экспериментальных процессов. Следовательно, необходимо перейти к простым и понятным методам, использующим одномерные данные, такие как последовательности ДНК/белков и представления малых молекул с помощью SMILES. Эти наборы данных могут быть получены из таких баз данных, как DrugBank, ChEMBL, STITCH, KEGG, для вычислительного анализа для выявления взаимосвязей между взаимодействиями лекарств и белков-мишеней и, следовательно, для прогнозирования новых лекарств, которые изменяют состояние болезни, регулируя активность молекулярных мишеней [56]. .Проверка таких целей следует за использованием моделей in vitro или in vivo.

Модели, определяющие взаимосвязь между физико-химическими свойствами химических структур и их биологической активностью, называются моделями количественного соотношения структура-активность (QSAR) и предназначены для моделирования дескрипторов лигандов [92, 93]. Здесь мы отвлекаемся от геномных последовательностей и пытаемся моделировать химические соединения. Ху и др. использовали строки SMILES в качестве входных данных для модели CNN для точного предсказания QSAR [54] и применили ее к FP2VEC [55].Этот метод глубокого обучения может идентифицировать активность малых молекул. Молекулярный анализатор FP2VEC сопоставляет химические соединения с естественным языком, а выходные данные далее обрабатываются в модели CNN QSAR для классификации предложений, созданных с использованием обработки естественного языка (NLP). Известно, что преобразование SMILES в графическое представление используется для предсказания отношений между лигандом и белком [94]. Эта модель использует белковые последовательности для построения структуры взаимодействия между химическим и геномным пространством; следовательно, для прогнозирования доступен большой объем данных.DeepACTION — это модель прогнозирования DTI, в которой используется новый метод, называемый балансировкой большинства и меньшинства экземпляров (MMIB), для балансировки набора данных между взаимодействующими и невзаимодействующими парами для улучшенного прогнозирования [56]. Моделирование QSAR с использованием SMILES использовалось и в других моделях [57]. Протеохемометрия (PCM) является расширением моделей QSAR и использует как дескрипторы лиганда, так и дескрипторы мишени для тщательного сопоставления соединений с мишенями [78]. В отличие от QSAR, PCM представляет собой многоцелевую обработку и может объединять связанные цели для увеличения объема данных, доступных для обучения.При такой концепции он может предоставить информацию об измерениях аффинности связывания, таких как константа ингибирования ( K _i ), константа диссоциации ( K _d ) или полумаксимальная ингибирующая концентрация ( ИК ₅₀ ). DeepDTA — это модель PCM, разработанная с помощью данных только о белке и строках SMILES [58]. Блоки CNN работали лучше, когда подавалась комбинация последовательностей. FRnet-DTI состоит из двух архитектур: FRnet-Encode и FRnet-Predict.Первый извлекает 4096 признаков из стандартных наборов данных, таких как DrugBank, BRENDA и KEGG; последний классифицирует взаимодействия лекарство-белок, полученные на основе признаков [59].

Оценка целей по чувствительности к соединениям проводилась с использованием значений IC ₅₀ , представленных в базе данных Genomics of Drug Sensitivity in Cancer (GDSC) [60]. Используя SMILES вместе с этими данными, можно прогнозировать значения IC ₅₀ для любого данного соединения. Эта модель фокусируется на поиске генов, наиболее важных для предсказания чувствительности к лекарствам, а не на полном наборе генов.DeepPurpose — еще одна модель, предсказывающая значения IC ₅₀ [61]. Еще одним важным свойством, учитываемым при разработке лекарств, является растворимость соединения в воде. Его можно предсказать с помощью кодов SMILES, которые анализируются на модели CNN ConvS2S [62]. Модель DeepConv-DTI может предсказывать взаимодействие лекарственного средства с мишенью, используя только белковые последовательности, и выявляет локальные паттерны, важные для сайтов связывания мишени [63]. DTI-CNN, сетевой подход, строит гетерогенную сеть, используя данные из различных источников, связанных с лекарствами и белками, для дальнейшей идентификации DTI с потенциальным использованием, распространяющимся на взаимодействия между лекарствами и белками [64].

Прогнозирование лекарственного взаимодействия

В практических обстоятельствах более чем одно лекарство может присутствовать в нашем организме или потребляться одновременно для достижения эффекта, отличного от того, который производится от отдельных лекарств; эффекты, которые могут быть положительными (синергическими), такими как более высокая эффективность и снижение лекарственной устойчивости, или отрицательными (антагонистическими), такими как повышенная токсичность, ингибирующие и другие побочные эффекты. Лекарственные взаимодействия (DDI) объясняют такое поведение и обычно оцениваются во время клинических испытаний для регистрации таких реакций.В задаче DDI и предмет, который нужно изучить, и объект, который нужно распознать, — это наркотик, и методы, основанные на машинном обучении, рассматривают эту классификацию в двух разделах: есть ли взаимодействие? Если да, то тип взаимодействия.

DrugBank — крупная база данных, содержащая данные DDI [95]. MEDLINE — еще одна важная база данных, состоящая из биомедицинской литературы, в которой упоминаются такие взаимодействия. Медицинский работник, который хочет определить взаимодействие между любыми двумя лекарственными соединениями, должен прочитать всю литературу, прежде чем прийти к выводу.Еще одним недостатком таких данных является то, что эту информацию нельзя использовать непосредственно в качестве входных данных для программного обеспечения, поскольку они представлены в литературе в виде неструктурированных данных. Извлечение DDI из такого текста вручную является сложной задачей, поскольку эти базы данных огромны. NLP — это исследование, которое включает использование искусственного интеллекта для извлечения значимой информации из человеческого языка и может сочетаться с традиционными моделями машинного обучения [96], но они оказываются громоздкими, поскольку требуют ручного извлечения признаков [97].Методы машинного обучения, использующие текстовое обучение, обнаруживают слова вокруг целевых лекарств и оценивают задачи, определяя точные слова вокруг лекарств, когда это необходимо для прогнозирования неизвестных взаимодействий. Однако эти модели не могут распознавать синонимы из остального словаря без каких-либо внешних признаков и считают, что каждое слово имеет уникальное определение [98]. Следовательно, необходимо применять NLP с архитектурами глубокого обучения, которые могут автоматически обнаруживать важные функции.

Модели с НЛП-подходом к задачам DDI должны пройти два этапа: распознать лекарство и извлечь отношение.Один такой метод с использованием НЛП был предложен Liu et al. это сгенерировало матрицы конкатенации позиций и словесных вложений интересующих наркотиков, которые появляются в литературных предложениях [65]. CNN удобны для разработки решений в этом контексте, поскольку они могут находить и отслеживать позиции наркотиков в предложениях. Затем можно создать набор данных DDI, используя пары лекарств, указанные в одном предложении, например, «Когда лекарство 1 вводится в сочетании с лекарством 2». Корпус DDI, разработанный для задачи DDI Extraction 2013 [99], предназначен для обучения и оценки нескольких моделей DDI и состоит из пар DDI, классифицированных по пяти категориям: механизм (фармакокинетика), совет (рекомендация по DDI), эффект (фармакодинамический), взаимодействие (Int) и false (без взаимодействия).Int — это предложение, содержащее пару DDI и никакой другой дополнительной информации, а false представляет пары наркотиков, между которыми нет взаимодействия. Многоканальная CNN была разработана Quan et al. которые назначали разные каналы для разных аспектов встраивания слов [66].

Позже модели CNN зафиксировали аналогичную точность без использования каких-либо внешних признаков для классификации, как продемонстрировали Suárez-Paniagua et al. [67]. Это был значительный шаг вперед, поскольку теперь глубокое обучение можно было представить тем, чем оно должно быть: моделью функционального обучения.Двухэтапный процесс обучения, разработанный той же группой, запускал набор данных eHealth-KD [100] и применял двунаправленную долговременную кратковременную память (Bi-LSTM) для распознавания лекарств и CNN для извлечения отношений [68]. Более поздняя архитектура, разработанная после НЛП, представляет собой гибридную модель двунаправленной рекуррентной сверточной нейронной сети (SGRU-CNN) [69], в то время как другие гибридные модели включают графовую свёрточную сеть на основе внимания (AGCN) в 2020 году Парком и др. [70] и рекуррентной гибридной сверточной нейронной сети (RHCNN) в 2019 г. Sun et al.[71]. Хотя CNN и глубокое обучение демонстрируют огромные перспективы, одним из ограничений, связанных с моделями глубокого обучения, является то, что они следуют подходу «черного ящика» [101], что означает, что по полученным результатам трудно понять механизм.

ВАЗ::2106: Карбюратор

5. Карбюратор

Схема карбюратора Озон

Описание конструкции

На автомобиль ВАЗ-2106 теперь устанавливается карбюратор Озон модели ДААЗ 2107-1107010-20.На автомобиле ВАЗ-21065 используется карбюратор ДААЗ 21053-1107010 (модель на базе семейства карбюраторов Солекс).

Карбюратор Озон – эмульсионного типа, двухкамерный, с падающим потоком. Имеет одну уравновешенную поплавковую камеру, две основные дозирующие системы, концентрирующее устройство (эконостат) во второй камере, автономную систему холостого хода, переходные системы первой и второй камер, диафрагменный ускорительный насос с распылителем в первой камере. , электромагнитный запорный клапан системы холостого хода, золотниковое устройство отвода картерных газов в задросельное пространство, пневматический привод дроссельной заслонки второй камеры.Управление воздушной заслонкой первой камеры – ручное, с тросовым приводом. После пуска двигателя заслонка автоматически приоткрывается пусковым устройством диафрагменного типа под действием разрежения во впускном трубопроводе. Карбюратор снабжен штуцером выбора разрежения для управления регулятором опережения зажигания.

Топливо подается в карбюратор через сетчатый фильтр и игольчатый клапан. Клапан механически связан с поплавком и поддерживает определенный уровень топлива в поплавковой камере.

Из поплавковой камеры топливо поступает через главные топливные жиклеры (первая и вторая камеры) в эмульсионные колодцы и эмульсионные трубки, где смешивается с воздухом, поступающим через главные воздушные жиклеры. Топливно-воздушная эмульсия поступает через форсунки в малый и большой диффузоры карбюратора.

Топливный канал системы холостого хода перекрывается электромагнитным запорным клапаном после выключения зажигания. Нормальное состояние клапана под напряжением – открыто.

Система холостого хода отбирает топливо из эмульсионного колодца первой камеры.Топливо проходит через жиклер холостого хода, конструктивно объединенный с электромагнитным запорным клапаном, и смешивается с воздухом, поступающим через жиклер холостого хода и отверстие переходной системы первой камеры. Образовавшаяся эмульсия по двум каналам (один имеет калиброванное отверстие – жиклер, а другой – регулировочный винт, иначе называемый винтом качества) подается в отверстие, перекрытое иглой винта количества, где дополнительно смешивается с воздухом и далее через отверстие эмульсии попадает во впускной трубопровод.Состав смеси регулируется винтом качества.

При частичном открытии поворотных затворов (до включения в работу основной дозирующей системы) топливно-воздушная смесь поступает в камеры через переходные отверстия – по два в каждой камере.

Эконостат обеспечивает подачу топлива непосредственно из поплавковой камеры в распылитель эконостата, который расположен в диффузоре второй камеры. Эконостат включается в работу на режимах максимальной мощности, дополнительно обогащая рабочую смесь.

Ускорительный насос – диафрагменного типа, с механическим приводом от оси дроссельной заслонки первой камеры. При резком открытии заслонки порция топлива впрыскивается через распылитель в первую камеру карбюратора, обогащая смесь. Насос поставляется с шаровыми кранами. Один клапан – обратный – расположен в канале, соединяющем поплавковую камеру с полостью ускорительного насоса. Он открывается при заполнении полости насоса топливом и закрывается при нагнетании топлива диафрагмой.Другой клапан расположен в распылителе. Он открывается под давлением нагнетаемого топлива и закрывается под действием веса шара, как только прекращается подача топлива. Избыточное топливо при нагнетании стекает через перепускной жиклер обратно в поплавковую камеру.

Производительность насоса зависит от профиля кулачка, диаметра отверстия перепускного жиклера, профиля и длины регулировочной иглы в канале перепускного жиклера. В процессе эксплуатации ускорительный насос регулировке не подлежит.

Пусковое устройство состоит из воздушной заслонки, рычага управления воздушной заслонкой, телескопической тяги, тяги привода дроссельной заслонки, диафрагменного механизма и привода управления дроссельной заслонкой. При оттягивании ручки привода («подсоса») с места водителя воздушная заслонка закрывается, а дроссельная заслонка первой камеры приоткрывается на 0,7–0,8 мм (пусковой зазор). При первых вспышках разрежение за дроссельной заслонкой передается в цилиндры на диафрагму, которая через шток и тягу приоткрывает воздушную заслонку.Максимальная величина открытия заслонки регулируется упорным винтом диафрагмы, расположенным под навинчивающейся крышкой.

ВНИМАНИЕ! Все работы по ремонту и регулировке карбюратора, связанные с его частичной разборкой, а потому требующие чистоты и аккуратности, рекомендуем производить на снятом карбюраторе. Перед разборкой карбюратора небольшой жесткой щеткой с невыпадающим ворсом, смоченным бензином или керосином, удаляем грязь с его внешней поверхности.Для этого удобно использовать аэрозольный баллончик «для промывки карбюратора» со специальным составом. Используемые тряпки должны быть чистыми и не оставлять ворсинок и нитей.

Тарировочные данные карбюратора ДААЗ 2107-1107010-20

Параметры	Первая камера	Вторая камера
Диаметры, мм:
	22	25
	28	36
	1,12	1,5
	1,5	1,5
	0,5	0,6
	1,7	0,7
	–	1,5
	–	1,2
эмульсионный жиклер эконостата	–	1,5
Воздушный жиклер пускового устройства	0,7	–
Жиклер пневмопривода дроссельной заслонки	1,5	1,2
отверстия распылителя ускорительного насоса	0,4	–
перепускной жиклер ускорительного насоса	0,4	–
Подача ускорительного насоса на 10 полных ходов, см 3	7±25%	–
Номер калибровки распылителя смеси	3,5	4,5
Номер калибровки эмульсионной трубки	Ф15	Ф15
Расстояние поплавка от крышки карбюратора с прокладкой, мм	6,5±0,25
Зазоры в воротах для регулировки пускового устройства, мм:
	5,5±0,25
	0,9–1,0

Настройка искусственного интеллекта на разработку de novo ретиноидных модуляторов Х-рецепторов на основе натуральных продуктов

Подготовка данных

Информация о солях и стереохимии была удалена, а структуры соединений были представлены в их нейтральном состоянии.Молекулярные структуры были представлены в виде строк упрощенной системы молекулярного ввода (SMILES) и преобразованы в канонические SMILES с помощью RDKit (Химическая информатика с открытым исходным кодом; http://www.rdkit.org ).

Генеративная модель машинного обучения

Все скрипты написаны на Python (версия 3.6) с использованием RDKit (www.rdkit.org), Tensorflow (v1.2, www.tensorflow.org) и Keras (v2.0, https: //keras.io) пакеты. Модель глубокого обучения генеративной долговременной кратковременной памяти, обученная на биоактивных молекулах из базы данных ChEMBL (ChEMBL22, pAffinity > 6), использовалась как ранее опубликованная ¹² .Модель была повторно обучена (этап тонкой настройки) с использованием наборов данных, содержащих валереновую кислоту (набор 1), валереновую кислоту, друпанин и гонокиол (набор 2) или валереновую кислоту, друпанин, гонокиол, бигеловин, изопимаровую кислоту и дегидроабиетиновую кислоту (набор 3). ). Для этого шага тонкой настройки модель обучалась в течение пяти эпох. 1000 строк SMILES были отобраны из точно настроенных моделей с температурой softmax 0,75 (см. номер ¹² для получения технических подробностей).

Поиск сходства с помощью целостных молекулярных дескрипторов

Сходство между уникальными и достоверными молекулами, сгенерированными генеративной моделью, и наборами известных RXR-активов было рассчитано с использованием взвешенных целостных дескрипторов локализации атомов и формы объектов (WHALES) ²¹ .Молекулярная геометрия была оптимизирована с использованием силового поля MMFF94 ³¹ с 1000 итераций и 10 исходных конформеров для каждого соединения с RDKit; для расчета дескриптора была выбрана минимальная энергетическая конформация. Трехмерные дескрипторы WHALES были рассчитаны с помощью бесплатного программного обеспечения (https://github.com/grisoniFr/whales_descriptors) с использованием частичной оплаты Gasteiger-Marsili ³² в качестве схемы взвешивания. Структуры запроса RXR связывающих веществ были получены из ChEMBL как 12 наиболее сильнодействующих аннотированных лигандов в соответствии с EC ₅₀ /K _i .Для каждого набора данных каждое соединение по очереди использовалось в качестве запроса для выполнения ранжирования сходства на основе их евклидова расстояния в значениях дескриптора WHALES, нормализованных по Гауссу. Результаты отдельных виртуальных скринингов по каждому соединению были объединены по сумме их обратных рангов ³³ . Эталонные соединения WHALES можно найти в дополнительных данных 1.

Консенсус самоорганизующейся карты для предсказания целей

Биологическая активность всех уникальных и достоверных молекул, созданных с помощью генеративной модели, была предсказана с помощью программного обеспечения SPiDER ²⁰ .Дескрипторы CATS2 ³⁴ и двумерные дескрипторы MOE (The Chemical Computing Group, Монреаль, Канада; MOE2016.08; узел KNIME дескрипторов MOE; силовое поле: MMFF94*) были рассчитаны для всех сгенерированных молекул. Результаты SPiDER были отфильтрованы для соединений, которые, по прогнозам, будут активны в отношении RXR с p  < 0,1. Кроме того, для всех шаблонов и дизайнов было получено количество мишеней с прогнозируемой активностью ( p  < 0,05) (рис. 5).

Каркас и анализ подобия

Молекулярные и графовые каркасы были рассчитаны с помощью узла «RDKit Find Murcko Scaffolds» в KNIME ³⁵ (v.3.6.1). Контрольные отпечатки были рассчитаны с помощью узла «RDKit Fingerprints» в KNIME ³⁵ v 3.6.1 с настройками по умолчанию (AtomPairs: NumBits = 1024, MinPathLength = 1, MaxPathLength = 30, UseChirality = FumitsBalse; RootedFingerprint = 1024, MinPathLength = 1, MaxPathLength = 7, UseChirality = False, RootedFingerprint = False; Morgan: NumBits = 1024; Radius = 2; UseChirality = False; MACCS: UseChirality ).

Анализы гибридных репортерных генов для активации RXRα/β/γ

Анализы гибридных репортерных генов Gal4 проводили, как описано ранее ^25,26 . Плазмиды : Плазмиды рецептора слияния Gal4 pFA-CMV-hRXRα-LBD ²⁶ , pFA-CMV-hRXRβ-LBD ²⁶ и pFA-CMV-hRXRγ-LBD ²⁶ , кодирующие шарнирную область и лиганд связывающий домен (LBD) канонической изоформы соответствующего ядерного рецептора сообщалось ранее. pFR-Luc (Stratagene) использовали в качестве репортерной плазмиды и pRL-SV40 (Promega) для нормализации эффективности трансфекции и роста клеток. Процедура анализа: клетки HEK293T выращивали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы, дополненной 10% FCS, пируватом натрия (1 мМ), пенициллином (100 ЕД/мл) и стрептомицином (100 мкг/мл) при 37°C и 5% CO ₂ .За день до трансфекции клетки HEK293T высевали в 96-луночные планшеты (2,5·10 ⁴ клеток/лунку). Перед трансфекцией среду меняли на Opti-MEM без добавок. Транзиторную трансфекцию проводили с использованием реагента Lipofectamine LTX (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя с pFR-Luc (Stratagene), pRL-SV40 (Promega) и pFA-CMV-hRXR-LBD. Через 5 ч после трансфекции среду меняли на среду Opti-MEM с добавлением пенициллина (100 ЕД/мл), стрептомицина (100 мкг/мл), теперь дополнительно содержащую 0.1% ДМСО и соответствующее тестируемое соединение или только 0,1% ДМСО в качестве необработанного контроля или бексаротен (1  мкМ) и 0,1% ДМСО в качестве положительного контроля. Каждую концентрацию тестировали в двух экземплярах, и каждый эксперимент независимо повторяли не менее двух раз. После инкубации в течение ночи (12-14 часов) с тестируемыми соединениями клетки анализировали на активность люциферазы с использованием системы анализа люциферазы Dual-Glo™ (Promega) в соответствии с протоколом производителя. Люминесценцию измеряли на люминометре Infinite M200 (Tecan Deutschland GmbH).Нормализация эффективности трансфекции и роста клеток проводилась путем деления данных люциферазы светлячка на данные люциферазы renilla и умножения значения на 1000, что приводило к относительным световым единицам (RLU). Активацию кратности получали путем деления средней RLU испытуемого соединения в соответствующей концентрации на среднюю RLU необработанного контроля. Все гибридные анализы были проверены с использованием эталонного агониста бексаротена, который дал значения EC ₅₀ в соответствии с литературными данными.

Общие химические методы

Все химические вещества и растворители были химически чистыми и использовались без дополнительной очистки, если не указано иное.Все реакции проводили в сушильной посуде в атмосфере аргона и в абсолютных растворителях. Спектры ЯМР записывали на спектрометре Bruker AV 400 (Bruker Corporation, Billerica, MA, USA). Химические сдвиги (δ) приведены в миллионных долях относительно ТМС в качестве эталона; приблизительные константы связи (J) указаны в герцах (Гц). Масс-спектры были получены на приборе Advion Express CMS (Advion, Ithaka, NY, USA), оборудованном устройством для экспресс-ТСХ Advion plate (Advion) ​​с использованием ионизации электрораспылением (ESI).Масс-спектры высокого разрешения записывали на приборе Bruker maXis ESI-Qq-TOF-MS (Bruker). Температуры плавления определяли на приборе Büchi M-560 (Büchi Labortechnik, Flawil, Швейцария). Чистоту соединения анализировали с помощью ВЭЖХ на VWR LaChrom ULTRA HPLC (VWR, Radnor, PA, USA), оснащенной колонкой MN EC150/3 NUCLEODUR C18 HTec 5 µ (Machery-Nagel, Düren, Germany) с использованием градиента (H ₂ O/MeCN 95:5 + 0,1% муравьиной кислоты изократируют в течение 5 мин до H ₂ O/MeCN 5:95 + 0,1% муравьиной кислоты после дополнительных 25 мин и H ₂ O/MeCN 5:95 + 0.1% изократическая муравьиная кислота в течение дополнительных 5 мин) при скорости потока 0,5 мл/мин и УФ-детектировании при 245 нм и 280 нм. Все конечные соединения для биологической оценки имели чистоту  > 95% (площадь под кривой для пиков UV ₂₄₅ и UV ₂₈₀ ).

Синтез 7-((2-(о-толилокси)этил)амино)гептановой кислоты ( 7 ): 2-(2-метилфенокси)этиламин ( 11 , 76 мг, 0,50 ммоль, экв., 1,00 эмоль ) и 7-бромгептановой кислоты ( 12 , 105 мг, 0,50 ммоль, 1.00 экв) растворяли в ДМФА (абс., ​​1,0 мл) и добавляли триэтиламин (абс., ​​0,2 мл). Смесь перемешивали под микроволновым излучением при 80°С в течение 120 мин. Затем растворители выпаривали и неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с использованием метиленхлорида/метанола (9:1) в качестве подвижной фазы. Затем продукт растворяли в метиленхлориде и добавляли соляную кислоту (4 М в диоксане, 0,25 мл) для осаждения гидрохлорида в виде бесцветного твердого вещества (28 мг, 18%). Т.пл. (гидрохлорид): >400 °C. ¹ H ЯМР (400 МГц, D ₂ O) δ = 1,23–1,38 (м, 5H), 1,47–1,58 (м, 2H), 1,61–1,73 (м, 2H), 2,17 (с, 3H) , 2,24–2,34 (м, 2Н), 3,07–3,13 (м, 2Н), 3,44–3,49 (м, 2Н), 4,23–4,28 (м, 2Н), 6,90–6,98 (м, 2Н), 7,15–7,23 (м м, 2H) м.д. ¹³ C ЯМР (101 МГц, D ₂ o) Δ = 11.88, 25.15, 25.23, 27.56, 33,48, 47.63, 48.04, 52.07, 70.96, 112.09, 131.02, 131.23, 143.00, 155.27, 166,48 ч / млн. HRMS (ESI+): m/z 280,1907 рассчитано для C ₁₆ H ₂₆ NO ₃ , найдено 280.1907 г. ([M + H] ⁺ ).

Синтез 6 — (( Tert -бутиметилсилил) Oxy) Quinazolin-4 (3 H ) -one ( 14 ): 6-гидроксикиназолин-4 (3 H )-он ( 13 , 1,00 г, 6,17 ммоль, 1,00 экв.) растворяли в ДМФА (абс., ​​20 мл) и триэтиламине (2,0 мл) и TBDMS-Cl (1,20 г, 8,00 ммоль, 1,30 мл). экв.) медленно добавляли. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов.Затем добавляли водную соляную кислоту (1 М, 50 мл) и этилацетат (50 мл), фазы разделяли и водный слой дважды экстрагировали этилацетатом (2 × 50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и остаток упаривали до прибл. 10 мл в вакууме. Неочищенный продукт осаждали добавлением 50 мл воды и перекристаллизовывали из гексана с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного твердого вещества (1,26 г, 74%). ¹ H ЯМР (400 МГц, хлороформ- d ) δ = 0.20 (с, 6Н), 0,95 (с, 9Н), 7,25 (дд, Дж   =  8,8, 2,8 Гц, 1Н), 7,60 (д, Дж   =  2,7 г, Дж   =  3,4 Гц, 1Н), 7,93 (с, 1Н), 10,75 (с, 1Н) м.д. ¹³ C ЯМР (101 МГц, хлороформ- d ) δ = −4,27, 18,37, 25,77, 114,92, 123,74, 128,89, 129,50, 141,34, 143,52,3, 143,52,76 МС (ESI+): m/z нет молекулярных ионов.

Синтез 5-((6-(( трет -Бутилдиметилсилил)окси)хиназолин-4-ил)окси)-2-метилбензальдегид , 2.00 ммоль, 1,00 экв.) растворяли в метиленхлориде (абс., ​​40 мл) и 3-формил-4-метилфенилбороновой кислоте ( 15 , 600 мг, 3,00 ммоль, 3,00 экв), молекулярных ситах (4 Å), триэтиламине. (2,08 мл, 3,04 г, 30,0 ммоль, 15,00 экв) и ацетат меди (II) (360 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв) добавляли последовательно. Смесь перемешивали при комнатной температуре в открытой колбе в течение 4 часов. Испаряющийся растворитель заменяли каждые 60 мин. Затем растворители выпаривали в вакууме и неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией, используя метиленхлорид/метанол (98:2) и гексан/этилацетат (2:1) в качестве подвижной фазы.Перекристаллизация из метанола дает указанное в заголовке соединение в виде бесцветного твердого вещества (741  мг, 94%). ¹ H ЯМР (400 МГц, хлороформ- d ) δ = 0,19 (с, 6H), 0,94 (с, 9H), 2,69 (с, 3H), 7,26 (дд, J  7 , 9028,98 2,8 Гц, 1Н), 7,39 (D, J = 8,1 Гц, 1Н), 7,50 (DD, j = 8.1, 2,4 Гц, 1Н), 7,62 (D, j = = 8,7 Гц, 1H), 7,66 (д, Дж   =  2,8 Гц, 1H), 7,80 (д, Дж   =  2.4 Гц, 1H), 7,95 (с, 1H), 10,25 (с, 1H) м.д. ¹³ C ЯМР (101 МГц, хлороформ- д ) Δ = -4.42, 18.25, 19.21, 25,63, 115,53, 128,55, 129,25, 129,55, 131.94, 133.11, 135.03, 141.53, 143.26, 143,48, 155.50, 191.13 ч / млн. . МС (ESI + ): m/z нет молекулярного иона.

Синтез ( E )-3-(5-((6-гидроксихиназолин-4-ил)окси)-2-метилфенил)акриловой кислоты ( 17 ): 3 395 мг, 1,00 ммоль, 1,00 экв) растворяли в пиридине (абс., 5,0 мл), добавляли малоновую кислоту (105 мг, 1,00 ммоль, 1,00 экв.) и пиперидин (0,5 мл) и смесь перемешивали при 100°С под микроволновым излучением в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры добавляли 50 мл 10% водного раствора гидроксида натрия и водный слой промывали этилацетатом (3×50 мл). Затем рН водного слоя доводили до 7 добавлением 1М водной соляной кислоты и отфильтровывали осадок. Остаток на фильтре промывали метанолом (20 мл) и ацетоном (20 мл) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного твердого вещества (309 мг, 96%). ¹ H ЯМР (400 МГц, ДМСО- D _{6 6} ) δ = 2.47 (S, 3H), 6,53 (D, J = 15,8 Гц, 1Н), 7,38 (DD, J = = 8,8, 2,8 Гц, 1H), 7.41-7.49 (M, 2H), 7.53 (D, j = 2,8 Гц, 1H), 7,62 (D, j = 8,8 Гц , 1H), 7,82 (д, Дж   =  15,9 Гц, 1H), 7,89 (д, Дж   =  1,9 Гц, 1H), 8,22 м. д. (с, 1H) ¹³ C ЯМР (101  МГц, ДМСО- d ₆ ) δ 19.42, 109.91, 122.04, 123.28, 124.51, 125.76, 129.11, 129.19, 131.83, 134.30, 136.56, 138.16, 140.47, 140.88, 144.63, 157.38,0, 167.38, 144.63, 157.38, 167.39 МС (ESI+): m/z 322,9 (M + H) ⁺.

Синтез ( E )-3-(5-((6-(акрилоилокси)хиназолин-4-ил)окси)-2-метилфенил)акриловой кислоты ( 8 6): 17 (65 мг, 0,20 ммоль, 1,00 экв.) растворяли в хлороформе (абс., ​​4,0 мл) и ДМФ (абс., ​​1,0 мл), триэтиламине (0.10 мл) и медленно добавляли акрилоилхлорид (50 мкл, 54 мг, 0,60 ммоль, 3,00 экв.) при интенсивном перемешивании. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли метанол (10 мл) и смесь перемешивали еще 10 мин. Затем растворители выпаривали в вакууме и неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с использованием метиленхлорида/метанола (95:5) в качестве подвижной фазы. Продукт кристаллизовали из смеси гексан/метиленхлорид с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (17  мг, 23%).Т.пл.: 344–348 °С (разложение). ¹ H ЯМР (400 МГц, метанол- D ₄ ) δ = 2.43 (S, 3H), 6.03 (DD, j = 10,4, 1,3 Гц, 1H), 6,33 (DD, J = = 17.3, 10,4 Гц, 1H), 6.40 (D, J j = 15,9 Гц, 1H), 6,55 (DD, j = 17,3, 1,3 Гц, 1H), 7.30-7.39 (M, 2H), 7,59 (DD, J = 8,8, 2,7 Гц, 1H), 7,70 (D, j = 2,1 Гц, 1Н), 7,73 (D, j = = 8.9 Гц, 1H), 7,89 (д, Дж   =  15,9 Гц, 1H), 7,95 (д, Дж   =  2,6 Гц, 1H), 8,122 (с.п., 8,122). ¹³ C ЯМР (101 МГц, метанол- D _{4 4 ) δ = 18.08, 118.40, 120,69, 124.83, 127.23, 128.10, 128,48, 128.76, 128.92, 131.53, 131.70, 131.99, 132.48, 132.64, 134.52, 137,38, 142,26, 146,86, 149,71, 162,25, 192,63 м.д. HRMS (ESI + ): m/z 377,1132 рассчитано для C 21 H 17 N 2 O 5 найдено 377.1127 ([M + H] ⁺ ).}

Синтез N — (4-гидроксифенил) -4-изопропоксибензамид ( 20 ): 4-аминофенол ( 18 , 210 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв.), 4-изопропилоксибензой кислоты ( 19 , 360 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв.) и 4-DMAP (245 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв.) растворяли в CHCl ₃ (абс., ​​20 мл) и EDC·м , 3,00  ммоль, 1,50 экв.). Смесь перемешивали с обратным холодильником в течение 16 часов.После охлаждения до комнатной температуры добавляли соляную кислоту (1 M, 20 мл) и этилацетат (2 мл), фазы разделяли и водный слой дважды экстрагировали этилацетатом (2 × 20 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с использованием смеси гексан/этилацетат (3:1) в качестве подвижной фазы с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного твердого вещества (426 мг, 79%). ¹ H ЯМР (400 МГц, ДМСО- d ₆ ) δ = 1.30 (д, Дж   =  6,0 Гц, 6H), 4,73 (гепт, Дж   =  6,0 Гц, 1H), 6,66–6,78 (м, 2,96–2H), 6,66–6,78 (м, 2H, 96–2H), 7,45–7,57 (м, 2H), 7,85–7,95 (м, 2H), 9,24 (с, 1H), 9,84 (с, 1H) м.д. ¹³ C ЯМР (101 МГц, ДМСО- D _{6 6} ) Δ = 22.20, 69.86, 115.37, 119.98, 122.70, 127.27, 129.86, 131.31, 153.96, 160,39, 164,85 к / млн. МС (ESI-): m/z 270,2 ([M-H] ^—).

Синтез 4-(4-изопропоксибензамидо)фенилакрилата ( 9 ): 20 (135 мг, 0.50 ммоль, 1,00 экв) и растворяли в ТГФ (абс. 10 мл), добавляли пиридин (1 мл) и добавляли по каплям акрилоилхлорид (60 мкл, 68 мг, 0,75 ммоль, 1,50 экв). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли соляную кислоту (1 М, 20 мл) и этилацетат (20 мл), фазы разделяли и водный слой дважды экстрагировали этилацетатом (2 х 20 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией с использованием смеси гексан/этилацетат (5:1) в качестве подвижной фазы с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного твердого вещества (108 мг, 66%).Т.пл.: 172–174 °С. ¹ H ЯМР (400 МГц, хлороформ- D ) δ = 1,30 (D, J = 6,1 Гц, 6H), 4.57 (Hept, j = 6,1 Гц, 1Н), 5,95 (DD, J = = 10,5, 1,3 Гц, 1H), 6,25 (DD, j = 17,3, 10,4 Гц, 1Н), 6,54 (DD, j = 17,3, 1,3 Гц, 1H), 6,85–6,92 (м, 2H), 7,03–7,11 (м, 2H), 7,54–7,63 (м, 2H), 7,68 (с, 1H), 7,71–7,78 (м, 2H) м.д. ¹³ C ЯМР (101 МГц, хлороформ- d ) δ = 21.92, 70,14, 115,52, 121,03, 122,03, 126,47, 127,89, 128,89, 132,61, 135,87, 146,77, 161,03, 164,65, 165,16 м.д. HRMS (ESI + ): m/z 326,1387 рассчитано для C ₁₉ H ₂₀ NO ₄ , найдено 326,1386 ([M + H] ⁺ ).

Синтез 3-(децилокси)-4-гидроксибензальдегида. ), карбонат калия (290 мг, 2,10 ммоль, 1.05 экв) и 1-бромдекан ( 22 , 442 мг, 2,00 ммоль, 1,00 экв) добавляли и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Добавляли соляную кислоту (1М, 25мл) и этилацетат (25мл), фазы разделяли и водный слой дважды экстрагировали этилацетатом (2х25мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией, используя этилацетат/гексан (1:3) в качестве подвижной фазы, с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного (прозрачного) твердого вещества (216 мг, 39%). ¹ H ЯМР (400 МГц, хлороформ- d ) δ = 0.81 (т, Дж   =  6.8 Гц, 3H), 1.18–1.33 (м, 1.35)H, (м, 1.35)H , 1.49–1.52 (м, 2Н), 1.75–1.83 (м, 2Н), 4.06 (к, Дж   =  7.2 Гц, 2Н), 5.69 (с, 1Н), 6.88 (д, Дж

 = 8,3 Гц, 1H), 7.34 (DD, j j 8.3, 2,0 Гц, 1H), 7,37 (D, j = 1,8 Гц, 1H), 9,77 (S, 1H) PPM. ¹³ C ЯМР (101 МГц, хлороформ- d ) δ = 14.11, 22,68, 25,93, 29,00, 29,30, 29,53, 31,88, 69,33, 110,87, 114,06, 124,47, 130,49, 146,20, 148,85, 191,01 м.д. МС (ESI+): m/z 279,3 ([M + H] ⁺ ).

Синтез ( E

) -3- (3- (децилокси) -4-гидроксифенил) акриловая кислота ( 10 ): 23 (139 мг, 0,50 ммоль, 1,00 экв.) и малоновую кислоту (52 мг, 0,50 ммоль, 1,00 экв.) растворяли в смеси пиридина (1,0 мл) и пиперидина (0,10 мл). Смесь перемешивали при 100 °C под микроволновым излучением в течение 30 мин.После охлаждения до комнатной температуры добавляли 10% водную соляную кислоту (25 мл) и смесь трижды экстрагировали этилацетатом (3×25 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и растворители выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт перекристаллизовывали из гексана/этилацетата и воды/ацетона с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (82 мг, 51%). Т.пл.: 141–143 °С. ¹ H ЯМР (400 МГц, хлороформ- d ) δ = 0,81 (т, Дж   =  7.0 Гц, 3H), 1,13–1,33 (м, 12H), 1,34–1,43 (м, 2H), 1,76 (квин, Дж   =  6,7 Гц, 2H), 4,01 (т, Дж 2   998 6,6 Гц, 2H), 6.22 (D, j = = 15,9 Гц, 1H), 6,77 (D, j = 8,4 Гц, 1Н), 6,97 (DD, j = 8.4, 2,1 Гц, 1H), 7,09 (д, Дж   =  2,1 Гц, 1H), 7,61 (д, Дж   =  15,9 Гц, 1H) м.д. ¹³ C ЯМР (101 МГц, хлороформ- d ) δ = 14.11, 22,67, 25,96, 29,08, 29,31, 29,54, 31,89, 69,11, 111,30, 113,14, 114,92, 122,21, 127,53, 146,01, 146,87, 148,32, 171,29 м.д. HRMS (ESI + ): m/z 321,2060 рассчитано для C ₁₉ H ₂₉ O ₄ , найдено 321,2059 ([M + H] ⁺ ).

Обновление волейбола MPSF, 1 февраля

1 февраля 2017 г.

*UC Irvine 3, CAL BAPTIST 1 (27-29, 25-15, 25-17, 25-16) использовал динамичную среднюю атаку, чтобы победить Кэла Баптиста со счетом 3-1 (27-29, 25-15, 25-17, 25-16) в спортзале Van Dyne в среду.Муравьеды, которые улучшились до 8-3 в целом и 5-2 в MPSF, превзошли CBU 11-6,5 и переиграли уланов 0,369-0,092. Средние были доминирующими: Мэтью Янггрен набрал 0,636 (8-1-15) с рекордными в карьере семью передачами, а Эндрю Бенц набрал 0,533 (8-0-15). Старший Томас Ходжес возглавил всех игроков с 16 убийствами и пятью блокировками. Сеттер Майкл Сиата сделал все это, забив 0,556 (6-1-9), записав 34 передачи, четыре эйса, пять копаний и три блок-шота. Рейд Доминкес сделал четыре убийства и два эйса. Либеро Диллон Хоффман сделал рекордные 12 раскопок, а Такер Пикула добавил восемь раскопок.Кевин Ваз возглавил Кэла Баптиста с 12 убийствами и четырьмя общими блоками, за ним следуют Энрике Гарсия с девятью убийствами и Рохит Пол с восемью убийствами. Кэл Баптист вырвался вперед со счетом 3: 0 в первом сете и продолжал лидировать до тех пор, пока UCI не перешел к серии 6: 0, которая включала четыре убийства Томаса Ходжеса и блок-н-убийство Майкла Сэта, чтобы увеличить счет 20-17. CBU опоздал на три убийства подряд и вышел вперед 25–24. Команды обменялись очками до того, как «Уланы» убили Кевина Ваза и сделали тройной блок, закрепив победу со счетом 27–25.У UCI был соло-блок от Саэты, блок от Ходжеса и Янггрена и эйс от Тамира Хершко, что привело к преимуществу 4-1 во втором сете. Еще один соло-блок Саэты и ошибка атаки Лансера помогли UCI выйти вперед со счетом 9-6. UCI выиграл сет со счетом 25-15 благодаря четырем блок-шотам и трем тузам. Доминирующая подача Саэты запустила «Муравьедов» в счете 4:0 в третьем матче. Убийство Ходжеса на заднем сете от Янггрена увеличило отрыв до 7-1, а ошибка Лансера — до 9-1. Муравьеды выиграют сет со счетом 25-17 благодаря эйсу Саэты.UCI достиг 0,545 против 0,043 CBU. Четвертый сет начался так же, как и третий: подача Саэты вывела CBU из строя и вывела Anteaters вперед 6:0. Рейд Доминкес возглавил UCI с тремя убийствами на пути к победе со счетом 25-16. UCI развлекает USC в пятницу (3 февраля) в Bren Events Center, начало в 19:00. UCSD

ЛА ХОЛЛА, Калифорния. Калифорнийский университет в Сан-Диего продемонстрировал несколько отличных результатов и одержал третью победу подряд, обогнав Принстонский университет со счетом 3:1 в мужских волейбольных соревнованиях вне конференции на RIMAC Arena в среду вечером.Счета по сетам были 25-22, 25-19, 21-25 и 25-21. Калифорнийский университет в Сан-Диего улучшается до 3-5 в целом. Это первая победная серия «Тритонов» из трех матчей с тех пор, как они выиграли пять матчей подряд с 9 по 31 марта 2012 года. Принстон из Восточной межвузовской волейбольной ассоциации (EIVA) проиграл со счетом 2–4. «Тигры» начали свое трехматчевое путешествие в Калифорнию с поражения на втором месте Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе в воскресенье вечером. Таннер Сифтестад провел матч с высоким количеством убийств в четвертый раз подряд, забив 21 мяч. У юниора из Сакраменто теперь 20 с лишним убийств в четырех соревнованиях подряд.Его коллега-три-капитан Ян Колберт, старший нападающий четвертого года обучения, зажег огнем в эту ночь, зарядив свою команду 11 убийствами и командными максимумами из восьми копаний и двух эйсов на подаче. Сифтестад достиг рекордного сезона 0,486 (21-4-35), а Кольбер — 0,429 (11-2-21). Младший связующий Милош Стойчич, которому во вторник исполнился 21 год, только что пропустил отметку в 50 передач во втором матче подряд, остановившись на 49, добавив три рывка, один эйс, блок-ассист и одиночное убийство с одной попытки. Первокурсник в красной рубашке внешний нападающий Ксандер Хименес (восемь убийств) и младший центральный блокирующий Алек Флауэрс (семь) помогали в этом деле.UCSD атаковал на лучшем в сезоне отрыве 0,430 (54-11-100), его предыдущий максимум был 0,295. Убийства Сифтестада на самом деле стали последними двумя очками UCSD в третьем матче подряд в этой победной серии, а сегодняшние героические действия подтолкнули его к более чем 20. Калифорнийский университет в Сан-Диего едет в Лос-Анджелес в эту субботу, 4 февраля, возобновляя игру Mountain Pacific Sports Federation. против троянцев USC. Первая подача в Galen Center запланирована на 19:00.

границ | Внутреннее дисульфидное связывание и гликозилирование интерлейкина-7 защищают от протеолитической инактивации нейтрофильными металлопротеиназами и сериновыми протеазами

Введение

Интерлейкин (IL)-7 играет несколько непересекающихся ролей на протяжении нормального развития, гомеостаза и активации Т-клеток.В тимусе IL-7, продуцируемый эпителиальными клетками тимуса, обеспечивает выживаемость и пролиферацию развивающихся тимоцитов и регулирует время их дифференцировки (1–3). На периферии IL-7 является важным фактором выживания наивных Т-клеток и необходим для их гомеостатической пролиферации (4, 5). Память CD8 ⁺ Т-клетки также полагаются на IL-7 для выживания (6). Эти эффекты IL-7 опосредованы несколькими нижестоящими факторами выживания, такими как Bcl-2 и Mcl-1 (7). В лимфатических узлах тонкий баланс между продукцией IL-7, в основном стромальными клетками, и его потреблением несколькими субпопуляциями врожденных лимфоидных клеток управляет пролиферацией Т-клеток, как было недавно продемонстрировано (8).

IL-7 передает сигналы через гетеродимерный рецептор, состоящий из цитокин-специфичной α-субъединицы (CD127) и общей γ-цепи (γ _c /CD132), которая является общей с другими цитокиновыми рецепторными комплексами семейства IL-2 (9 ). Связывание IL-7 приводит к образованию сигнально-компетентного рецепторного комплекса, перекрестному фосфорилированию Jak1 и Jak3, связанных с IL-7Rα и γ _c -цепью, соответственно, и фосфорилированию IL-7Rα, который затем действует в качестве сигнальной платформы для Stat5 и других сигнальных молекул (9, 10).В Т-клетках CD8 ⁺ эктодомен IL-7Rα сбрасывается с клеточной поверхности при взаимодействии с IL-7, достигая самых низких уровней через 24–48 ч после стимуляции (11).

Регуляторные Т-клетки человека (Treg) не экспрессируют IL-7Rα (12). Способность IL-7 стимулировать пролиферацию наивных Т-клеток и Т-клеток памяти, но не Treg, резко контрастирует с эффектами IL-2 (13–15). У пациентов с идиопатической CD4-лимфопенией инъекции рекомбинантного человеческого IL-7 способствовали вспышкам пролиферации CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клеток.Увеличение CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т-клеток также наблюдалось в исследовании с участием пациентов с хронической инфекцией ВИЧ-1, где применение ИЛ-7 увеличивало пролиферацию как периферических Т-клеток, так и тимоцитов, о чем свидетельствует увеличение у недавних эмигрантов тимуса (16, 17). Нарушения в сигнальном пути IL-7/IL-7R/JAK/STAT также связаны с лейкемией, с особенно неблагоприятным прогнозом у взрослых пациентов с Т-ОЛЛ (18–20). Поэтому исследования поведения, биодоступности и функциональных эффектов ИЛ-7 актуальны в биологии и медицине.

Недавно мы показали, что IL-2, другой цитокин семейства γ _c , эффективно расщепляется нейтрофильными протеазами как в биохимических, так и в клеточных анализах (21). В то время как нейтрофильная эластаза (NE), протеиназа 3 (P3) и катепсин G (catG) полностью разрушали IL-2, матриксная металлопротеиназа (MMP)-9 продуцировала семейство стабильных продуктов, которые сохраняли способность связываться с рецептором IL-2 и инициировать передачу сигналов, хотя время и величина явно отличаются от таковых для интактного цитокина.Исследование расщепления других цитокинов семейства γ _c с помощью MMP-9 выявило IL-7 и IL-21 в качестве мишеней, в то время как IL-4, IL-9 и IL-15 практически не расщеплялись (21). Эти результаты добавили больше мишеней к растущему репертуару хемокинов и цитокинов, процессируемых MMP-9. Отчеты из нашей и других лабораторий ясно показали, что расщепление, опосредованное MMP-9, регулирует биологическую активность таких молекул. MMP-9 сильно потенцирует IL-1β и IL-8, тогда как расщепление IL-2 и хемокина CCL2 снижает их эффективность в анализах клеток-мишеней (22, 23).Следовательно, активность MMP-9, которая, как известно, значительно повышается в местах острого воспаления из-за дегрануляции нейтрофилов и других типов клеток (24, 25), может влиять на клеточные ответы на растворимые сигнальные факторы. Кроме того, MMP-9 расщепляет эктодомены нескольких критически важных молекул клеточной поверхности, таких как α-субъединица рецептора IL-2 CD25 (26).

В настоящем исследовании мы исследовали протеолитический процессинг IL-7 нейтрофильными протеазами.В частности, мы идентифицировали новые сайты расщепления в последовательности IL-7 для протеаз MMP-9, NE и P3. Кроме того, мы показали, что посттрансляционные модификации, особенно внутренние дисульфидные связи и гликозилирование, защищают IL-7 от протеолиза нейтрофильными протеазами и от функциональной инактивации, и что последний протеолиз видоспецифичен.

Материалы и методы

Белки, реагенты и буферы

Были получены следующие препараты рекомбинантного человеческого IL-7; человеческий IL-7, полученный в E.coli (Peprotech, кат. № 200-07), человеческий IL-7, продуцируемый в клетках насекомых (Novus, кат. № NBP2-52629), и человеческий IL-7, продуцируемый в клетках HEK-293 человека (Biolegend, кат. № 581904) (см. Дополнительную таблицу 1). Эктодомен рецептора IL-7 был приобретен у R&D Systems (rhIL-7, каталожный номер 306-IR-050). Рекомбинантную ММР-9 человека получали, очищали, активировали и тестировали, как описано (27). Рекомбинантные человеческие proMMP-2, proMMP-7, proMMP-8 и «дезинтегрин и металлопротеазы» (ADAM)17 были приобретены у R&D Systems и активированы, как описано ранее (28).Активный NE человека был приобретен у Abcam (номер по каталогу ab).

Протеолитический процессинг IL-7 и His-Tag Pull-Down

Рекомбинантные протеазы человека добавляли к IL-7 в молярном соотношении 1/100 (протеаза/IL-7), если не указано иное, в буфере, содержащем 150 мМ NaCl, 10 мМ CaCl ₂ , 30 мМ Трис и 0,01% Твин-20 (рН 7,4). Реакции инкубировали при 37°С в течение 4 часов, если не указано иное. Вытягивание гистидиновой метки проводили с использованием магнитных микрогранул Ni-NTA в соответствии с инструкциями производителя (ThermoFisher, кат.нет. 88832).

SDS-PAGE, вестерн-блоттинг и секвенирование по Эдману

Образцы IL-7 разделяли в 16% трициновых гелях Novex (Invitrogen, кат. № EC6695BOX) в соответствии с рекомендациями поставщика. Белки в гелях окрашивали с помощью набора SilverQuest Silver Staining Kit (Invitrogen, кат. № LC6070) или переносили на мембраны PVDF с использованием системы Trans-Blot Turbo Transfer System с соответствующими материалами и протоколами (Biorad, кат. № 1704150). Для секвенирования по Эдману белки на мембране PVDF окрашивали Кумасси бриллиантовым синим (Coomassie R-250, Thermo Scientific, кат.нет. 20278) и анализировали с помощью секвенатора белка Procise 491cLC (Applied Biosystems) или секвенатора белка PPSQ-51A (Shimadzu). Для анализа сигнальных молекул белки в клеточных лизатах разделяли в 4-12% трис-глициновых гелях в восстанавливающих условиях и переносили на мембраны из ПВДФ. Мембраны блокировали в течение 1 ч в 5% BSA с буфером TBST (150 мМ NaCl, 0,1 % Tween 20, 50 мМ Трис, pH 7,5) и инкубировали в течение ночи с анти-pSTAT3 (Tyr ⁷⁰⁵ ) (Cell Signaling, кат. № 9138) или анти-β-актин (Proteintech, кат.нет. 20536-1-AP) антитела. После промывки блот инкубировали с конъюгированными с пероксидазой антимышиными IgG или антикроличьими IgG в течение 1 ч при комнатной температуре. Наконец, изображения вестерн-блоттинга были разработаны с использованием системы Vilber Lourmat Fusion (Labtech International) и субстрата для вестерн-блоттинга Pierce ECL (Thermo Fisher Scientific).

Анализы связывания

Эксперименты по поверхностному плазмонному резонансу (SPR) проводились на приборе Biacore T200 (GE Healthcare). Рекомбинантные субъединицы рецептора IL-7 были иммобилизованы на поверхности чипов из карбоксиметилированного декстрана (CM5, GE Healthcare).Эксперименты проводили при 25°C в 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА и 0,05% Tween 20. Несколько концентраций интактного IL-7 или cIL-7 (IL-7, расщепленный MMP-9) вводили в течение 2 мин при скорости потока 30 мкл/мин, после чего поддерживалась 5-минутная фаза диссоциации. Поверхность сенсорного чипа была регенерирована с помощью 4 М MgCl ₂ . Аффинность связывания (K _D ) и кинетические константы скорости (k _на и k _на ) были получены после подгонки экспериментальных данных к модели реакции с двумя состояниями (IL-7-IL-7Rα) в Biacore T200. Программное обеспечение для оценки 2.0 и согласно McElroy et al. (29).

Эксперименты по культивированию клеток и пролиферации

Клетки HPB-ALL (клеточная линия Т-клеточного лейкоза человека) были приобретены из коллекции клеточных культур Германии (DSMZ, № по каталогу ACC 483). Клетки поддерживали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Для стимуляции к клеткам добавляли указанные количества интактного рекомбинантного человеческого IL-7 или cIL-7 и контролировали рост клеток с использованием системы анализа живых клеток Incucyte и соответствующего программного обеспечения (Essen BioScience).Для проточного цитометрического анализа IL-7R 0,5×10 ⁶ клеток HPB-ALL стимулировали 50 нг/мл IL-7 или оставляли без обработки в течение указанного периода времени.

Проточная цитометрия

Клетки промывали ледяным PBS и инкубировали в течение 15 минут с блокирующими Fc-рецептор антителами анти-CD16/анти-CD32 (BD Biosciences Pharmingen). После промывания PBS + 2% FCS клетки окрашивали в течение 20 мин. Клетки HPB-ALL окрашивали анти-CD127/IL7Rα, конъюгированным с фикоэритрином (PE) (Biolegend, кат.нет. № 351342), а мононуклеарные клетки периферической крови человека (РВМС) окрашивали конъюгированным с фикоэритрином (ФЭ) анти-CD8 (Biolegend, кат. 351315) и краситель жизнеспособности Zombie Aqua™ (BioLegend). Клетки дважды промывали, фиксировали 0,37% формальдегидом и анализировали на BD LSR Fortessa X20 с программным обеспечением DIVA (BD Biosciences, v9.0). Результаты были дополнительно проанализированы с помощью программного пакета FlowJo (BD Biosciences, v10.0).Пример стратегии гейтирования показан на дополнительном рисунке 4.

Изоляция и стимуляция РВМС человека

РВМС были выделены из однодневных лейкоцитарных пленок, полученных из крови, сданной здоровыми добровольцами (Центр переливания крови Бельгийского Красного Креста, Мехелен, Бельгия) с применением Lymphoprep (Axis-Shield). Клетки суспендировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10% FCS, 1 мМ пирувата натрия и 1% GlutaMAX при плотности 10 ⁶ клеток/мл и стимулировали 500 пМ рекомбинантного человеческого IL-7 или cIL-7.Клетки далее анализировали с помощью проточной цитометрии.

Дегрануляты нейтрофилов человека и инкубации

Дегрануляты нейтрофилов собирали из гранулоцитов крови человека, стимулированных N-формилметиониллейцилфенилаланином (fMLF), как описано ранее (21, 28). Все доноры крови дали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией. Дегрануляты нейтрофилов от разных доноров объединяли, чтобы свести к минимуму индивидуальные различия. Для оценки переваривания IL-7 нейтрофильными протеазами 1 мкг IL-7 инкубировали с 5 мкл нейтрофильного дегранулята (37°C, 6 часов) в присутствии или в отсутствие ингибитора металлопротеазы (100 мМ ЭДТА), ингибитора сериновой протеазы. (1 мг/мл Пефаблок), ингибитор аспарагиновой протеазы (0.7 мкг/мл пепстатина) или ингибитор цистеинпротеазы (10 мкг/мл Е-64).

Результаты

ММР-9 эффективно расщепляет человеческий ИЛ-7, и на этот протеолиз влияет состояние гликозилирования ИЛ-7 -7 в качестве субстрата MMP-9 (21). Учитывая важность IL-7 в пролиферации Т-клеток, мы стремились к дальнейшей характеристике этого взаимодействия. Поскольку известно, что гликозилирование влияет на взаимодействие между IL-7 и IL-7Rα (29), мы провели наши эксперименты с негликозилированным IL-7 (производится в

г.coli ), с гликозилированным IL-7, продуцируемым в клетках насекомых, и с гликозилированным IL-7 человека, продуцируемым в клетках HEK-293 человека (дополнительная таблица 1). Инкубация IL-7 с активной MMP-9 человека привела к образованию по крайней мере двух заметных фрагментов IL-7 (IL-7* и IL-7**, рисунки 1A, B и дополнительный рисунок 1). Негликозилированный ИЛ-7 наиболее эффективно расщеплялся с полным расщеплением уже через 1 час после инкубации при молярном соотношении 1:100 (ММП-9/ИЛ-7). Напротив, гликозилированный IL-7 расщеплялся менее эффективно, что требовало более высоких соотношений фермент:субстрат (рис. 1A) и более длительных периодов инкубации (рис. 1B) для полного переваривания.Анализ N-концевой последовательности привел к идентификации нео-N-концевого фрагмента LGEAQ, репрезентативного для расщепления между аминокислотными остатками Ala ¹²⁸ и Leu ¹²⁹ (рис. 1C, D). Этот сайт расщепления был также подтвержден in silico расщеплением IL-7 с помощью MMP-9 с использованием пакета iProt-Sub (30), и он присутствовал в открытой петле между α-спиралями C и D (29, 31) ( Рисунок 1E).

Рисунок 1 Характеристика расщепления IL-7 MMP-9. (A) Рекомбинантный IL-7, полученный в клетках E. coli (слева), клетках насекомых (в центре) или клетках HEK-293 человека (справа), инкубировали с различными концентрациями активной ММР-9 при указанных молярных соотношениях ( ММП-9/ИЛ-7), в течение 2 часов. Фрагменты разделяли с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих условиях с последующим окрашиванием серебром. ММР-9, интактный IL-7 (IL-7 ⁱ ) и два продукта расщепления (IL-7* и IL-7**) обозначены стрелками, соответственно, черного и зеленого цвета. ^дюйм ; отрицательный контроль в присутствии 500 мкМ ингибитора ММП SB-3CT (inh). (B) Рекомбинантный IL-7, продуцируемый в клетках E. coli (вверху, негликозилированные), клетках насекомых (в середине, частично гликозилированные) или клетках человека HEK-293 (внизу, полностью гликозилированные), инкубировали с активной ММП- 9 в молярном соотношении 1:100 (ММП-9/ИЛ-7), и образцы отбирали в указанные моменты времени. Фрагменты разделяли с помощью SDS-PAGE в восстанавливающих условиях. Интактный IL-7 (IL-7 ⁱ ) и два продукта расщепления (IL-7* и IL-7**) обозначены стрелками соответственно черного и зеленого цвета. ^дюйм ; отрицательный контроль в присутствии 500 мкМ ингибитора ММП SB-3CT. (C) , данные секвенирования по Эдману. Идентификация нео-N-концов, образующихся при расщеплении IL-7 с помощью MMP-9 (1:100, MMP-9:IL-7 в течение 6 часов). Идентификация N-конца LGEAQ фрагмента IL-7** указывает на сайт расщепления MMP-9 между аминокислотными остатками A ¹²⁸ и L ¹²⁹ . Вариации N-концевых аминокислот фрагментов IL-7* обусловлены различными системами экспрессии IL-7 (дополнительная таблица 1). (D) Аминокислотная последовательность человеческого IL-7 с указанием сайтов гликозилирования (синие), дисульфидных мостиков (желтые), сайта расщепления MMP-9 (зеленый треугольник) и фрагментов IL-7 (зеленые стрелки). (E) Трехмерная модель IL-7 [структура PDB 3DI3 (29)] с указанием местоположения сайта расщепления ММР-9 (зеленый треугольник), сайтов гликозилирования (синие шестиугольники) и дисульфидных мостиков (желтый).

Фрагменты IL-7, полученные в результате протеолиза MMP-9, остаются связанными через дисульфидные мостики и остаются функционально активными

Поскольку IL-7 способен образовывать три внутренних дисульфидных мостика (рис. при расщеплении MMP-9 фрагменты IL-7 оставались бы связанными или функционировали бы как отдельные белковые фрагменты.IL-7 с меткой His (на С-конце) расщепляли ММР-9, и С-концевой фрагмент удаляли с помощью осаждения никелевыми шариками (Фигура 2А). Даже при расщеплении ММР-9 N-концевой фрагмент IL-7 осаждался вместе с С-концевым фрагментом, указывая на то, что фрагменты остаются присоединенными в нативных условиях. Кроме того, в денатурирующих, но не восстанавливающих условиях (электрофорез с SDS и без восстанавливающего агента) фрагменты также оставались вместе, что указывает на сильное взаимодействие, основанное на образовании дисульфидного мостика (рис. 2B).Эти результаты были подтверждены для гликозилированных вариантов, продуцируемых клетками насекомых и млекопитающих (см. Дополнительную фигуру 2). Затем мы задались вопросом, повлияет ли расщепление MMP-9 на функцию IL-7. IL-7 связывается с гетеродимерным комплексом, состоящим из IL-7Rα и общей γ-цепи [совместной с рецепторами других интерлейкинов (9)], и индуцирует выживание и пролиферацию тимоцитов (29, 32). Чтобы имитировать взаимодействие между IL-7 и IL-7Rα, мы иммобилизовали эктодомен IL-7Rα на чипах SPR и проанализировали связывание IL-7 и cIL-7 (рис. 2C, D).Интересно, что модификация IL-7 путем протеолиза MMP-9 не снижала его способности связываться с цепью IL-7Rα. Константы диссоциации интактного IL-7 по сравнению с расщепленным IL-7 (cIL-7) всегда были одного порядка для агликозила (, т.е. без гликозилирования) E. coli -производного (7,7 x 10 ^{— 8} по сравнению с 6,4 x 10 ^-8 ) и гликопротеины клеток млекопитающих (3,1 x 10 ^-7 по сравнению с 2,9 x 10 ^-7 ).Следовательно, связывание с цепью IL-7Rα всегда было одинаковым для интактного и расщепленного IL-7. Также можно было сравнить влияние гликозилирования на сродство к цепи IL-7Rα. Мы обнаружили, что присутствие N-связанных олигосахаридов снижало сродство IL-7Rα к белку IL-7, и эти эффекты наблюдались как для интактных, так и для расщепленных гликоформ IL-7. (Рисунок 2D и дополнительный рисунок 3). Связываясь с IL-7Rα, IL-7 индуцирует быструю клатрин-опосредованную интернализацию комплекса IL-7/IL7R, которая необходима для активации нижестоящей передачи сигнала (33).Для исследования этого механизма мы использовали клеточную линию Т-клеточного лейкоза человека HPB-ALL. Добавление IL-7 в питательную среду приводило к быстрому снижению уровня IL-7Rα на поверхности клетки (дополнительные рисунки 4 и 5A), вызывало опосредованную IL-7 передачу сигнала (дополнительная фигура 5B) и стимулировало рост HPB- ВСЕ клетки в бессывороточных условиях (дополнительная фигура 5C). Интересно, что расщепление IL-7 с помощью MMP-9 не изменяет способность IL-7 индуцировать интернализацию рецептора (рис. 3A), активировать pSTAT3 (рис. 3B и дополнительная фигура 6) или индуцировать пролиферацию HPB-ALL (рис. 3C). ).Наконец, как IL-7, так и cIL-7 могли снижать уровни IL-7R на поверхности CD8 ⁺ РВМС человека с одинаковой эффективностью через 24 часа после обработки IL-7 (рис. 3D). Известно, что через 24 часа после стимуляции IL-7 CD8 ⁺ PBMC также индуцируют выделение IL-7R, известный поздний функциональный эффект IL-7 (11).

Рисунок 2 Взаимодействие IL-7 с рецептором IL-7 остается неизменным после расщепления MMP-9. (A) IL-7, меченный His (продуцируемый в клетках насекомых), подвергали вытягиванию гистидиновой метки.Белки, связанные с гранулами, и несвязанные белки были разделены путем восстановления SDS-PAGE. (B) IL-7 в присутствии (+) или в отсутствие (-) MMP-9 подвергали невосстанавливающему или восстанавливающему электрофоретическому разделению. (C) 3D-модель взаимодействия между IL-7 и IL-7Rα (синий) [на основе структуры PDB 3DI3 (29)] с указанием фрагментов IL-7, генерируемых MMP-9 [IL-7* (оранжевый) и Ил-7** (красный)]. (D) Связывание IL-7 [из E. coli (вверху) или клеток млекопитающих (внизу)] и IL-7, расщепленного MMP-9 (cIL-7, молярное соотношение 1/100 MMP-9/ IL-7, 4 часа при 37 ° C) в rhIL-7Rα, как было проанализировано с помощью SPR (репрезентативные результаты для 2 экспериментов, см. Дополнительную фигуру 3).Цвета представляют различные концентрации IL-7, как указано, а черные линии представляют собой кривые, соответствующие модели реакции с двумя состояниями (IL-7-IL-7Rα) в соответствии с McElroy et al. (29).

Рисунок 3 Функциональные эффекты интернализации IL-7 и рецептора IL-7 в клетках HPB-ALL и CD8 человека ⁺ PBMC остаются интактными после расщепления MMP-9. (A) Анализ IL-7R на клеточной поверхности, через 5 минут после стимуляции клеток HPB-ALL 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение 1/100 ММП-9/ИЛ-7, 4 ч при 37°C) или эквивалент MMP-9.Данные представляют собой четыре независимых эксперимента, при этом экспериментальные повторы показаны одним цветом. Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR. Данные были нормализованы к нестимулированным условиям, представляющим стационарные количества IL-7R клеточной поверхности (100% IL-7Rα). *p < 0,05, как определено с помощью критерия Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения и рассчитано по средним значениям каждого эксперимента. (B) Анализ pSTAT3 (Tyr ⁷⁰⁵ ) в клетках HPB-ALL через 15 минут после стимуляции 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение 1/100 ММП-9/ИЛ-7, 4 часа при 37°С) или эквивалент ММР-9.Каждая точка данных указывает на независимый эксперимент. Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR. Данные нормализованы к β-актину. (C) Рост клеток HBP-ALL, 4 дня после стимуляции 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (1/100 молярное соотношение MMP-9/IL-7, 4 ч при 37°C) или эквивалент MMP-9 (правая панель). Данные представляют собой шесть независимых экспериментов, все повторы которых показаны одним цветом. Гистограммы представляют собой медианы, а планки погрешностей представляют IQR. Данные нормализовали для клеток, стимулированных только IL-7, что соответствует 100% росту.***p ≤ 0,001, определяемый по критерию Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения и рассчитанный по средним значениям каждого эксперимента. (Левая панель) репрезентативные изображения клеток HPB-ALL с указанными стимуляциями. Масштабная линейка = 200 мкм. (D) Анализ IL-7R клеточной поверхности через 24 ч после стимуляции CD8 человека ⁺ РВМС с 15 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение 1/100 ММП-9/ИЛ-7, 4 часа при 37°С) или эквивалент ММР-9. Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR.*p < 0,05 по критерию Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения. нс, не имеет значения.

Человеческий IL-7 эффективно расщепляется другими нейтрофильными металлопротеиназами и сериновыми протеазами

ММР-9 в основном связан с миелоидными клетками, в частности, он обнаружен в секреторных гранулах нейтрофилов и высвобождается в местах острого и чрезмерного воспаления, вместе с другими металлопротеиназами (, например, MMP-8, ADAM-17) и сериновыми протеиназами ( e.г. NE, catG и P3) (34, 35). Анализ In silico показал, что несколько других протеаз, удерживаемых нейтрофильными гранулами (34), потенциально могут расщеплять IL-7 (рис. 4A, B). Мы выполнили экспериментов по расщеплению in vitro с набором металлопротеиназ и сериновых протеаз, характерных для нейтрофилов. Все протестированные металлопротеиназы были способны расщеплять IL-7 с образованием фрагментов, сходных с MMP-9 (IL-7* ^MMP и IL-7** ^MMP , фигура 4C). Расщепление MMP-8 и ADAM17 было менее эффективным, чем MMP-9, тогда как расщепление MMP-2 (известное своим высоким сходством с MMP-9) было подобно расщеплению MMP-9.Сериновые протеазы catG, P3 и NE также были способны расщеплять IL-7 (рис. 4D). Протеолиз IL-7 под действием catG был наименее эффективным, однако протеолиз под действием P3 и NE приводил к образованию одного или нескольких более мелких фрагментов (IL-7*** ^SP ). NE генерировал два фрагмента, сходных с MMP-9, но с меньшей молекулярной массой (IL-7** ^SP ). N-концевое секвенирование IL-7 ^{** SP} и IL-7 ^{*** SP} привело к идентификации нео-N-концевого фрагмента ALGEAQ, репрезентативного для расщепления между аминокислотными остатками Ala ¹²⁷ и Ala ¹²⁸ (рис. 4E), отличающиеся только одной аминокислотой от сайта расщепления MMP-9.Этот сайт расщепления не был предсказан in silico .

Рисунок 4 Передача сигналов IL-7 через рецептор IL-7 остается интактной после расщепления нейтрофильными протеазами. (A) In silico предсказание протеолиза IL-7 нейтрофильными протеазами (инструмент iProt-Sub). Разделение протеаз на основе их места в гранулах нейтрофилов, включая желатиназу (зеленый), специфические (оранжевый) и азурофильные гранулы (синий). (B) Трехмерная модель IL-7 [структура PDB 3DI3 (29)] с указанием местоположения предполагаемых сайтов расщепления нейтрофильными протеазами. (C) Расщепление IL-7 подбором металлопротеиназ. Переваривание при молярном соотношении 1/100 (ММП/ИЛ-7) и в течение 4 часов. Ил-7 ^и , неповрежденный Ил-7; фрагменты отмечены звездочками (*). (D) Расщепление IL-7 сериновыми протеазами catG, P3 и NE. Переваривание при молярном соотношении 1/100 (протеаза/ИЛ-7) и в течение 4ч. (E) Данные секвенирования по Эдману. Идентификация нео-N-концов, образующихся при расщеплении IL-7 NE или P3 (1:100, протеаза:IL-7 в течение 4 часов).Идентификация N-конца ALGEAQ фрагмента IL-7** ^SP указывает на общий сайт расщепления между аминокислотными остатками A ¹²⁷ и A ¹²⁸ . (F) Анализ IL-7R на клеточной поверхности, 5 минут после стимуляции клеток HPB-ALL 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение 1/100 MMP-9/IL-7, 4 часа при 37°С) или эквивалент указанной протеазы. Данные представляют собой три независимых эксперимента, все повторы которых показаны одним цветом. Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR.Данные были нормализованы к нестимулированным условиям, представляющим стационарные количества IL-7R клеточной поверхности (100% IL-7Rα). Статистический анализ выполнен по критерию Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения и рассчитан по средним значениям каждого эксперимента. (G) Анализ pSTAT3 (Tyr ⁷⁰⁵ ) в клетках HPB-ALL, через 15 минут после стимуляции 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное отношение протеаза/IL-7 1/100, 4 часа при 37°С). Каждая точка данных указывает на независимый эксперимент.Гистограммы представляют средние значения, а планки погрешностей представляют IQR. Данные нормализованы к β-актину. (H) Рост клеток HBP-ALL, 4 дня после стимуляции 50 нг/мл IL-7, cIL-7 (молярное соотношение протеаза/IL-7 1/100, 4 часа при 37°C) или эквивалентом ММП-9. Данные представляют собой четыре независимых эксперимента, все повторы которых показаны одним цветом. Гистограммы представляют собой медианы, а планки погрешностей представляют IQR. Данные нормализовали для клеток, стимулированных только IL-7, что соответствует 100% росту.Статистический анализ выполнен по критерию Крускала-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения и рассчитан по средним значениям каждого эксперимента. нс, не имеет значения.

Протеолиз IL-7 под действием нейтрофильных протеаз не изменяет опосредованную IL-7 пролиферацию в клеточной линии Т-клеточного лейкоза

этот протеолиз на функциональности IL-7. Интересно, что расщепление IL-7 с помощью NE или P3 не изменяет интернализации IL-7R (рис. 4F).Хотя для НЭ наблюдалось снижение передачи сигналов pSTAT3 (рис. 4G и дополнительная фигура 7), этот эффект не был значительным и не приводил к значительному влиянию на пролиферацию Т-клеточной линии HPB-ALL (рис. 4H). Далее исследовали совместное действие протеаз нейтрофилов ММП-9, НЭ и Р3. Обработка IL-7 этим коктейлем протеаз приводила к исчезновению интактного IL-7 при восстановлении SDS-PAGE (Фигура 5A). Интересно, что в невосстанавливающих условиях снова появлялся сигнал IL-7 с более высокой молекулярной массой, за исключением одной формы с более низкой молекулярной массой, генерируемой сериновыми протеазами.Кроме того, инкубация дегранулятов нейтрофилов доноров-человеков с ИЛ-7 приводила к исчезновению интактного ИЛ-7 и появлению фрагментов ИЛ-7, сходных с ИЛ-7* ^ММП , ИЛ-7* ^SP , ИЛ-7. ** ^MMP и IL-7** ^SP (рис. 5B). Только ингибитор сериновых протеаз Пефаблок был способен ингибировать образование фрагментов ИЛ-7, что указывает на то, что сериновые протеазы нейтрофилов являются основными протеазами, расщепляющими ИЛ-7 в дегранулятах нейтрофилов. Кроме того, в невосстанавливающих условиях потеря сигнала интактного IL-7 восстанавливалась, что снова указывает на тот факт, что фрагменты IL-7 остаются взаимосвязанными после протеолиза (Фигура 5C).Наконец, мы также исследовали, останется ли IL-7 функционально неповрежденным. Действительно, IL-7, обработанный коктейлем протеаз нейтрофилов или нейтрофильными дегранулятами, оставался способным индуцировать фосфорилирование STAT3 (рис. 5D).

Рисунок 5 Совместное расщепление IL-7 нейтрофильными протеазами приводит к образованию фрагментов, которые остаются взаимосвязанными и функционально интактными. (A) Обработка ИЛ-7 коктейлем нейтрофильных протеаз (ММП-9, Р3 и NE в молярном соотношении 1/100 (протеаза/ИЛ-7) в течение 4 ч) в присутствии или в отсутствие ингибитор сериновой протеазы (S), ингибитор металлопротеиназы (M) или их комбинации (SM).Анализ белков путем восстановления SDS-PAGE иллюстрирует исчезновение интактного IL-7 и диффузное окрашивание при более низких молекулярных массах. Напротив, в невосстанавливающих условиях большая часть сигнала IL-7 появляется снова. (B) Расщепление IL-7 протеазами, присутствующими в дегранулятах нейтрофилов (5 мкл из пула 5-10 доноров и инкубация с 1 мкг IL-7) в присутствии или в отсутствие ингибитора сериновых протеаз (S), металлопротеиназы ингибитор (М), ингибитор протеазы аспарагиновой кислоты (А), ингибитор цистеиновой протеазы (С) или их комбинации.Верхняя панель, денситометрический анализ интактного IL-7 (IL-7 ⁱ ). Данные нормированы на интактный IL-7 в условиях без дегрануляции нейтрофилов. **p ≤ 0,01, ***p ≤ 0,001 по критерию Краскела-Уоллиса с поправкой Данна на множественные сравнения (n = 3). Нижняя панель, репрезентативное изображение анализа SDS-PAGE. (C) IL-7, расщепленный дегранулятом нейтрофилов (ND) и работающий в невосстанавливающих условиях, приводит к повторному появлению IL-7 с более высокой молекулярной массой. (D) Индукция pSTAT3 под действием IL-7 при обработке коктейлем (C) нейтрофильных протеаз (MMP-9, P3 и NE в молярном соотношении 1/100 (MMP/IL-7) и для 4h) в присутствии или в отсутствие ингибитора сериновой протеазы (S), ингибитора металлопротеиназы (M) или их комбинаций (SM) или с нейтрофильной дегрануляцией (ND). β-актин показан как контроль нагрузки.

Мышиный IL-7 не содержит чувствительной к протеазе области петли

Затем мы хотели дополнительно исследовать протеолиз IL-7 in vivo [ e.г. у мышей с нокаутом MMP-9 (KO). Учитывая различия в функционировании системы IL-7/IL-7R между людьми (развитие Т-клеток) и мышами (развитие Т-клеток и В-клеток) (32), мы оценили, восприимчив ли мышиный IL-7 к протеолизу путем ММП-9. Мышиный IL-7 не расщеплялся MMP-9 (Фигура 6A). Интересно, что множественное выравнивание аминокислотных последовательностей IL-7 нескольких видов показало, что в мышином и крысином IL-7 отсутствует чувствительная к протеазе петлевая область (фиг. 6B). Это открытие указывает на разницу в чувствительности к протеазе между мышиным и человеческим IL-7.

Рисунок 6 В мышином IL-7 отсутствует чувствительная к протеазе область петли, и он не расщепляется ММР-9. (A) Инкубация рекомбинантного человеческого (hu, полученного из клеток насекомых) и (mo, E. coli, полученного из ) IL-7 с активной MMP-9 и анализ продуктов реакции путем восстановления SDS-PAGE. (B) Выравнивание аминокислотной последовательности IL-7 человека, бонобо, свиньи, крупного рогатого скота, овцы, кролика, крысы, мыши и курицы с указанием MMP-9 (зеленый треугольник) и сериновой протеазы (белый треугольник) сайты расщепления человеческого IL-7.Множественное выравнивание последовательностей выполняли с помощью ClustalO, при этом относительная консервативность аминокислотной последовательности была указана различными оттенками синего, а консервативные остатки цистеина — желтым. Обратите внимание на отсутствующие последовательности в мышином и крысином IL-7 и на другую последовательность в курином IL-7 в области, которая представляет чувствительную к протеазе петлю.

Обсуждение

Интерлейкин-7 является важным регуляторным фактором роста и выживания Т-клеток при аутоиммунитете и раке (9, 10, 32). Хотя производство и сигнальный каскад ИЛ-7 и его рецепторов хорошо изучены (9, 32), имеется ограниченная информация о его элиминации или периоде полувыведения.Мы установили, что в пределах семейства лигандов γ _c /CD132 человека (9) IL-2, IL-7 и IL-21 эффективно расщепляются MMP-9, тогда как IL-4, IL-9 и IL-15 нет (21). Кроме того, IL-2 теряет сигнальные функции после протеолиза MMP-9 и комбинированной протеазной активности, присутствующей в дегранулятах нейтрофилов, но для других лигандов это еще неизвестно (21). Здесь мы задокументировали (i) биохимические детали обработки IL-7 ферментами нейтрофилов; (ii) биологические эффекты протеолиза на сродство связывания IL-7 с его альфа-цепью рецептора, на опосредованные рецептором сигнальные функции и на рост линии Т-клеток в качестве биологического показателя активности IL-7.Путем сравнения интактного и расщепленного IL-7 и различных гликоформ IL-7 мы смогли установить, что (iii) N-связанные олигосахариды защищают от протеолиза и что (iv) функция дисульфидных мостиков между цистеинами заключается в сохранении молекулы. в сигнальной конформации после протеолиза у человека, тогда как (v) у других видов, включая мышей и крыс, биология этих взаимодействий может быть совершенно иной.

Сначала мы определили, что участок петли между α-спиралями C и D наиболее чувствителен к протеолизу.В частности, эффективный сайт расщепления MMP-9 был идентифицирован между аминокислотными остатками Ala ¹²⁸ и Leu ¹²⁹ . При молярном соотношении ММП-9/ИЛ-7 1:100 почти полное расщепление ИЛ-7 было достигнуто в течение двух часов, что свидетельствует о высокой эффективности этого расщепления in vitro по сравнению с другими известными субстратами ММП-9, такие как желатины, актин и тубулин (36, 37). Кроме того, мы идентифицировали соседний сайт расщепления в IL-7 для NE и P3, расположенный между Ala ¹²⁷ и Ala ¹²⁸ , точно одна аминокислота на N-конце сайта расщепления MMP-9 в доступной внешней петле.Интересно, что мы также показали, что чувствительная к протеазе петлевая область IL-7 отсутствует в мышином и крысином IL-7. Это открытие особенно интересно, учитывая известные иммунологические различия между мышами и мужчинами (38). В контексте нашего исследования наиболее интересные различия связаны с количеством нейтрофилов и системой IL-7/IL-7R. Количество нейтрофилов в крови человека превышает их количество в крови мышей (, см. ниже ). Что касается системы IL-7/IL-7R, то у людей эта система в основном контролирует развитие Т-клеток, а у мышей развитие как Т-клеток, так и В-клеток (32).

Расщепление различных гликоформ IL-7 с помощью MMP-9 привело к образованию двух стабильных фрагментов, различимых при восстановлении SDS-PAGE. Мы тестировали три различные рекомбинантные формы: агликозил IL-7 из E coli , IL-7 с гликанами клеток насекомых и IL-7 с совокупностью гликоформ, продуцируемых в клеточной линии млекопитающих. В соответствии с такими различиями в гликозилировании интактный IL-7, а также расщепленные фрагменты мигрировали с разной молекулярной массой и по-разному окрашивались с использованием кумасси бриллиантового синего после электрофоретического разделения в восстанавливающих условиях.Кроме того, в невосстанавливающих условиях эти фрагменты оставались связанными благодаря наличию внутренних дисульфидных мостиков, удерживая фрагменты IL-7 взаимосвязанными. Как следствие, общая структура оставалась интактной, и IL-7, расщепленный MMP-9, оставался способным индуцировать интернализацию IL-7R, активировать передачу сигнала через pSTAT3 и индуцировать пролиферацию клеток в клеточной линии Т-клеточного лейкоза человека HPB-ALL. Кроме того, в первичных CD8 ⁺ PBMC человека стимуляция интактным IL-7 или расщепленным MMP-9 IL-7 приводила к аналогичному снижению IL-7R на поверхности клетки.

Мы показали, что это явление не ограничивается MMP-9, и что стабильные фрагменты были также обнаружены после расщепления IL-7 другими MMP (MMP-2 и MMP-8), ADAM17, NE и P3, и что также при В этих условиях расщепленный IL-7 оставался способным индуцировать опосредованную IL-7R клеточную пролиферацию. Интересно порассуждать, какова функция этой модификации Ил-7. Одним из возможных объяснений является изменение периода полураспада IL-7 при определенных обстоятельствах, таких как измененное окислительно-восстановительное состояние клеточной среды или компартмента.Например, расщепленный IL-7 может терять структурную целостность в восстанавливающих средах, что приводит к образованию отдельных фрагментов и изменению функциональности IL-7. Такой внутриклеточный процессинг может значительно влиять на рециркуляцию интактного IL-7 по сравнению с расщепленным IL-7. Кроме того, восстановление, внеклеточная модификация сульфгидрильных групп цистеина (, например, путем окисления H ₂ O _2, нитрозилирования или сульфгидрирования) может привести к образованию фрагментов IL-7 с измененной функцией.Всесторонние последующие исследования, охватывающие эти гипотезы, и дальнейшие сравнения в системах клеточных культур с клеточными линиями и специфическими первичными клетками, включая популяции Т-клеток, дадут дополнительную информацию и могут иметь отношение как к клиническому нацеливанию, так и к парентеральному использованию рекомбинантных цитокинов, включая IL- 7.

Гликозилирование белков, как O-, так и N-связанными олигосахаридами, представляет собой посттрансляционные модификации, обладающие способностью защищать от протеолиза (39, 40). Первоначально описанная для активности N-связанных сахаров рибонуклеазы поджелудочной железы в богатой протеазами среде в кишечнике (40), эта функция была распространена на многие молекулы во внутренней среде и даже на внутриклеточные гликопротеины.Олигосахариды также совместно определяют специфическую активность ферментов и сигнальных молекул. Эта функция была также описана для гликозилированных цитокинов около 25 лет назад (41). Хотя период полужизни сигнальных молекул, особенно тех, которые поступают в кровоток, определяется гликозилированием, этому аспекту цитокинов до сих пор уделялось мало внимания. Интересно, что было показано, что гликозилирование эктодомена IL-7Rα модулирует взаимодействие IL-7, причем связывание с гликозилированным IL-7Rα происходит в 300 раз сильнее, чем с негликозилированным IL-7Rα (29).Как это ни парадоксально, в другом исследовании было показано, что гликозилирование IL-7 не влияет на его связывание или активацию IL-7Rα (42). Здесь мы показываем, что гликозилирование IL-7 снижает эффективность протеолиза с помощью MMP-9. Помимо регуляции функций IL-7 уровнями экспрессии, гликозилирование как посттрансляционная модификация добавляет дополнительный способ регуляции системы IL-7/IL-7R и ее функций. Исследования гликозилирования терапевтически используемых цитокинов постепенно привлекают внимание.Например, установлено, что протеолиз интерферона-β (ИФН-β) под действием ММП-9 затруднен гликозилированием (43) и что, возможно, вследствие этого у больных рассеянным склерозом (РС), получавших гликозилированный ИФН, образуется меньше нейтрализующих антител. -β (44). В соответствии с этим и данными настоящего исследования статус гликозилирования IL-7 требует пристального внимания, безусловно, когда IL-7 будет использоваться в терапевтических целях.

В недавнем полногеномном ассоциативном исследовании (45) генетические изменения в α-цепях рецепторов IL-2 и IL-7 (46, 47) были связаны с повышенным риском РС.Следовательно, эта информация наводит на мысль о ключевом вкладе этих сигнальных путей в развитие и/или прогрессирование РС. Кроме того, на основании паттернов экспрессии в очагах поражения, сыворотке и спинномозговой жидкости пациентов с РС была установлена ​​важность протеаз, таких как ММП, НЭ, тканевые калликреины и катепсины, при РС (48). Точно так же передача сигналов, опосредованная IL-7, способствует развитию лейкемии (32, 49), а раковые клетки обычно имеют повышенную продукцию протеаз, таких как MMP-9 и другие MMP (50).Следовательно, модуляция IL-7 протеазами, секретируемыми инфильтрирующими лейкоцитами или раковыми клетками, является вероятным процессом как при РС, так и при раковых патологиях, и эти элементы оправдывают дальнейшее изучение функциональных последствий протеолитического процессинга IL-7. Интересно, что было идентифицировано не так много естественных мутаций в гене IL7 . Описан естественный человеческий вариант IL-7, в котором отсутствует С-концевая часть белка IL-7 (введение центрального стоп-кодона R69X), а соответствующий гомозиготный генотип приводит к заболеванию, называемому бородавчатой ​​эпидермодисплазией-5 (EV5, Интернет-менделевское наследование человека / OMIM 618309) (51).

Одним из ограничений нашего исследования является доказательство MMP- и SP-генерированных фрагментов in vivo . Однако отсутствие чувствительных и специфических методов обнаружения для дифференциального количественного определения фрагментов цитокинов и хемокинов in vivo является хорошо известной проблемой. Например, с широко используемыми технологиями ELISA невозможно различить интактные и расщепленные цитокины, а вестерн-блоттинг менее чувствителен и дает только полуколичественный анализ. Помимо этого аспекта, с имеющейся информацией о структурных различиях между мышиным и человеческим IL-7, обычное использование доклинических моделей мышиных животных в иммунологических исследованиях сопряжено с некоторыми ловушками как на клеточном, так и на молекулярном уровне.На уровне воспалительных клеток, в частности нейтрофилов, являющихся основным типом клеток в настоящем исследовании, существуют значительные различия между мышами и людьми. В физиологии человека и при большинстве патологий нейтрофилы составляют большинство (50-70%) циркулирующих лейкоцитов и, таким образом, являются первыми и наиболее многочисленными участниками острых инфекций и воспалений (52). У видов мышей число нейтрофилов затмевается числом лимфоцитов, что вызывает критическое отношение к этим различиям в трансляционных исследованиях.На уровне взаимодействующих молекул мы предоставляем здесь исходную информацию о различиях между видами с целью беспристрастной интерпретации данных in vivo и сохранения критичности при переводе фенотипов от одного вида к другому.

Наша работа также может быть помещена в контекст недавних клинических применений блокады сигнала IL-7 для лечения лейкемии, лимфомы и аутоиммунных заболеваний. Недавно было обнаружено, что эндогенный ИЛ-7 увеличивает экспрессию онкогенной киназы (PIM1) в клетках с альфа-цепью ИЛ-7 (IL-7Rα/CD127).Это наблюдалось как при Т-ОЛЛ, так и при Т-клеточной острой лимфобластной лимфоме (Т-ЛБЛ) (53). Во-вторых, значение секреции ИЛ-7 первичными клетками Т-ОЛЛ человека как аутокринного стимула положительной обратной связи было подтверждено только недавно, и это открытие побуждает к дальнейшим исследованиям, чтобы интерферировать на интерфейсах ИЛ-7/ИЛ-7R (54). Последний подход достигает зрелости в превосходных новых исследованиях, в которых ксенотрансплантированные клетки T-ALL человека, полученные от пациентов, уничтожаются химерным моноклональным антителом против человеческого IL-7Rα/CD127 in vivo посредством антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (55). .Наши результаты также имеют значение для исследований аутоиммунных заболеваний, в которых протеазно-цитокиновые взаимодействия играют несколько ролей (56). В недавнем исследовании очаговой алопеции, аутоиммунного заболевания волосяных фолликулов, опосредованного Т-клетками, было обнаружено, что блокада IL-7 подавляет острые воспалительные реакции заболевания, в то же время относительно щадя Treg (57).

В заключение мы показываем, что человеческий IL-7 эффективно обрабатывается ферментами нейтрофилов в чувствительной к протеазе петле, образуя протеоформы с дисульфидной связью, сохраняющие связывание с рецептором и сигнальные функции.Человеческий IL-7 представляет собой гликозилированный цитокин, и присоединенные к нему гликаны защищают его от протеолиза нейтрофильными протеазами. Посттрансляционные модификации, включая протеолиз и гликозилирование, заслуживают большего внимания в фундаментальных и прикладных исследованиях цитокинов. Наконец, мы показываем, что мышиный IL-7 не содержит чувствительной к протеазе петли и, следовательно, не расщепляется ММР-9. Этим открытием мы еще больше подкрепляем известные различия в биологии IL-7 между людьми и мышами.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, представленные в этом исследовании, можно найти в онлайн-репозиториях.Названия репозитория/репозиториев и инвентарные номера можно найти в статье/дополнительных материалах.

Вклад авторов

Дизайн исследования: GO, JV, VR, RVSP и EU-B. Проведенные эксперименты и проанализированные данные: все авторы. Написал рукопись: GO, JV и VR, при участии всех авторов. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Это исследование было поддержано Исследовательским фондом Flanders/FWO-Vlaanderen (G0A3820N), финансированием C1 KU Leuven (C16/17/010), Бельгийским фондом Charcot (JV и GO) и Rega Foundation ( ВР, СП).ММ поддерживается исследовательской стипендией «Для женщин в науке» L’Oréal-UNESCO-FWO. Конфликта интересов нет. JV является постдокторантом Исследовательского фонда Фландрии (FWO Vlaanderen, мандат 12Z0920N).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы выражают благодарность Leen Vandermosten, Mieke Gouwy, Mieke De Buck, Noëmie Pörtner, Lotte Vanbrabant и Maaike Cockx за помощь в подготовке клеток.Мы благодарим Пьера Фитена и Эрика Мартенса за их помощь в производстве рекомбинантной MMP-9 человека.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2021.701739/full#supplementary-material

Ссылки

1. Boudil A , Матей И.Р., Ши Х., Богданоски Г., Юань Дж.С., Чанг С.Г. и др. IL-7 координирует пролиферацию, дифференцировку и рекомбинацию Tcra во время бета-селекции тимоцитов. Nat Immunol (2015) 16:397–405. doi: 10.1038/ni.3122

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

2. Шитара С., Хара Т., Лян Б., Вагацума К., Зуклис С., Холландер Г.А. и др. ИЛ-7, продуцируемый эпителиальными клетками тимуса, играет основную роль в развитии тимоцитов и интраэпителиальных лимфоцитов TCR Gammadelta+. J Immunol (2013) 190:6173–9. doi: 10.4049/jimmunol.1202573

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

3.фон Фриден-Джеффри У., Виейра П., Люциан Л.А., Макнейл Т., Бурдах С.Е., Мюррей С. и др. Лимфопения у мышей с удаленным геном интерлейкина (IL)-7 идентифицирует IL-7 как неизбыточный цитокин. J Exp Med (1995) 181:1519–26. doi: 10.1084/jem.181.4.1519

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

5. Tan JT, Dudl E, LeRoy E, Murray R, Sprent J, Weinberg KI, et al. IL-7 имеет решающее значение для гомеостатической пролиферации и выживания наивных Т-клеток. Proc Natl Acad Sci USA (2001) 98:8732–7.doi: 10.1073/pnas.161126098

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

8. Мартин К.Э., Спасова Д.С., Фримпонг-Боатенг К., Ким Х., Ли М., Ким К.С. и соавт. Доступность интерлейкина-7 поддерживается гемопоэтическим стоком цитокинов, состоящим из врожденных лимфоидных клеток и Т-клеток. Иммунитет (2017) 47:171–182 e174. doi: 10.1016/j.immuni.2017.07.005

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

11. Вранькович А., Кроули А.М., Джи К., Кумар А., Ангел Дж. Б.ИЛ-7 снижает экспрессию альфа-рецептора ИЛ-7 (CD127) и индуцирует выделение CD127 человеческими CD8+ Т-клетками. Int Immunol (2007) 19:1329–39. doi: 10.1093/intimm/dxm102

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

12. Liu W, Putnam AL, Xu-Yu Z, Szot GL, Lee MR, Zhu S, et al. Экспрессия CD127 обратно коррелирует с FoxP3 и супрессорной функцией человеческих CD4+ T Reg клеток. J Exp Med (2006) 203:1701–11. doi: 10.1084/jem.20060772

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

13.Перна С.К., Пальяра Д., Махендравада А., Лю Х., Бреннер М.К., Савольдо Б. и др. Интерлейкин-7 опосредует селективную экспансию опухоленаправленных цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ) без усиления регуляторного ингибирования Т-клеток. Clin Cancer Res (2014) 20:131–9. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-13-1016

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

14. Розенберг С.А., Спортес С., Ахмадзаде М., Фрай Т.Дж., Нго Л.Т., Шварц С.Л. и др. Введение ИЛ-7 людям приводит к увеличению числа клеток CD8+ и CD4+, но к относительному снижению количества Т-регуляторных клеток CD4+. J Immunother (2006) 29:313–9. doi: 10.1097/01.cji.0000210386.55951.c2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

15. Sportes C, Hakim FT, Memon SA, Zhang H, Chua KS, Brown MR, et al. Введение rhIL-7 людям увеличивает разнообразие репертуара in vivo TCR за счет предпочтительной экспансии субпопуляций наивных Т-клеток. J Exp Med (2008) 205:1701–14. doi: 10.1084/jem.20071681

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

16.Леви И., Лакабарац С., Вайс Л., Виар Дж., Гужар С., Лельевр Ж.Д. и др. Улучшенное восстановление Т-клеток у взрослых, инфицированных ВИЧ-1, при лечении ИЛ-7. J Clin Invest (2009) 119:997–1007. doi: 10.1172/JCI38052

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

17. Леви Ю., Серети И., Тамбусси Г., Рути Дж. П., Лельевр Дж. Д., Дельфрэсси Дж. Ф. и др. Влияние рекомбинантного интерлейкина 7 человека на восстановление Т-клеток и продукцию тимуса у ВИЧ-инфицированных пациентов, получающих антиретровирусную терапию: результаты рандомизированного, плацебо-контролируемого, многоцентрового исследования фазы I/IIa. Clin Infect Dis (2012) 55:291–300. doi: 10.1093/cid/cis383

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

18. Vicente C, Schwab C, Broux M, Geerdens E, Degryse S, Demeyer S, et al. Целевое секвенирование выявляет ассоциации между мутациями IL7R-JAK и эпигенетическими модуляторами при остром Т-клеточном лимфобластном лейкозе. Haematologica (2015) 100:1301–10. doi: 10.3324/гематол.2015.130179

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

19.Liu Y, Easton J, Shao Y, Maciaszek J, Wang Z, Wilkinson MR, et al. Геномный ландшафт острого лимфобластного лейкоза Т-линии у детей и молодых взрослых. Нат Жене (2017) 49:1211–8. doi: 10.1038/ng.3909

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

20. Vanden Bempt M, Demeyer S, Broux M, De Bie J, Bornschein S, Mentens N, et al. Совместная активация энхансера с помощью TLX1 и STAT5 способствует развитию NUP214-ABL1/TLX1-позитивной Т-клеточной острой лимфобластной лейкемии. Раковая клетка (2018) 34:271–85.e277. doi: 10.1016/j.ccell.2018.07.007

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

21. Рыбакин В., Стас М., Угарте-Берзал Э., Ноппен С., Вандорен Дж., Ван Алст И. и др. Желатиназа B/матриксная металлопротеиназа-9 и другие протеазы нейтрофилов выключают активность интерлейкина-2. Biochem J (2019) 476:2191–208. doi: 10.1042/BCJ20180382

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

22.Шенбек У., Мах Ф., Либби П. Генерация биологически активного ИЛ-1 бета матриксными металлопротеиназами: новый независимый от каспазы-1 путь процессинга ИЛ-1 бета. J Immunol (1998) 161:3340–6.

Реферат PubMed | Google Scholar

23. Van den Steen PE, Proost P, Wuyts A, Van Damme J, Opdenakker G. Нейтрофильная желатиназа B десятикратно усиливает интерлейкин-8 путем аминотерминального процессинга, в то время как она разрушает CTAP-III, PF-4 и GRO- Альфа и оставляет RANTES и MCP-2 нетронутыми. Кровь (2000) 96:2673–81. doi: 10.1182/blood.V96.8.2673

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

24. Masure S, Proost P, Van Damme J, Opdenakker G. Очистка и идентификация нейтрофильной желатиназы 91 кДа. Высвобождение активирующим пептидом интерлейкином-8. Eur J Biochem (1991) 198:391–8. doi: 10.1111/j.1432-1033.1991.tb16027.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

25. Арди В.С., Куприянова Т.А., Дерюгина Е.И., Куигли Дж.П.Нейтрофилы человека уникальным образом высвобождают не содержащую ТИМП ММП-9, обеспечивая мощный каталитический стимулятор ангиогенеза. Proc Natl Acad Sci USA (2007) 104:20262–7. doi: 10.1073/pnas.0706438104

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

26. Sheu BC, Hsu SM, Ho HN, Lien BC, Huang BC, Lin BC, et al. Новая роль металлопротеиназы в иммуносупрессии, опосредованной раком. Cancer Res (2001) 61:237–42.

Реферат PubMed | Академия Google

27.Van den Steen PE, Van Aelst I, Hvidberg V, Piccard H, Fiten P, Jacobsen C, et al. Гемопексин и O-гликозилированные домены регулируют биодоступность желатиназы B/MMP-9 посредством ингибирования и связывания с грузовыми рецепторами. J Biol Chem (2006) 281:18626–37. doi: 10.1074/jbc.M512308200

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

28. Nuti E, Rossello A, Cuffaro D, Camodeca C, Van Bael J, van der Maat D, et al. Бивалентный ингибитор с селективностью в отношении тримерной MMP-9 усиливает хемотаксис нейтрофилов и позволяет проводить функциональные исследования протеоформ MMP-9. Ячейки (2020) 9:1634. doi: 10.3390/cells34

Полный текст CrossRef | Google Scholar

30. Song J, Wang Y, Li F, Akutsu T, Rawlings ND, Webb GI, et al. iProt-Sub: комплексный пакет для точного картирования и прогнозирования специфических для протеаз субстратов и сайтов расщепления. Бриф Биоинформ (2019) 20:638–58. doi: 10.1093/bib/bby028

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

31. Kroemer RT, Kroncke R, Gerdes J, Richards WG.Сравнение 3D-моделей четырех различных изоформ человеческого IL-7 с человеческим и мышиным IL-7. Protein Eng (1998) 11:31–40. doi: 10.1093/protein/11.1.31

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

33. Энрикес С.М., Рино Дж., Ниббс Р.Дж., Грэм Дж.Дж., Барата Дж.Т. ИЛ-7 индуцирует быструю интернализацию, опосредованную клатрином, и JAK3-зависимую деградацию ИЛ-7Rальфа в Т-клетках. Кровь (2010) 115:3269–77. doi: 10.1182/blood-2009-10-246876

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

34.Рорвиг С., Остергаард О., Хегаард Н.Х., Боррегаард Н. Протеомное профилирование подмножеств гранул нейтрофилов человека, секреторных везикул и клеточной мембраны: корреляция с транскриптомным профилированием предшественников нейтрофилов. J Leukoc Biol (2013) 94:711–21. doi: 10.1189/jlb.1212619

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

35. Adrover JM, Aroca-Crevillén A, Crainiciuc G, Ostos F, Rojas-Vega Y, Rubio-Ponce A, et al. Запрограммированное «разоружение» протеома нейтрофилов снижает масштабы воспаления. Nat Immunol (2020) 21:135–44. doi: 10.1038/s41590-019-0571-2

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

36. Cauwe B, Martens E, Van den Steen PE, Proost P, Van Aelst I, Blockmans D, et al. Белок-1/CAP1, ассоциированный с аденилатциклазой, как биологический субстрат-мишень для желатиназы B/MMP-9. Exp Cell Res (2008) 314:2739–49. doi: 10.1016/j.yexcr.2008.07.008

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

37.Van den Steen PE, Proost P, Brand DD, Kang AH, Van Damme J, Opdenakker F, et al. Генерация гликозилированных остаточных эпитопов из человеческого коллагена типа II с помощью желатиназы B. Biochemistry (2004) 43:10809–16. doi: 10.1021/bi0493665

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

39. Гот К.К., Вахрушев С.Ю., Джоши Х.Дж., Клаузен Х., Шьолдагер К.Т. Тонкая настройка ограниченного протеолиза: основная роль регулируемого сайт-специфического O-гликозилирования. Trends Biochem Sci (2018) 43:269–84.doi: 10.1016/j.tibs.2018.02.005

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

40. Rudd PM, Joao HC, Coghill E, Fiten P, Saunders MR, Opdenakker G, et al. Гликоформы изменяют динамическую стабильность и функциональную активность фермента. Биохимия (1994) 33:17–22. doi: 10.1021/bi00167a003

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

42. Goodwin RG, Lupton S, Schmierer A, Hjerrild KJ, Jerzy R, Clevenger W, et al. Человеческий интерлейкин 7: молекулярное клонирование и активность фактора роста в клетках B-линии человека и мыши. Proc Natl Acad Sci USA (1989) 86:302–6. doi: 10.1073/pnas.86.1.302

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

43. Nelissen I, Martens E, Van den Steen PE, Proost P, Ronsse I, Opdenakker G, et al. Желатиназа B/матриксная металлопротеиназа-9 расщепляет интерферон-бета и является мишенью для иммунотерапии. Мозг (2003) 126:1371–81. doi: 10.1093/brain/awg129

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

44. Эйнарсон Т.Р., Береза ​​Б.Г., Мачадо М.Сравнительная эффективность интерферонов при рецидивирующем-ремиттирующем рассеянном склерозе: метаанализ реальных исследований. Curr Med Res Opin (2017) 33:579–93. doi: 10.1080/03007995.2016.1276895

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

45. Международная генетика рассеянного склероза, C. Геномная карта рассеянного склероза указывает на восприимчивость периферических иммунных клеток и микроглии. Наука (2019) 365 (460): eaav7188. doi: 10.1126/наука.aav7188

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

46. Лундмарк Ф., Дювефельт К., Якобеус Э., Кокум И., Вальстрём Э., Хадеми М. и др. Изменение альфа-цепи рецептора интерлейкина 7 (IL7R) влияет на риск рассеянного склероза. Нат Жене (2007) 39:1108–13. doi: 10.1038/ng2106

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

47. Грегори С.Г., Шмидт С., Сет П., Оксенберг Дж. Р., Харт Дж., Прокоп А. и др. Альфа-цепь рецептора интерлейкина 7 (IL7R) показывает аллельную и функциональную связь с рассеянным склерозом. Нат Жене (2007) 39:1083–91. doi: 10.1038/ng2103

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

48. Скарисбрик И.А. Деградация рассеянного склероза: ферментативные каскады в развитии и прогрессировании воспалительного заболевания центральной нервной системы. Curr Top Microbiol Immunol (2008) 318:133–75. doi: 10.1007/978-3-540-73677-6_6

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

49. Рич Б.Е., Кампос-Торрес Дж., Теппер Р.И., Мореадит Р.В., Ледер П.Кожная лимфопролиферация и лимфомы у трансгенных мышей с интерлейкином 7. J Exp Med (1993) 177:305–16. doi: 10.1084/jem.177.2.305

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

50. Kamiguti AS, Lee ES, Till KJ, Harris RJ, Glenn MA, Lin K, et al. Роль матриксной металлопротеиназы 9 в патогенезе хронического лимфоцитарного лейкоза. Br J Haematol (2004) 125:128–40. doi: 10.1111/j.1365-2141.2004.04877.x

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

51.Хорев Л., Унгер С., Молхо-Пессах В., Меир Т., Малый А., Степенский П. и др. Генерализованный веррукоз и восприимчивость к ВПЧ-3, связанные с Т-клеточной лимфопенией CD4, вызванной наследственным дефицитом человеческого интерлейкина-7. J Am Acad Dermatol (2015) 72:1082–4. doi: 10.1016/j.jaad.2015.02.1118

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

53. De Smedt R, Morscio J, Reunes L, Roels J, Bardelli V, Lintermans B, et al. Ориентация на активацию PIM1, вызванную цитокинами и терапией, в доклинических моделях Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза и лимфомы. Кровь (2020) 135:1685–95. doi: 10.1182/blood.201

80

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

54. Buffière A, Uzan B, Aucagne R, Hermetet F, Mas M, Nassurdine S, et al. Т-клеточный лимфобластный лейкоз демонстрирует аутокринную продукцию интерлейкина-7. Онкоген (2019) 38:7357–65. doi: 10.1038/s41388-019-0921-4

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

55. Hixon JA, Andrews C, Kashi L, Kohnhorst CL, Senkevitch E, Czarra K, et al.Новые моноклональные антитела против IL-7Rα демонстрируют эффективность против Т-клеточного острого лимфобластного лейкоза в доклинических моделях. Лейкемия (2020) 34:35–49. doi: 10.1038/s41375-019-0531-8

PubMed Abstract | Полный текст перекрестной ссылки | Google Scholar

56.