Змз 408: Двигатель змз 408. — Двигатель

alexxlabОпубликовано

Содержание

ГАЗ ГАЗЕЛЬ ГАЗ ГАЗЕЛЬ 3221-408 (ЗМЗ-40522.10)

ГАЗ ГАЗЕЛЬ 3221-408 (ЗМЗ-40522.10) — технические характеристики

Этот сайт использует куки (cookie). Просматривая разделы сайта и используя его функции, вы даете согласие на применение куки. Отключить куки можно в настройках браузера.


К сожалению, фотографии у ГАЗ ГАЗЕЛЬ 3221-408 (ЗМЗ-40522.10) отсутствуют. Но Вы можете добавить своих.

  • Вид транспорталёгкие коммерческие
  • МаркаГАЗ
  • МодельГАЗЕЛЬ
  • Серия3221
  • Модификация3221-408 (ЗМЗ-40522. 10)
  • Время разгона до 100 км/ч40 с
  • Время разгона до 60 км/ч14 с
  • Высота автомобиля2200 мм
  • Диаметр разворота11 м
  • Длина автомобиля5500 мм
  • Дорожный просвет170 мм
  • Задние тормозаБарабанные
  • Кол-во передач (мех коробка)5
  • Колесная база2900 мм
  • Колесные диски, размерность5 1/2J x 16
  • Колея передних колес1700/1560 мм
  • Количество клапанов на цилиндр4
  • Количество цилиндров4
  • Крутящий момент210 Н*м
  • Крутящий момент при оборотах4200 мин-1
  • Максимальная скорость115 км/час
  • Модель двигателяЗМЗ-40522.10
  • Мощность двигателя
    152 л.с.
  • Мощность двигателя при оборотах5200 мин-1
  • Объем двигателя2460 см³
  • Объем топливного бака60 л
  • Передние тормозаДисковые
  • Полная масса автомобиля3500 кг
  • При оборотах4200 мин-1
  • ПриводЗадний
  • Расположение цилиндроврядное
  • Расход топлива смешанный цикл11. 5 л/100 км
  • Снаряжённая масса автомобиля2400 кг
  • Степень сжатия9,3
  • Тип двигателяБензиновый
  • Тип задней подвескиРессорная
  • Тип кузоваЦельнометаллический фургон
  • Тип передней подвескиРессорная
  • Тип рулевого управленияВинт — шариковая гайка
  • ТопливоАИ-92
  • Усилитель руляГидроусилитель
  • Число мест9
  • Шины, размерность
    175R16C или 185R16C
  • Ширина автомобиля1966 мм
  • Экологический стандартEURO II

Нормы расхода топлива на грузовые бортовые автомобили

Обязательные (О)/ Рекомендуемые (Р)Марка, модель автомобиляЛинейная норма, л/100 км, куб.м/100 км
О3301 «Радзимич» (дв. Д-245.30Е2, i г.п.=4,87515,4 Д
ОAvia A-20P, -A-20H, -A-21K, -A-21N (дв. 712-18.1)10,5 Д
ОAvia A-30KCN, -A-30N, -A31N, -A-31P (дв. 712-18.0)12,4 Д
OBAW BJ1044P1U52 3,2TDi (76 kW)10,1 Д
ОChevrolet Cargo Truck 6,2D (110 kW) 4WD14,1 Д
ОDaewoo Labo 0,8 (28 kW)6,7 Б
ОFiat 290 2,5D (55 kW)9,0 Д
ОFord Transit 190EF 2,0i (85 kW) 12,0 Б
ОFord Transit 350 2,4D (55 kW)9,5 Д
ОIFA W 50L19,0 Д
ОIveco 190-30 (221 kW)23,9 Д
ОIveco Daily 50C15 3,0HPi (107 kW)12,0 Д
ОIveco Magirus 110-17A (дв. BF6L913C)20,4 Д
ОIveco Magirus 232 D 19L22,8 Д
ОIveco Magirus 290 D 26L32,3 Д
ОIveco Turbo Daily 35. 12 2,8TD (90 kW)9,5 Д
ОIveco Turbo Daily 49.10 2,5TD (76 kW)10,8 Д
ОIveco Turbo Daily 49.12 2,8TD (88 kW)11,8 Д
ОIveсo Daily 50C13 (92 kW)12,4 Д
ОJeep Truck Comanche 2,4i11,9 Б
ОMAN 15.192F19,2 Д
ОMAN 8.113 (121 kW)13,7 Д
ОMAN 9.15314,8 Д
ОMercedes Benz 1017 (дв. ЯМЗ-238)24,7 Д
ОMercedes Benz 1418 6,0D21,7 Д
ОMercedes Benz 1613L17,8 Д
ОMercedes Benz 162223,1 Д
ОMercedes Benz 182023,4 Д
ОMercedes Benz 1827, 1827L20,6 Д
ОMercedes Benz 207 1,812,3 Б
ОMercedes Benz 208D 2,3D (58 kW)9,0 Д
ОMercedes Benz 309 3,0D (дв. ОМ617, 66 kW)9,7 Д
ОMercedes Benz 310D 2,9D9,1 Д
ОMercedes Benz 410D 2,9D (70 kW)10,5 Д
О Mercedes Benz 412D 2,9TD (90 kW)10,9 Д
ОMercedes Benz 507D 2,4D9,9 Д
ОMercedes Benz 511D 2,2CDi (80 kW)10,5 Д
ОMercedes Benz 515 2,2Cdi (110 kW) «Sprinter»12,2 Д
ОMercedes Benz 611D 4,0D12,4 Д
ОMercedes Benz 814D (дв. OM 366.1)13,6 Д
ОMitsubishi Conter 2,5D (55 kW)10,9 Д
ОMudan MD 1042L 2,8TDi (дв. Iveco Sofim 8140.43S, 92 kW) изотермический13,5 Д
ОPeugeot Boxer 2,8HDi (93 kW)10,1 Д
ОPeugeot Boxer PT CA335 L3 2,2HDi (88 kW)8,6 Д
ОRenault Mascott 120. 65 3,0TDi (85 kW)11,2 Д
ОRenault Mascott 130.65 3,0Dxi (95 kW)13,3 Д
ORenault Master 2,5dCi (84 kW)9,7 Д
ОScania 143HL (368 kW) 6×434,3 Д
ОSkoda 706 RT23,8 Д
ОTatra 111R31,4 Д
ОTatra 81538,0 Д
ОVolkswagen Crafter 35MR 2,5TDi (100kW, i г.п.= 4.364)9,6 Д
ОVolkswagen Crafter 50 2,5TDi (100 kW,i г.п.= 5.1)10,5 Д
ОVolkswagen LT31 2,4 (66 kW)15,2 Б
ОVolkswagen LT35 2,4D (57 kW)9,6 Д
ОVolkswagen LT55 2,4TD (70 kW)11,3 Д
PVolkswagen LT50 2,4TD (70 kW)11,6 Д
ОVolkswagen LT28 2,5TD (70 kW)9,6 Д
ОVolkswagen Transporter 1,6D (37 kW)7,7 Д
P
Volkswagen Transporter T5 LR 2,0TDi (103 kW)		8,1 Д
ОГАЗ-278472 (шасси ГАЗ-3308, дв. Д-245.7Е2) 4×418,1 Д
ОГАЗ-3302 (дв. ЗМЗ-4063А)14,7 Б
PГАЗ-3302-531 (дв. ГАЗ-5602)10,2 Д
ОГАЗ-330202-218 (дв. УМЗ-421600)13,8 Б
ОГАЗ-330202-408 (дв. ЗМЗ-405240)12,8 Б
ОГАЗ-3302-077 (дв. 4Cti 90-1BE)9,6 Д
ОГАЗ-33021 (дв. ЗМЗ-4026.10)14,5 Б
14,7 СПГ 19,0 СУГ
ОГАЗ-33021 (УМЗ-4215СР)15,4 Б
15,6 СПГ
ОГАЗ-3302-10 (дв. ЗМЗ-40260F, -4026.10)14,5 Б
19,0 СУГ
ОГАЗ-33023 (дв. ЗМЗ-4026.10)15,2 СПГ
ОГАЗ-33023 (дв. ЗМЗ-4063, -4063ОА)14,7 Б
ОГАЗ-330230 (дв. УМЗ-4215)15,4 Б
ОГАЗ-3307 (дв. ЗМЗ-511)29,9 СУГ 24,2 СПГ
ОГАЗ-3307 (дв. ЗМЗ-5130ОМ)23,8 Б
ОГАЗ-3307, -30 (дв. ЗМЗ-53)23,8 Б
23,8 СПГ 29,9 СУГ
ОГАЗ-3307-12, -14 (дв. ЗМЗ-5130ОМ, -5130ОН)23,8 Б
29,9 СУГ
ОГАЗ-33073 (дв. ЗМЗ-513)23,8 Б
ОГАЗ-33081 (дв. Д-245.7)18,1 Д
ОГАЗ-3309 (дв. Д-245.7, -245.7Е3)15,2 Д
ОГАЗ-4301 (дв. Д-243)14,1 Д
ОГАЗ-4301 (дв. Д-245.12С-231Д) 15,9 Д
ОГАЗ-52 (дв. Д-240, i г.п.= 6.8313,5 Д
ОГАЗ-52 (дв. Д-245)15,0 Д
ОГАЗ-52 (дв. ЗМЗ-511)23,8 Б
ОГАЗ-52, -52А, -52-01, -52-02, -52-03, -52-04, -52-05, -52-54, -52-74 (дв. ГАЗ-52)20,9 Б
21,4 СПГ
ОГАЗ-52-04 (дв. Д-243)13,6 Д
ОГАЗ-52-04Д (дв. Д-240)13,5 Д
PГАЗ-5204 (дв. ЗМЗ-53)25,0 Б
ОГАЗ-52-07, -08, -0928,5 СУГ
ОГАЗ-52-2721,4 Б
ОГАЗ-52-2720,4 СПГ
ОГАЗ-52-2820,9 СПГ
ОГАЗ-53 (дв. Д-240,i г.п.= 6.8314,2 Д
ОГАЗ-53 (дв. ЗМЗ-53)23,8 Б
24,7 СПГ
28,5 СУГ
ОГАЗ-53, -53А, -5312, -3307 (дв. Д-243)14,3 Д
ОГАЗ-53А, -53Ф, -53-12, -53-12-016, -53-12А, -53-19, -53-50, -53-70, -53-07 (дв. ЗМЗ-53)23,8 Б
ОГАЗ-5312 (дв. Д-245.12С)14,9 Д
ОГАЗ-53-2725,2 Б
24,7 СПГ
ОГАЗ-53А (дв. Д-240)14,2 Д
ОГАЗ-66 (дв. Д-243)16,2 Д
ОГАЗ-66 (дв. ЗМЗ-66)37,1 СУГ
PГАЗ-66 (дв. ЗМЗ-513)29,0 Б
ОГАЗ-66, -66А, -66АЭ, -66Э, -66-01, -66-02, -66-04, -66-05, -66-11 (дв. ЗМЗ-66)27,6 Б
ОГАЗ-66-01 (дв. ЗМЗ-66)26,7 СПГ
PГАРЗ-3302 «Радимич» (дв. Isuzu 4HK1-XS), i г.п.= 4.7813,0 Д
ОЗИЛ 133Г, -133Г1, -133Г2, -133ГУ36,1 Б
ОЗИЛ-130 (дв. ЗИЛ-375)33,3 Б
ОЗИЛ-130 (дв. ЗИЛ-508)29,5 Б
30,3 СПГ 35,9 СУГ
ОЗИЛ-130, -130-80, -130А1, -130Г, -130С, -130ГУ, -130-76, -130Г-76, -130Г2-76, -130С-76, -130Г-80, -130ГУ-80 (дв. ЗИЛ-130, -508.10)29,5 Б
ОЗИЛ-130-80 (дв. ЗИЛ-508.10)35,9 СУГ
ОЗИЛ-130Г (дв. ЗИЛ-509.10)33,3 Б
ОЗИЛ-130Г-30 (дв. ЗИЛ-509)34,2 Б
ОЗИЛ-130Д, -431410 (дв. Д-243)19,5 Д
ОЗИЛ-131, -131А (дв. Д-245, -245.12)25,2 Д
ОЗИЛ-131, -131А (дв. ЗИЛ-131)39,9 Б
ОЗИЛ-133ГЯ (дв. ЗИЛ-645)24,2 Д
ОЗИЛ-138 (дв. ЗИЛ-375)35,4 Б
ОЗИЛ-138 (дв. ЗИЛ-508)29,5 СПГ
ОЗИЛ-138 (дв. ЗИЛ-508.10)39,9 СУГ
ОЗИЛ-138А, -431610, -138АГ32,2 Б
32,5 СПГ
ОЗИЛ-164, -164А, -164АД, -164АР, -164Р (дв. ЗИЛ-508.10)29,5 Б
ОЗИЛ-431410 (дв. ЗИЛ-130)34,2 СУГ
ОЗИЛ-431410 (дв. ЗИЛ-508)30,8 СПГ
ОЗИЛ-431410, -130, -130Д (дв. Д-245)18,1 Д
ОЗИЛ-431410, -431411, -431412, -431416, -431417, -431450, -431510, -431516, -431610, -431917 (дв. ЗИЛ-508, ЗИЛ-508.10)29,5 Б
ОЗИЛ-431412 (дв. ЗИЛ-130)34,2 СУГ
ОЗИЛ-431518 (дв. ЗИЛ-508)32,1 СПГ
ОЗИЛ-431610 (дв. ЗИЛ-375)36,1 СПГ 46,9 СУГ
ОЗИЛ-431610 (дв. ЗИЛ-508.10)35,9 СПГ 39,9 СУГ
ОЗИЛ-432910 (дв. ЗИЛ-645)19,0 Д
ОЗИЛ-432930 (дв. Д-245.9Е3)18,1 Д
ОЗИЛ-4331 (дв. Д-245.12)19,0 Д
ОЗИЛ-4331 (дв. Д-260.1)20,2 Д
ОЗИЛ-4331 (дв. ЗИЛ-375)33,3 Б
PЗИЛ-4331 (дв. ЗИЛ-645)25,2 Д
ОЗИЛ-4331 (дв. КамАЗ-740.10)23,5 Д
ОЗИЛ-4331 (дв. ЯМЗ-236, -236М2)20,7 Д
ОЗИЛ-433110 (дв. ЗИЛ-508.10)30,8 Б
35,9 СУГ
ОЗИЛ-433360 (дв. Д-245)15,2 Д
ОЗИЛ-433360 (дв. ЗИЛ-375)29,5 Б
ОЗИЛ-433360 (дв. ЗИЛ-508)28,9 Б
35,9 СУГ
ОЗИЛ-433360 (дв. ЗИЛ-509)40,3 СУГ
ОЗИЛ-433360-27 (дв. ЗИЛ-508.10)39,9 СУГ
ОЗИЛ-433362 (дв. ЗИЛ-375)29,5 Б
ОЗИЛ-433362 (дв. ЗИЛ-508.10)39,9 СУГ
ОЗИЛ-5301АО (дв. Д-245)14,5 Д
ОЗИЛ-5301ВЕ (дв. Д-245.9Е2)13,3 Д
ОЗИЛ-534330 (дв. ЯМЗ-236А)21,9 Д
ОКамАЗ-4308 (дв. Cummins B180 20, 131 kW)17,4 Д
ОКамАЗ-4310 (дв. КамАЗ-740)30,1 Д
ОКамАЗ-43105 (дв. КамАЗ-740)29,5 Д
OКамАЗ-4320 (дв. КамАЗ-740)24,0 Д
ОКамАЗ-5320 (дв. ЯМЗ-236)24,2 Д
ОКамАЗ-5320 (дв. ЯМЗ-238М2)27,7 Д
ОКамАЗ-5320 (дв. КамАЗ-740)23,8 Д
О КамАЗ-5320 (дв. КамАЗ-740, = 9050 кг)26,6 Д
ОКамАЗ-53202, -53212, -53213 (дв. КамАЗ-740.11-240)24,2 Д
OКамАЗ-53213 (дв. КамАЗ-740.10, i г.п.=6,5328,0 Д
ОКамАЗ-53215R (дв. КамАЗ-740.31-240)22,8 Д
OМАЗ-533632-320 (дв. Deutz BF6M1013FC, 180 kW)23,3 Д
OМАЗ-5340А5-320 (дв. ЯМЗ-6582.10)28,8 Д
OМАЗ-5340А5-370 (дв. ЯМЗ-6581.10)28,8 Д
OМАЗ-6303А8-323 (дв. ЯМЗ-6581.10)31,5 Д
ОКамАЗ-65117-030-62 (дв. КамАЗ-740.62-280)27,7 Д
ОКрАЗ-257, -257Б1, -257С, -255Б, -255Б138,0 Д
ОКрАЗ-257БС36,1 Д
ОКрАЗ-257В (дв. ЯМЗ-238А)36,1 Д
ОКрАЗ-260, -260М, -260Б140,4 Д
ОМ-2335 (дв. ВАЗ-2106)8,6 Б
ОМАЗ-437041-268 (дв. Д-245.30Е2)16,5 Д
ОМАЗ-437041-269 (дв. Д-245.30Е2)16,5 Д
ОМАЗ-437043, -328, -329 (дв. Д-245.30Е3)18,0 Д
ОМАЗ-437143, -328, -329 (дв. Д-245.30Е3)18,0 Д
ОМАЗ-500 (дв. ЯМЗ-238, i г.п. =7,24) (с закрытым кузовом, М=7800 кг26,6 Д
ОМАЗ-500, -500А, -500АС, -500АТ, -500В, -5335 (дв. ЯМЗ-236)21,9 Д
ОМАЗ-514 (дв. ЯМЗ-236)24,2 Д
ОМАЗ-516, -516Б (дв. ЯМЗ-236)24,7 Д
ОМАЗ-5334 (дв. ЯМЗ-238)26,2 Д
ОМАЗ-5334 спецшасси АБКС-5 (дв. ЯМЗ-236)31,4 Д
ОМАЗ-5334, -533501, -5337, -53371 (дв. ЯМЗ-236)21,9 Д
ОМАЗ-5335 (дв. ЯМЗ-238)26,6 Д
ОМАЗ-53352 (дв. ЯМЗ-238Е)22,8 Д
ОМАЗ-5336 (дв. ЯМЗ-238)27,1 Д
ОМАЗ-533602-2120 (дв. ЯМЗ-236НЕ2)24,1 Д
ОМАЗ-533603, -220, -2123 (дв. ЯМЗ-236БЕ-12, -236БЕ, -236БЕ-2)23,6 Д
ОМАЗ-533605-020, -220 (дв. ЯМЗ-238ДЕ2)25,8 Д
ОМАЗ-53362 (дв. ЯМЗ-238Б)27,1 Д
ОМАЗ-53363, -53363-020, -5336030-020, -5336030-021, -533630-2120 (дв. ЯМЗ-238Д, -238ДЕ, -238ДЕ6, -238-2ДЕ)26,0 Д
ОМАЗ-53366 (дв. ЯМЗ-238)26,9 Д
ОМАЗ-53366-020 (дв. ЯМЗ-238М2)29,0 Д
ОМАЗ-5336А3,-5336А3-320 (дв. ЯМЗ-6562.10)24,8 Д
ОМАЗ-5336А5,-5336А5-320 (дв. ЯМЗ-6582.10)26,0 Д
PМА3-530905-225-025Р (дв. ЯМЗ-238ДЕ2) 4 x 440,0 Д
ОМАЗ-533702-020,-2120 (дв. ЯМЗ-236НЕ)24,1 Д
ОМАЗ-53371 (дв. ЯМЗ-236М2)24,5 Д
ОМАЗ-53371 (дв. ЯМЗ-238,-238Д-1)26,0 Д
ОМАЗ-53371 (дв. ЯМЗ-238М)26,9 Д
ОМАЗ-53371 (дв. ЯМЗ-238Н)25,1 Д
ОМАЗ-53371 (дв. ЯМЗ-236) i г.п. = 7,7924,3 Д
ОМАЗ-53371-029 (дв. ЯМЗ-238М2)26,9 Д
ОМАЗ-5337А2-340 (дв. ЯМЗ-6563.10)24,8 Д
PМА3-5340А5-370-015 (дв. ЯМЗ-6582.10)28,8 Д
ОМАЗ-54342 (дв. ЯМЗ-238)32,7 Д
ОМАЗ-630300-2120 (дв. ЯМЗ-238ДЕ)27,9 Д
ОМАЗ-630303 (дв. ЯМЗ-236БЕ-2-8)25,7 Д
PМА3-630305-220 (дв. ЯМЗ-238ДЕ2)32,0 Д
ОМАЗ-630305-020 (дв. ЯМЗ-238ДЕ-2)28,3 Д
ОМАЗ-630308-020, -023, -223 (дв. ЯМЗ-7511.10)27,6 Д
ОМАЗ-63039-40 (дв. ЯМЗ-238Д)33,3 Д
ОМАЗ-6303А5-320 (дв. ЯМЗ-6582.10)31,2 Д
ОМАЗ-6312А8-360-015 (дв. ЯМЗ-6581.10)30,2 Д
ОМАЗ-631708-062 (дв. ЯМЗ-238Д) 6×644,3 Д
ОМАЗ-MAN-630268 (дв. MAN D2866LF25, 301 kW)25,7 Д
ОМосквич-2335-2 (дв. УМЗ-3317)9,8 Б
ОУАЗ-3303 (дв. УМЗ-414) 4WD18,5 СУГ
ОУАЗ-3303 (дв. УМЗ-4178, -4178.10, -4178ОВ) 4WD15,7 Б
17,6 СУГ
ОУАЗ-3303 (дв. УМЗ-4218) 4WD15,2 Б
PУАЗ-3303 (дв. УМЗ-417800) 4WD16,5 Б
ОУАЗ-3303-01 (дв. ЗМЗ-402) 4WD14,8 Б
ОУАЗ-3303-01 (дв. УМЗ-4218) 4WD17,8 СУГ
ОУАЗ-3303-01 (дв. УМЗ-4178) 4WD16,1 СПГ
ОУАЗ-3303-024 (дв. УМЗ-4178) 4WD15,7 Б
OУАЗ-33032-01 (дв. ЗМЗ-24-01)16,8 Б
ОУАЗ-33032-01 (дв. УМЗ-4178.10) 4WD16,0 Б
ОУАЗ-33039 (дв. УМЗ-4218.10) 4WD15,3 Б
ОУАЗ-33039-24 (дв. УМЗ-4218) 4WD15,2 Б
ОУАЗ-39094 (дв. УМЗ-4218) 4WD18,5 СУГ
ОУАЗ-450, -450Д, -452Г, -452ДМ, -452Д, -451, -451Д, -451ДМ 4WD16,2 Б
ОУрал-375, -375Д, -375К, -375Т, -375Ю, -375Н (дв. ЗИЛ-375) 6×658,0 Б
ОУрал-375Н (дв. ЯМЗ-236)35,7 Д
ОУрал-377, -377А (дв. ЗИЛ-375) 6×441,8 Б
ОУрал-4320 (дв. КамАЗ-740.10) 6×6 i г.п.=8,932,2 Д
ОУрал-4320, -43202 (дв. КамАЗ-740.13-260) 6×630,4 Д
ОУрал-4320-0611-31 (дв. ЯМЗ-238М2) 6×631,8 Д
РMAN TGM 18,330 СКАТ N32051п (243 kW)23,0 Д
РMercedes-Benz 1218L «Atego» (дв. ОМ 904LA, 130 kW)16,0 Д
РMercedes-Benz 1522L «Atego» (дв. ОМ 924LA; 160 kW)18,5 Д

Тендер 0351300093420000069: Поставка запасных частей для легковых автомобилей

ПозицияКол-воЕд. изм.ЦенаСуммаДоля
1. Дифференциал УАЗ с главной парой в сборе 1 шт 8 714,67 ₽ 8 714,67 ₽ 5,20%
2. Автолампа АКГ 12-60-55 Н4 цоколь 43 40 шт 50,67 ₽ 2 026,80 ₽ 1,21%
3. Замок двери ГАЗ 3302 лев. (механизм рычажный) 2 шт 221,00 ₽ 442,00 ₽ 0,26%
4. Рычаг стояночного тормоза ГАЗ 3302 в сб. 2 шт 2 157,67 ₽ 4 315,34 ₽ 2,57%
5. Рессора ГАЗ 3302 перед. (2-х лист.) н/обр. (с ухом) со втулками 2 шт 3 113,33 ₽ 6 226,66 ₽ 3,71%
6. Рессора ГАЗ 3302 перед. (2-х лист.) н/обр. (без уха) со втулками 2 шт 2 967,33 ₽ 5 934,66 ₽ 3,54%
7. Стремянка ресс. ГАЗ 2203 зад. (170мм) (3-х лист. Подр.) в сб. 4 шт 92,33 ₽ 369,32 ₽ 0,22%
8. Крышка КПП УАЗ 452 ст/обр. в сб. 1 шт 5 036,67 ₽ 5 036,67 ₽ 3,00%
9. Вал карданный УАЗ 452 перед. (Эксперт) (крест. С тавот.) (3741-2203010) 1 шт 3 501,67 ₽ 3 501,67 ₽ 2,09%
10. Вал карданный УАЗ 452 зад. (Эксперт) (крест. С тавот.) (3741-2203010) 1 шт 3 408,67 ₽ 3 408,67 ₽ 2,03%
11. Замок заж. ГАЗ 3302, 2217 (7-ми контакт) 2 шт 375,67 ₽ 751,34 ₽ 0,45%
12. Тяга продольная ГАЗ 3302 в сб. 1 шт 578,67 ₽ 578,67 ₽ 0,35%
13. Механизм рул. Управления ГАЗ 3302 (чугун) 1 шт 7 377,33 ₽ 7 377,33 ₽ 4,40%
14. Ролик натяжителя ЗМЗ 406 не в сб. 2 шт 155,67 ₽ 311,34 ₽ 0,19%
15. Модуль погруж. э/бензон. ГАЗ 3302 дв. ЗМЗ 405 1 шт 2 366,67 ₽ 2 366,67 ₽ 1,41%
16. Кулиса (механизм уравл. Перекл. Передач) КПП УАЗ 452 2 шт 877,67 ₽ 1 755,34 ₽ 1,05%
17. Насос масляный ЗМЗ 406 в сб. (450228) 1 шт 1 460,00 ₽ 1 460,00 ₽ 0,87%
18. Суппорт передн. тормоза ГАЗ 3110, 3302 в сб. (в упак) 1 шт 2 440,00 ₽ 2 440,00 ₽ 1,46%
19. Суппорт передн. тормоза ГАЗ 3110, 3302 в сб. (в упак) 1 шт 2 440,00 ₽ 2 440,00 ₽ 1,46%
20. радиатор ГАЗ 3302 2-рядный медный н/обр 1 шт 5 487,33 ₽ 5 487,33 ₽ 3,27%
21. Вилка сцепления ГАЗ 3302, УАЗ с опорной вилкой (в упак) (11-7514) 2 шт 163,33 ₽ 326,66 ₽ 0,19%
22. Наконечник рулевой тяги ГАЗ 3302 прав. в сб. SP32109C3 2 шт 288,67 ₽ 577,34 ₽ 0,34%
23. Ступица ГАЗ 3302 передняя с подшипниками 2 шт 1 805,00 ₽ 3 610,00 ₽ 2,15%
24. Наконечник рулевой тяги ГАЗ 3302 лев. в сб. SP31109C3 2 шт 288,67 ₽ 577,34 ₽ 0,34%
25. Вал карданный рул. Упр. ГАЗ 3302, 33027 с ГУР в сб. 1 шт 3 067,67 ₽ 3 067,67 ₽ 1,83%
26. Опора пром. Кард./вала (подшип.подв.) ГАЗ 3110, 3302 в сб. (усил) (в упак.) Люкс 2 шт 252,00 ₽ 504,00 ₽ 0,30%
27. Термостат ТС 107-04 (87градуса) ГАЗ 31029, УМЗ 421 4 шт 198,33 ₽ 793,32 ₽ 0,47%
28. Радиатор водяной УАЗ 46, 3151 дв. УМЗ 4179.10, УАЗ 452, 31512, 39092206, 39094 дв. УМЗ 4178.10 медный, 2-рядный 1 шт 9 228,33 ₽ 9 228,33 ₽ 5,50%
29. Крышка радиатора ГАЗ 2, 3102, УАЗ 2 шт 123,33 ₽ 246,66 ₽ 0,15%
30. Ремень 6РК-1370 дв. 406 с ГУР 3 шт 244,00 ₽ 732,00 ₽ 0,44%
31. Кулак поворотный ГАЗ 3302 лев. с АБС 1 шт 2 863,33 ₽ 2 863,33 ₽ 1,71%
32. Кулак поворотный ГАЗ 3302 прав. с АБС 1 шт 2 870,67 ₽ 2 870,67 ₽ 1,71%
33. Вал промежуточный КПП ГАЗ 3302 (36 зуб.) без подшип. (в упак.) 1 шт 3 643,67 ₽ 3 643,67 ₽ 2,17%
34. Тяга поперечная ГАЗ 3302 в сб. 1 шт 1 136,00 ₽ 1 136,00 ₽ 0,68%
35. Вал первичный КПП ГАЗ 3302, 2217 (25 зуб.) в сб. (в упак.) 1 шт 2 382,33 ₽ 2 382,33 ₽ 1,42%
36. Фильтр масляный ЗМЗ 405, 406, 409 (белый) (МХ100238, ФСМ 228М) 4 шт 120,00 ₽ 480,00 ₽ 0,29%
37. Крышка (прилив) стартера ЗМЗ 405, 406, 409 2 шт 292,00 ₽ 584,00 ₽ 0,35%
38. Фланец хвост. Заднего моста ГАЗ 31029, 3110, 2217, 3302 мелкий шлиц (в упак) 1 шт 456,67 ₽ 456,67 ₽ 0,27%
39. Стеклоочиститель ГАЗ 3302, 2217 в сб. (60.5205) 1 шт 2 396,00 ₽ 2 396,00 ₽ 1,43%
40. Автолапма 12-5 20 шт 5,00 ₽ 100,00 ₽ 0,06%
41. Автолампа АКГ 12-55 Н7 (ГАЗ 3302 н/обр) 10 шт 53,33 ₽ 533,30 ₽ 0,32%
42. Диодный мост генер. ЗМЗ 406 90А (для БАТЭ.3212.3771) 2 шт 480,67 ₽ 961,34 ₽ 0,57%
43. Кронштейн промежуточных рычагов КПП УАЗ 452 в сборе 2 шт 704,00 ₽ 1 408,00 ₽ 0,84%
44. Кронштейн ГАЗ 3302 крепл. Перед. Аморт. Верх.лев. 2 шт 502,67 ₽ 1 005,34 ₽ 0,60%
45. Кронштейн ГАЗ 3302 крепл. Перед. Аморт. Верх.прав. 2 шт 498,00 ₽ 996,00 ₽ 0,59%
46. Крышка цепи передняя ЗМЗ 406 с сальником (451229) 1 шт 1 481,33 ₽ 1 481,33 ₽ 0,88%
47. Педаль газа ГАЗ 3302 в сб. 00003026 2 шт 404,00 ₽ 808,00 ₽ 0,48%
48. Полуось заднего моста ГАЗ 3302 2 шт 1 459,33 ₽ 2 918,66 ₽ 1,74%
49. Поперечина крепления двигателя ГАЗ 3302 (дв. ЗМЗ) 2 шт 468,33 ₽ 936,66 ₽ 0,56%
50. Привод стартера ГАЗ 24, УАЗ (931.3708.018) 4 шт 260,00 ₽ 1 040,00 ₽ 0,62%
51. Головка блока ГАЗ 53, 66, ПАЗ в сб. (прокладка, крепеж, штанги) 2 шт 15 294,00 ₽ 30 588,00 ₽ 18,24%
52. Рычаг щетки с/очист. ГАЗ 3302, 2217 4 шт 117,67 ₽ 470,68 ₽ 0,28%
53. Цапфа поворотного кулака УАЗ в сборе 2 шт 1 506,33 ₽ 3 012,66 ₽ 1,80%
54. Ступица ГАЗ 3302 задн. с подшипниками 2 шт 1 841,67 ₽ 3 683,34 ₽ 2,20%
55. Термостат с корпусом УАЗ дв. ЗМЗ 4091 в сб. 1 шт 3 378,67 ₽ 3 378,67 ₽ 2,02%
56. Наконечник рулевой тяги УАЗ прав. в сб. (Стандарт) 4 шт 242,33 ₽ 969,32 ₽ 0,58%
57. Ремень 6РК-1220 дв. 406 3 шт 253,33 ₽ 759,99 ₽ 0,45%
58. Автолампа 12-21 20 шт 6,33 ₽ 126,60 ₽ 0,08%
59. К-т натяжного устройства ЗМЗ 405, 406, 409 полный «Золотая серия» (451187) 1 компл 3 496,33 ₽ 3 496,33 ₽ 2,09%
60. р/к главной передачи ГАЗ 3302 полный 2 компл 1 720,67 ₽ 3 441,34 ₽ 2,05%
61. Шкворень УАЗ н/обр на подшип. 7203 (к-т 4шт) 3 компл 756,67 ₽ 2 270,01 ₽ 1,35%
62. Трубка торм. ГАЗ 3302 (к-т 8шт) медь 2 компл 930,00 ₽ 1 860,00 ₽ 1,11%

Авторизация

×

Заказать звонок

Номер телефона

Имя

Регион Выберите регион Алтайский край Амурская область Архангельская область Астраханская область Белгородская область Брянская область Владимирская область Волгоградская область Вологодская область Воронежская область Еврейская автономная область Забайкальский край Ивановская область Иркутская область Кабардино-Балкарская Республика Калининградская область Калужская область Камчатский край Карачаево-Черкесская Республика Кемеровская область Кировская область Костромская область Краснодарский край Красноярский край Крым Курганская область Курская область Ленинградская область Липецкая область Магаданская область Московская область Мурманская область Ненецкий автономный округ Нижегородская область Новгородская область Новосибирская область Омская область Оренбургская область Орловская область Пензенская область Пермский край Приморский край Псковская область Республика Адыгея Республика Алтай Республика Башкортостан Республика Бурятия Республика Дагестан Республика Ингушетия Республика Калмыкия Республика Карелия Республика Коми Республика Марий Эл Республика Мордовия Республика Саха (Якутия) Республика Северная Осетия-Алания Республика Татарстан Республика Тыва Республика Хакасия Ростовская область Рязанская область Самарская область Саратовская область Сахалинская область Свердловская область Смоленская область Ставропольский край Тамбовская область Тверская область Томская область Тульская область Тюменская область Удмуртская Республика Ульяновская область Хабаровский край Ханты-Мансийский автономный округ Челябинская область Чеченская Республика Чувашская Республика Чукотский автономный округ Ямало-Ненецкий автономный округ Ярославская область

Комментарий

Проверка поля


Старт-М для Peugeot 408 с двигателем V-1.6 diesel

№ п/п Модель транспортного средства Мощность*, кВт
«Старт-М» для легковых и среднетоннажных отечественных автомобилей
1 Старт-М без монтажного комплекта (котел) 1,5; 2,0
2 ВАЗ 2101-2107, ВАЗ 2121-21214, ВАЗ 2129-2131 с карбюраторным двигателем 1,5
3 ВАЗ 2108-2110 с карбюраторным двигателем 1,5
4 ВАЗ 2108-2110, 2113-2115 с 8-кл. инжекторным двигателем 1,5
5 ВАЗ 2108-2110 с 16-кл. инжекторным двигателем 1,5
6 ВАЗ 2104-2107 с инжекторным двигателем 1,5
7 ВАЗ 1117,1118,1119 Лада-Калина, дв. V 1.6, 8-клап 1,5
8 ВАЗ 1117,1118,1119 Лада-Калина, дв. V 1.4, 16-клап. 1,5
9 ВАЗ 1117,1118,1119 Лада-Калина, КПП с троссовым приводом 1,5
10 ВАЗ 21701, 21713, 21721 Лада-Приора 1,5
11 ВАЗ 21701, 21713, 21721 Лада-Приора, КПП с троссовым приводом 1,5
12 ВАЗ 2190 «LADA Granta» с 8-клапанным двигателем 1,5
13 ВАЗ 2190 «LADA Granta» с 16-клапанным двигателем, КПП с троссовым приводом 1,5
14 ВАЗ «LADA Largus» с 16-клапанным двигателем 1,5
15 ВАЗ 21230 Chevrolet Niva 1,5
16 ВАЗ 21214 «Нива» с инжекторным двигателем 1,5
17 ГАЗ «Волга», двиг. 560 (дизель) Styer 1,5
18 ГАЗ-31105 «Волга» c двигателем Chrysler 2.4L-DOHC 1,5
19 ГАЗ с карбюраторным двигателем ЗМЗ 402 («Волга») 1,5
20 ГАЗ с двигателем ЗМЗ 406 («Волга») 1,5
21 Газель с двигателем ЗМЗ-402 и его модификации 1,5
22 Газель Бизнес с двигателем УМЗ 4216 1,5
23 ГАЗель, Соболь с двигателем ЗМЗ-40524 ( ЕВРО-3) 1,5
24 ГАЗель, Соболь с двигателем УМЗ-4216 ( ЕВРО-3) 1,5
25 ГАЗель, Соболь с двигателем ЗМЗ-405,406 1,5
26 ГАЗ-330202 «ГАЗель», с двигателем Chrysler 2.4L-DOHC 1,5
27 ГАЗ-3302 «ГАЗель», с двигателем ISF2 «CUMMINS» (Евро-3) 1,5;2,0
28 ГАЗ-3302 «ГАЗель», с двигателем ISF2 «CUMMINS» (Евро-4) 1,5;2,0
29 «ГАЗель NEXT с двигателем ISF2 «CUMMINS» 1,5;2,0
30 ГАЗ-53А, 3307 и его модификации с карбюраторным дв.ЗМЗ 53 2,0
31 ГАЗ-3309 с дизельным двигателем Д245 2,0
32 ГАЗ-331041 «Валдай» с двигателем Д245.7Е3 2,0
33 ГАЗ 3310 «Валдай» с двигателем Cummins 2,0
34 ЗИЛ-130 с карбюраторным двигателем 2,0
35 ЗИЛ-Бычок с дизельным двигателем Д245.12С 2,0
36 Москвич 412 с двигателем УМЗ 412 1,5
37 УАЗ с карбюраторным двигателем 1,5
38 УАЗ-315195 «Хантер» с двигателем ЗМЗ-409 1,5
39 УАЗ-315195 «Хантер» с двигателем ЗМЗ-409 (Евро-3) 1,5
40 УАЗ-315195 «Хантер» с двигателем ЗМЗ-514, дизель 1,5
41 УАЗ-3163 «Патриот» с двигателем ЗМЗ-409 (Евро-3) 1,5
42 УАЗ «Фермер» с двигателем ЗМЗ-409 (евро-3) 1,5
43 Трактор МТЗ-80, 82 с двигателем Д245 2,0
«Старт-М» для легковых и среднетоннажных зарубежных автомобилей
44 Старт-М без монтажного комплекта (котел) 1,5; 2,0
45 CHEVROLET Aveo, двигатель F14D3 1,5
46 CHEVROLET Aveo, двигатель F14D4 1,5
47 CHEVROLET Aveo, двигатель B12S1 1,5
48 CHEVROLET Cruze, двигатель F16D3 1,5
49 CHEVROLET Captiva, двигатель LE5 1,5
50 CHEVROLET Lacetti, двигатель F16D3 1,5
52 CHEVROLET Epica, двигатель X20D1 (V-2,0) 1,5
53 CHEVROLET Lanos с 8-кл, 16-кл. двигателем 1,5
54 Cherry Bonus, V= 1,5 л 1,5
55 Cherry INDIS V=1,3 л. 1,5
56 Cherry Tiggo, V= 1,6 л 1,5
57 Cherry Tiggo FL 2013 г.в. с двигателем SQRE4G16 1,5
58 CITROEN C4 с двигателем EP6 1,5
59 CITROEN Jamper 1,5
60 DAEWOO Espero, двигатель C20LE (V-2,0) 1,5
61 DAEWOO Matiz с двигателем B10S1 (1,0 л) 1,5
62 DAEWOO Matiz с двигателем F8CV (0,8 л) 1,5
63 DAEWOO Nexia с 8-кл, 16-кл. двигателем 1,5
64 FAW BESTURN B50 с двигателем 1,6 1,5
65 FIAT Albea с двигателем 178B2 (350A100) (1,4i) 1,5
66 FIAT DOBLO с двигателем 178B2 (350A100) (1,4i) 1,5
67 FIAT Doblo с дизельным двигателем V-1,2 литра 1,5
65 FIAT DUCATO, двигатель F1A 2.3 JTD 1,5
66 FORD C-Max, двигатель QQDA Duratec (V 1,8 л) 1,5
67 FORD c двигателем QQDC 1,5
68 FORD c двигателем QQDB 1,5
69 FORD Focus 2, двигатель SHDA 1,5
70 FORD Focus 2, двигатель SHDB (V 1,6 л) 1,5
71 FORD Focus 3, (V 1,6 л; V 2.0 л) 1,5
72 FORD Fiesta, (V 1,6 л) 1,5
73 FORD Mondeo 2012 г.в с дизельным двигателем V-2,0 литра 1,5
74 FORD Transit с двигателем JXFA 1,5
75 GREAT WALL, двигатель 491QЕ 1,5
76 GREAT WALL Hover 5, двигатель G469S4N 1,5
77 HONDA Accord с двигателем F20B5 1,5
78 HONDA Accord 2008 г.в. с двигателями К24 1,5
79 HONDA CR-V с двигателем B20 1,5
80 HYUNDAI Аccent двигатель G4EA 1,5
81 HYUNDAI Аccent двигатель G4EC, МКПП 1,5
82 HYUNDAI Elantra с двигателем D4EA 1,5
83 HYUNDAI Elantra с двигателем G4FC 1,5
84 HYUNDAI Galloper, с двигателем D4BF 1,5
85 HYUNDAI Galloper, с двигателем D4BH 1,5
86 HYUNDAI Gets, двигатель G4EH, МКПП 1,5
87 HYUNDAI Gets, двигатель G4EА 1,5
88 HYUNDAI HD65 с двигателем D4DD 1,5
89 HYUNDAI HD72 с двигателем D4AL 1,5
90 HYUNDAI Porter, двигатель D4BF 1,5
91 HYUNDAI Santa Fe с двигателем 6GBA 1,5
92 HYUNDAI Santa Fe с двигателем D4EA 1,5
93 HYUNDAI Sonata с двигателем 6GBA 1,5
94 HYUNDAI Grand Starex двигатель D4CB 1,5
95 HYUNDAI Trajet с двигателем D4EA 1,5
96 HYUNDAI Tucson с двигателем 6GBA 1,5
97 HYUNDAI Tucson с двигателем D4EA 1,5
98 HYUNDAI Tucson с двигателем G4GC 1,5
99 HYUNDAI i30 с двигателем D4EA 1,5
100 HYUNDAI i30 с двигателем G4FC 1,5
101 HYUNDAI с двигателем D4BH 1,5
102 HYUNDAI с двигателем D4EA 1,5
103 HYUNDAI с двигателем G4EA 1,5
104 ISUZU с двигателем 4HF1 1,5
105 KIA Bongo 2 с двигателем J3, с П-образной рамой автомобиля 1,5
106 KIA Bongo с двигателем J3 с полой рамой автомобиля 1,5
107 KIA Bongo с двигателем J3 с сливной пробкой на блоке двигателя 1,5
108 KIA (Ceed, Cerato) с двигателем G4FC 1,5
109 KIA Ceed с двигателем D4FB 1,5
110 KIA Magentis с двигателем G4KE 1,5
111 KIA Optima с двигателем G4KE 1,5
112 KIA RIO с двигателем 4G 1,5
113 KIA Soul с дизельным двигателем V-1,6 литра, с АКПП 1,5
114 KIA Sorento с двигателем D4CB – дизель 1,5
115 KIA Sorento с двигателем D4HB 1,5
116 KIA Sorento с двигателем G4KE 1,5
117 KIA Spectra, двигатель S6 1,5
118 KIA Sportage, двигатель G4KE 1,5
119 KIA Picanto, двигатель G4LA 1,5
120 MAZDA 3, двигатель Z6 1,5
121 MAZDA 3, двигатель ZL 1,5
122 MAZDA с двигателем B3 1,5
123 MAZDA 323 с двигателем FP (DOHC 1.8 16V) 1,5
124 MAZDA 323 с двигателем Z5 1,5
125 MAZDA 626 с двигателем FP (DOHC 1.8 16V) 1,5
126 MAZDA BT-50, двигатель WL (дизель) 1,5
127 MAZDA Demio, двигатель B3 1,5
128 MAZDA Demio, двигатель ZJ 1,5
129 MAZDA Familia, двигатель ZL 1,5
130 MAZDA Premacy с двигателем FP (DOHC 1.8 16V) 1,5
131 MERCEDES BENZ Sprinter, OM611 1,5
132 MERCEDES BENZ Viano, с двигателем OM646 1,5
133 MERCEDES BENZ Vito, с двигателем OM611 1,5
134 MITSUBISHI ASX с двигателем 4B10 1,5
135 MITSUBISHI Fuso с двигателем 4M50 1,5
136 MITSUBISHI Lancer, двигатель 4A91 1,5
137 MITSUBISHI Lancer, двигатель 4B10 1,5
138 MITSUBISHI Lancer, двигатель 4B11 1,5
139 MITSUBISHI Lancer, двигатель 4G 13/15 1,5
140 MITSUBISHI Lancer, двигатель 4G18 1,5
141 MITSUBISHI Lancer, двигатель 4G18 1,5
142 MITSUBISHI с двигателем 4D56 (L200) 1,5
143 MITSUBISHI с двигателем 4B10 1,5
144 MITSUBISHI с двигателем 4B11 1,5
145 MITSUBISHI с двигателем 4D56 1,5
146 MITSUBISHI с двигателем 4G63 1,5
147 MITSUBISHI с двигателем 4G93 1,5
148 NISSAN Almera, двигатель QG15; QG18 1,5
149 NISSAN Almera 2013, двигатель K4M 1,5
150 NISSAN Almera Classic, двигатель GA16 1,5
151 NISSAN Almera Classic, двигатель QG16, AKПП 1,5
152 NISSAN Avenir, двигатель QG15; QG18 1,5
153 NISSAN Cefiro, двигатель VQ-20 1,5
154 NISSAN Juke с двигателем HR16 1,5
155 NISSAN NP300 с двигателем YD25 1,5
156 NISSAN (Note, Tiida) с двигателем HR16 1,5
157 NISSAN Pathfinder c двигателем YD25 1,5
158 NISSAN Patrol, двигатель RD28 1,5
159 NISSAN Patrol, двигатель ZD30 1,5
160 NISSAN Presage с двигателем YD25 1,5
161 NISSAN Primera, двигатель QG15; QG18 1,5
162 NISSAN Qashqai MR20 1,5
163 NISSAN Sunny, двигатель QG 13-15 1,5
164 NISSAN Sunny с двигателем YD22 1,5
165 NISSAN Terrano с двигателем TD 27 1,5
166 NISSAN Terrano с двигателем ZD30 1,5
167 NISSAN Tiida с двигателем HR15 1,5
168 NISSAN Wingroad, двигатель QG15; QG18 1,5
169 NISSAN X-Trail, двигатель M9R 1,5
170 NISSAN X-Trail, двигатель QR25 1,5
171 NISSAN X-Trail, двигатель QR20, MR20 1,5
172 NISSAN с двигателем TD27 1,5
173 NISSAN с двигателем ZD30 1,5
174 NISSAN с двигателем QG15, QG18 1,5
175 OPEL Astra, с двигателем Z14XEP 1,5
176 OPEL Astra, с двигателем Z16XEP 1,5
177 PEUGEOT 206, V=1,2 л 1,5
178 PEUGEOT 307, двигатель NFU, МКПП 1,5
179 PEUGEOT 308, двигатель EP6 1,5
180 PEUGEOT 408 с дизельным двигателем, V-1,6 литра 1,5
181 PEUGEOT Boxer, двигатель PSA4HU 1,5
182 RENAULT Duster, двигатель F4R 1,5
183 RENAULT Logan, двигатель K7JA710 1,5
184 RENAULT Master, двигатель M9T 1,5
185 RENAULT Megane, двигатель K4MT 1,5
186 RENAULT Symbol, двигатель K7JA700R 1,5
187 SSANG YONG Action Sport, двигатель 664951 (дизель) 1,5
188 SSANG YONG New Action , двигатель 671950 (D20DTF) 1,5
189 SSANG YONG New Action с двигателем G20D (бензин) 1,5
190 SSANG YONG Rexton с двигателем D27DT 1,5
191 SUBARU, двигатель EJ(15,20,25) 1,5
192 SUZUKI Grand Vitara с двигателем J24B 1,5
193 SUZUKI Sx4 с двигателем М16А 1,5
194 TOYOTA Avensis, двигатель 1AZ 1,5
195 TOYOTA Avensis, двигатель 3S 1,5
196 TOYOTA Avensis, двигатель 4A-FE 1,5
197 TOYOTA Avensis, двигатель 7A-FE 1,5
198 TOYOTA Caldina, двигатель 1ZZ-FE 1,5
199 TOYOTA Camry c двигателями 3S; 4S; 5S 1,5
200 TOYOTA Corolla, двигатель 1G 1,5
201 TOYOTA Corolla, двигатель 1 NZ 1,5
202 TOYOTA Corolla с двигателем 2C 1,5
203 TOYOTA Corolla, двигатель 2 Е 1,5
204 TOYOTA Corolla, двигатель 3ZZ 1,5
205 TOYOTA Corolla, двигатель 4-5А 1,5
206 TOYOTA Corona c двигателями 3S-FE; 4S-FE; 1,5
207 TOYOTA Gaia с двигателем 3S 1,5
208 TOYOTA Land Cruiser с двигателем 1HD 1,5
209 TOYOTA Land Cruiser с двигателем 1HD-FTE 1,5
210 TOYOTA Land Cruiser с двигателем 1HD-T 1,5
211 TOYOTA Land Cruiser с двигателем 1HZ 1,5
212 TOYOTA Land Cruiser с двигателем 3L 1,5
213 TOYOTA Land Cruiser Prado, двигатель 1KD 1,5
214 TOYOTA Land Cruiser Prado, двигатель 1KZ-TE (дизель), АКПП 1,5
215 TOYOTA Land Cruiser Prado, двигатель 2TR 1,5
216 TOYOTA Mark II, двигатель 1GFE 1,5
217 TOYOTA Premio, двигатель 1NZ 1,5
218 TOYOTA Probox, двигатель 1NZ 1,5
219 TOYOTA 4RUNNER с двигателем 1GR 1,5
220 TOYOTA RAV4, двигатель 1AZ 1,5
221 TOYOTA Spacio с двигателем 1ZZ-FE 1,5
222 TOYOTA Vitz, двигатель 1SZ 1,5
223 TOYOTA Yaris с двигателем 1SZ-FE 1,5
224 TOYOTA с двигателями 1G 1,5
225 TOYOTA с двигателем ZR 1,5
226 TOYOTA с двигателем 3L 1,5
227 TOYOTA с двигателями 3S, 4S, 5S 1,5
228 TOYOTA с двигателями 4A-FE, 5A-FE, 7A-FE 1,5
229 VOLKSWAGEN golf с двигателем CBZB 1,5
230 VOLKSWAGEN Passat B7 с двигателем CDAB 1,5
231 VOLKSWAGEN polo с двигателем CFNA 1,5
232 VOLKSWAGEN Transporter T5 с двигателем AXA 1,5
233 VOLVO S40 двигатель В5244S 1,5
234 ZAZ Chance A15SMS (1,5i) 1,5
235 ZAZ Chance MEMЗ 307 (1,3i) 1,5
236 Старт-М «Универсал» (КМУ, Комплект монтажный универсальный) Комплект предназначен для установки на двигатели автомобилей которых нет в прайсе. В комплекте большое кол-во различных штуцеров, тройников, переходников для того чтобы была возможность установки абсолютно на любой двигатель, (автомобили иностранного производства) 1,5;2,0

3302-5000012-408 в Челябинске по низкой цене

Запчасти двигателя

Двигатель в сборе

Система питания двигателя

Система выпуска газов двигателя

Система охлаждения

Система смазки, система управления двигателем электронная

Запчасти трансмиссии

Сцепление

Коробка передач

Коробка раздаточная

Гидросистема

Гидравлический привод мостов

Передача карданная

Мост передний ведущий

Мост задний

Мост средний (промежуточный)

Механизм поворота и бортовая передача

Запчасти ходовой части

Рама

Подвеска автомобиля

Ось передняя (задняя для переднеприводных)

Колеса и ступицы

Гусеницы и катки опорные

Ходовая часть

Запчасти механизмов управления

Управление рулевое

Тормоза

Механизм управления

Запчасти кузова

Кузов

Кабина

Детали основания (Пол кузова)

Окно ветровое и заднее

Передок кабины

Боковина кузова

Задок кабины

Крыша

Тент открытого кузова

Дверь кабины (передняя)

Дверь задняя

Дверь задка

Дверь сдвижная

Замок центральный

Кабина трактора

Сиденье водителя

Сиденье пассажирское

Сиденье заднее

Сиденье одноместное

Сиденье трехместное

Перегородка кабины водителя

Оборудование специализированное

Отопление и вентиляция

Принадлежности кабины

Капот, крылья, облицовка радиатора (оперение)

Платформа

Устройство подъемное и опрокидывающее платформы

Электрооборудование

Электрооборудование

Приборы и датчики

Радиооборудование

Дополнительное автомобильное оборудование

Седельное устройство

Оборудование для отбора мощности

Оборудование дополнительное

Навесное оборудование

Автомобильные принадлежности

Водительские инструменты и принадлежности

Прочие запчасти

Двигатель ЗМЗ-513 ГАЗ-66 с военного хранения в Нижнем Новгороде

Двигатель ЗМЗ-513 ГАЗ-66 с военного хранения

Пользуется большим спросом для охоты , рыбалки, сафари , защищен от попадания воды и грязи в двигатель.  

Гарантия на продукцию 6 месяцев

Двигатель используется на автомобилях ГАЗ-66, ГАЗ-6611, ГАЗ-3308 и их модификации с бензиновым двигателем.

Военное хранение. Внешний вид нового двигателя.

Двигатель карбюраторный, бензиновый А-76,  с V-образным расположением цилиндров под углом 90 градусов и верхним расположением клапанов.

В двигателе применены головки цилиндров с высокотурбулентными камерами сгорания и винтовыми впускными каналами. Во всех моторах применена система рециркуляции отработавших газов для снижения выброса вредных веществ в атмосферу. Двигатели имеют картер сцепления под унифицированную КПП. 

 Технические характеристики двигателя  ЗМЗ-513

 

Количество цилиндров

8

Рабочий объем цилиндров, л

4,25

Степень сжатия

7,6:1

Диаметр цилиндра, мм

92

Ход поршня, мм

80

Номинальная мощность (брутто) при частоте вращения коленчатого вала мин-1, кВт (л.с.)

92 (125)
3200-3400

Максимальный крутящий момент (брутто) при частоте вращения коленчатого вала мин-1, Нм (кгсм)

294 (30)
2000-2500

Минимальный удельный расход топлива, г/кВт (г/лсч)

286 (210)

Расход масла на угар, % от расхода топлива

0,4

Масса, кг

275

Октановое число бензина

76

 

Компания АвтоБИС  предлагает вам качественные комплектующие на весь модельный ряд ГАЗ-66, 53, 3307, 3308, 3309.

 

Краткое содержание автора

Введение

Вирус герпеса, связанный с саркомой Капоши (KSHV), также называемый вирусом герпеса человека 8 (HHV-8), является членом подсемейства гаммагерпервирусов [1]. Инфекция KSHV у здоровых людей хорошо контролируется иммунной системой хозяина и другими факторами хозяина и, следовательно, обычно протекает бессимптомно. Однако длительная иммуносупрессия может привести к возникновению злокачественных новообразований, вызванных KSHV. KSHV был связан с тремя злокачественными новообразованиями, включая все формы саркомы Капоши, сложную солидную опухоль эндотелиального происхождения и две редкие B-клеточные лимфомы, первичную выпотную лимфому (PEL или крупноклеточную лимфому на основе полостей тела) и многоцентровую болезнь Кастлемана [2 ] — [4].KSHV, как и другие герпесвирусы, проявляет два различных состояния инфекции: латентную и литическую инфекцию. В латентный период экспрессируется только небольшая часть вирусных генов, что способствует поддержанию вирусного генома, стимулирует пролиферацию клеток и опосредует иммунную инвазию. Различные внешние и внутренние стимулы вызывают нарушение латентного периода KSHV и индукцию литической инфекции KSHV с экспрессией всех вирусных литических генов и репликацией вирусного потомства [5] — [7]. KSHV имеет большой ДНК-геном (~ 168 т.п.н.), кодирующий более 90 генов для продукции вирусных структурных и неструктурных белков, небольших пептидов, длинных некодирующих РНК (днРНК) и малых регуляторных миРНК [1], [8] — [10].Как и многие ДНК-вирусы, KSHV имеет сложную генную организацию и зависит от аппарата клетки-хозяина для его экспрессии. Однако полный перечень аннотаций вирусного генома все еще неизвестен, и истинная природа экспрессии вирусных генов и ее регуляция еще предстоит полностью понять.

РНК-полиаденилирование (pA) растущих транскриптов является критическим посттранскрипционным этапом созревания эукариотических транскриптов [11]. Основная роль полиаденилирования РНК заключается в высвобождении вновь синтезированной РНК из матрицы ДНК посредством расщепления эндонуклеазой и защите ее от деградации путем добавления поли (А) хвоста к 3′-концу РНК.Присутствие поли (A) хвоста также способствует ядерно-цитоплазматическому экспорту и эффективной белковой трансляции мРНК [12], [13]. Полиаденилирование РНК осуществляется большим белковым комплексом, состоящим по крайней мере из 85 белковых факторов, и связывается со специфическими последовательностями в формирующихся транскриптах, окружающих сайт расщепления [14]. Богатый A / U элемент вверх по течению, распознаваемый фактором специфичности расщепления и полиаденилирования (CPSF), и богатый U / GU элемент ниже по течению, распознаваемый фактором стимуляции расщепления (CstF) [15], [16], сайта расщепления. являются двумя основными детерминантами полиаденилирования РНК, хотя другие вспомогательные цис-элементы могут также участвовать в определении сайта pA [17], [18].После сборки комплекса полиаденилирования пре-мРНК обычно расщепляется по динуклеотиду «СА» с последующим добавлением поли (А) хвоста [19]. Хотя сам процесс полиаденилирования хорошо охарактеризован, выбор сайта pA остается загадкой. Недавние полногеномные исследования полиаденилирования транскриптов хозяина у различных организмов выявили очень беспорядочное полиаденилирование большой популяции РНК из множества сайтов pA [20] — [22]. В результате гены, затронутые альтернативным полиаденилированием, продуцируют субнабор транскриптов с разными потенциалами кодирования или 3′-нетранслируемыми областями (3′-UTRs) [23].

Пейзаж полиаденилирования герпесвирусов человека не описан на уровне всего генома. В этом исследовании мы выполнили полногеномный анализ полиаденилирования РНК транскриптов KSHV из В-клеток с латентной или литической вирусной инфекцией с использованием модифицированной технологии полиаденилирования-секвенирования (PA-seq) [24]. Мы определили, что KSHV использует 67 активных сайтов pA для экспрессии его латентных и литических генов и нескольких новых или неаннотированных генов. Мы также обнаружили альтернативное полиаденилирование РНК нескольких известных генов KSHV и выявили цис-элементы сайта pA в регуляции экспрессии гена KSHV.

Результаты Идентификация сайтов pA KSHV с помощью PA-seq

Чтобы выяснить роль полиаденилирования РНК в регуляции гена KHSV, мы выполнили полногеномный анализ сайтов pA вируса для мониторинга их использования во время инфекции KSHV. В этом исследовании были выбраны три KSHV-положительные линии B-клеток (JSC-1, BCBL-1 и TREx BCBL-1), которые поддерживают как латентную, так и литическую вирусную инфекцию. Для каждой клеточной линии события полиаденилирования сравнивали между латентной и литической инфекцией (рисунок S1A). Клетки с литической инфекцией собирали через 48 часов после реактивации вируса путем химической индукции, чтобы обеспечить полный цикл репликации вируса и достаточную экспрессию поздних вирусных транскриптов.Мы наблюдали резкое снижение жизнеспособности клеток, связанное с реактивацией вируса (31% против 88% для JSC-1, 50% против 89% для BCBL-1 и 20% против 82% для клеток TREx BCBL-1 [далее TREx]) анализом исключения трипанового синего. Фракцию РНК Poly (A) + из каждого образца использовали для приготовления 3′-концевых библиотек кДНК с помощью модифицированного метода PA-seq с последующим секвенированием парных концов Illumina [24], [25]. В общей сложности мы получили более 119 миллионов парных считываний из всех выборок (рисунок S1B).KSHV- и специфичные для человека считывания были извлечены путем сопоставления полученных считываний последовательностей с эталонными геномами KSHV (GenBank с номером U75698.1) и человека (версия UCSC hg19). Более 100 миллионов (∼84%) всех считываний были однозначно картированы, из которых около 35 миллионов (∼29%) были связаны с KSHV и примерно 65 миллионов (∼55%) с геномом человека. Остальные 19 миллионов (16%) — чтения без отображения. Как и ожидалось, была замечена замечательная корреляция между KSHV-специфическими чтениями и статистикой KSHV-инфекции во всех трех клеточных линиях с меньшим количеством KSHV чтений (0.10–0,47%) в клетках с латентной вирусной инфекцией и намного больше KSHV читается (20–77%) в клетках с литической инфекцией KSHV (рис. S1B и S1C).

Для анализа сайта pA KSHV мы сосредоточились только на считываниях последовательностей, однозначно картированных в геном KSHV и дополнительно сгруппированных для идентификации PA-пиков. Мы объединили показания последовательности KSHV из всех образцов и выполнили анализ вызова пика с использованием алгоритма F-seq со значительным обогащением по сравнению с фоновой моделью [26] и порогом> 50 считываний на пик (рисунок S2).Как и ожидалось, только небольшое количество пиков PA было обнаружено в клетках с латентной инфекцией KSHV, но значительно больше пиков было обнаружено в клетках с литической инфекцией KSHV (фигура S3A). Для дальнейшего анализа распределения пиков PA в контексте выбранных вирусных генов и обеспечения пиков PA, полученных из нашего PA-seq, репрезентативного для аутентичных участков сайта pA, мы изучили пик PA, распределенный в хорошо охарактеризованной ORF50 ( RTA) /K8/K8.1, который кодирует три коллинеарных гена KSHV. Хотя каждый ген в локусе имеет свой собственный промотор, все их транскрипты полиаденилированы в одном сайте pA, расположенном ниже K8.1 (см. Диаграмму на рисунке S3B). Мы обнаружили заметный пик PA во всех литических образцах, но в меньшей степени в латентных образцах, перекрывающийся с картированным сайтом pA (Рисунок S3B), о котором сообщалось в предыдущих исследованиях [27], [28]. Никаких других пиков PA не наблюдалось ни выше, ни ниже этого сайта pA. Эти данные показывают, что библиотеки PA-seq были высокого качества и подходили для всестороннего анализа вирусных сайтов pA.

Впоследствии мы определили положение нуклеотида (nt) с наибольшим количеством считываний в пределах отдельных пиков в анализе вызова пика как режим PA (рисунок S2) и обозначили такой режим PA как уникальный сайт pA (таблица S1).Мы также определили пик PA от начала пика до конца пика, и общее количество считываний в пределах пика PA было использовано для приближения использования сайта pA (рисунок S2). С помощью этого подхода мы идентифицировали 67 сайтов pA на обеих цепях вирусной ДНК генома KSHV (рис. 1A). Сайты pA, картированные с помощью PA-seq в этом исследовании, были удивительно близки к нескольким известным сайтам pA, ранее картированным традиционными методами, как с точки зрения картированного положения нуклеотидов, так и с точки зрения специфичности цепи (Таблица S2).

10.1371 / journal.ppat.1003749.g001 Рисунок 1 Полногеномный ландшафт pA-сайтов KSHV.

(A) Диаграмма генома KSHV с картированными вирусными сайтами pA (красные треугольники для положительной цепи и синие треугольники для отрицательной цепи). Каждое число представляет собой нуклеотидное положение идентифицированного сайта pA. (B) Частота встречаемости сайтов pA, сопоставленных с отдельными вирусными генами или в кластерах генов (два или более гена на сайт pA). (C) График разброса, изображающий распределение длины вирусного 3’UTR по размеру от терминирующего кодона гена, примыкающего к картированному сайту pA непосредственно ниже по течению.Медиана длины 3’UTR рассчитывалась по 50 сайтам pA непосредственно ниже ORF, кодирующих белок.

Более высокая распространенность сайтов pA показывает смещение цепи: 43 сайта pA в отрицательной цепи и 24 в положительной цепи генома KSHV. Большинство картированных сайтов pA расположены в межгенных областях генома KSHV, вне аннотированных ORF, за исключением сайтов pA в кодирующих областях ORF7 в нуклеотиде 7032 и ORF61 в нуклеотиде 98274 и K12 в нуклеотиде 118012, 118032. и 118087.

Привязка картированных сайтов pA к генам KSHV

Наш анализ сайтов pA всего генома позволил нам сопоставить каждый картированный сайт pA с аннотированными генами KSHV и идентифицировать новый ген (ы) KSHV. Мы отнесли каждый сайт pA к известному вирусному гену или области кластера генов на основе следующих критериев: (1) оба гена (ов) и соответствующий сайт pA должны находиться на одной и той же цепи вирусного генома, (2) pA сайт должен быть расположен за пределами кодирующей области вирусного гена (ов), и (3) ген (ы), назначенный картированному сайту pA, должен быть расположен выше сайта pA.Эти критерии предполагают, что вирусные транскрипты, происходящие от промотора (ов) выше гена, будут полиаденилированы с первого доступного сайта pA ниже по течению. Соответственно, мы отнесли 55 сайтов pA ко всем известным генам KSHV (рисунок 1B, таблица S3). Оставшиеся 12 сайтов pA, которые невозможно определить, будут указывать на присутствие транскриптов неизвестных генов KSHV для дальнейшей проверки. Интересно, что большинство неназначенных сайтов pA расположены антисмыслово по отношению к известным генам KSHV, что позволяет предположить существование предполагаемых антисмысловых транскриптов к этим вирусным генам [29].Среди 55 сайтов pA, присвоенных известным транскриптам гена KSHV, 20 расположены непосредственно ниже одного гена KSHV для полиаденилирования моноцистронной мРНК, а остальные 35 имеют несколько вышестоящих генов KSHV в диапазоне от 2 до 5 для полиаденилирования бицистронных или полицистронных транскриптов ( Рисунок 1B). Интересно, что мы обнаружили два или более сайта pA, картированных в области ниже одного и того же гена. К ним относятся два альтернативных сайта pA ниже ORF54, K2 (vIL6), K9 (vIRF1), K10.5 (vIRF3), K11 (vIRF2) и K12 (Kaposin A), три ниже T1.5 РНК и PAN (nut-1) РНК или во внутренней области K12, и пять ниже внутренних повторов vnct (рис. 1A). Из генов, кодирующих белок, ORF54 показал наибольшее использование альтернативных сайтов pA (~ 24%), за ним следовали K10,5 (~ 17%) и K11 (~ 11%), но K2, K9 и K12 использовали гораздо реже. (Таблица S4). Таким образом, наш анализ обеспечивает не только первый всеобъемлющий ландшафт функциональных сайтов pA в контексте генома KSHV, но и впервые альтернативное полиаденилирование транскриптов KSHV во время вирусной инфекции.

Длина 3’UTR транскриптов KSHV

Далее мы стремились определить длину и состав 3′-UTR для каждого гена, кодирующего белок KSHV. Неназначенные сайты pA и сайт pA для генов вирусной некодирующей РНК были исключены из этого анализа. Всего 50 сайтов pA использовали для расчета длины 3’UTR от сайта pA до соседнего терминирующего кодона ближайшей расположенной выше ORF. Мы обнаружили, что рассчитанная длина 3 ‘UTR генов KSHV сильно варьирует по размеру от 2 нт (ORF38) до 1925 нт (ORF62) (Таблица S3).Распределение 3’UTR KSHV показано на рисунке 1С со средним размером 3’UTR в ~ 80 нт, что значительно короче, чем 3’-UTR человека со средним размером ~ 300 нт [20].

Использование сайтов pA KSHV в течение жизненного цикла KSHV

На основании числа считываний последовательности, полученных на каждом сайте pA, можно сделать вывод об относительном устойчивом уровне (использование сайта pA) транскриптов, связанных с сайтом pA. Ограничением этого подхода являются кластерные гены, использующие один сайт pA, в котором количество считываний последовательности отражает совокупный уровень всех транскриптов гена.Использование сайта pA сравнивали от латентной до литической инфекции. Сначала мы определили использование каждого сайта pA в отдельных образцах, чтобы получить использование сайта pA для конкретного образца, а затем нормализовали количество считываний последовательности в пределах каждого вирусного пика pA к общему количеству считываний последовательностей, сопоставленных с KSHV и геномом хозяина в каждом образце (рисунок S4 , Таблица S5). Комбинация нормализованных считываний последовательностей из всех латентных образцов сравнивалась с таковой из всех литических образцов (рис. 2A, 2B, таблица S6). Сайт pA 122069 (+) латентной полицистронной РНК ORF73 (LANA), ORF72 (vCyclin) и K13 (vFLICE) служил эталоном (красная полоса на рис. 2A – C).Удивительно, но в образцах с латентной инфекцией первые 5 сайтов, основанные на подсчете последовательностей сайтов pA, были PAN (nut-1), кластер ORF2 / K2, кластер K12, кластер ORF50 / K8 / K8.1 и T1.5 (рис. 2A). ), которые предположительно являются литическими генами KSHV, но спонтанно реактивируются в небольшой фракции клеток со скрытой инфекцией (рисунок S3, таблица S6). Использование сайта pA для экспрессии ORF73 / ORF72 / K13 занимает 6-е место во время задержки. В образцах с литической инфекцией 5 верхних используемых сайтов pA были сайтами pA для обильной экспрессии PAN, K12, кластера ORF62-58, T1.5 и кластер K4.2 / 4.1 / 4, а использование эталонного латентного сайта pA для экспрессии ORF73 / ORF72 / K13 упало до 41-го места. Однако, когда были рассчитаны изменения в использовании каждого идентифицированного сайта pA от литической к латентной инфекции, использование картированных сайтов pA для экспрессии вирусного литического гена стало значительным, с более чем 500-кратным увеличением от латентной до литической инфекции для ORF62, ORF24. / 23, ORF44, PAN и K12 (рисунок 2C, таблица S6). Наименьшим изменением использования (<10 раз) во время литического инфицирования вирусом были сайты pA для экспрессии ORF2 / K2, K10.6 / 10.5 и ORF73 / ORF72 / K13, а также транскрипты, антисмысловые по отношению к ORF50 (RTA) и K15 / ORF75 (рис. 2C, вставка). Наименьшим изменением в использовании сайта pA был эталонный сайт pA ORF73 / ORF72 / K13, с увеличением только в 2,1 раза. Таким образом, эти сайты pA действительно используются для экспрессии латентных генов вируса. Примечательно, что размеры пиков сайтов pA значительно варьируются в пределах от 3 (сайт pA на nt 17227) до 98 nts (pA site на 29740) (таблица S7) и представляют гетерогенность сайтов расщепления в каждом картированном сайте pA [30].Эта гетерогенность данного сайта pA, такого как сайт pA в нуклеотиде 29740, нуклеотиде 76738 или нуклеотиде 122069, оставалась неизменной либо от клеток JSC-1 к BCBL-1, либо от латентной до литической инфекции (данные не показаны). Основываясь на их бимодальном распределении (рис. 3A), мы сгруппировали 38 сайтов pA с узким пиком (≤30 нт, средний размер 17 нт), 24 сайта pA с широким пиком (> 30, ≤45 нт, с средний размер 36,5 нт) и 5 ​​сайтов pA с широким пиком (> 45 нт, со средним размером 61 нт) (рис. 3А). Интересно, что мы обнаружили сильную положительную корреляцию использования сайта pA чтениями последовательностей в порядке от узких (4013 чтений), широких (62,764 чтения) до широких (425 475 чтений) пиков с коэффициентом корреляции Спирмена r s = 0.86 (Рисунок 3B, Таблица S8). Поскольку каждый транскрипт может производить только одно чтение в PA-seq, тогда как RNA-seq полагается на охват чтения на всей области транскрипта, счетчик чтения в данном пике PA сайта pA просто отражает количество соответствующего транскрипта. .

10.1371 / journal.ppat.1003749.g002 Рисунок 2 Использование идентифицированных сайтов pA KSHV от латентной до литической инфекции.

(A и B) Гистограммы, представляющие частоту использования каждого идентифицированного сайта pA из всех 3 образцов с латентной (A) или литической (B) инфекцией после нормализации на миллион всех отображенных считываний.(C) Гистограмма, показывающая кратное изменение использования каждого сайта pA от литической (A) до латентной (B) инфекции. На вставке показаны пять нижних участков pA с наименьшими изменениями во время литической инфекции. Красные столбцы в (от A до C) представляют ранее описанный сайт pA латентного транскрипта KSHV, ORF73 / ORF72 / K13. N / A, не применимо.

10.1371 / journal.ppat.1003749.g003 Рисунок 3 Пиковый размер и использование сайтов KSHV pA.

(A) График, показывающий распределение идентифицированных вирусных сайтов pA на основе размера пика PA, определенного с помощью анализа F-seq.Все сайты pA делятся на три категории в зависимости от размера их пиков: узкие (≤30 нт), широкие (> 30, ≤45 нтс) и широкие (> 45 нтс). (B) График разброса, изображающий корреляцию между размерами пиков PA (ось x) и их использованием (ось y). Каждый цветной кружок представляет отображенный сайт pA. Коэффициент корреляции Спирмена (r s ) был рассчитан для всех вирусных сайтов pA.

Цис-элементы РНК в регуляции вирусного полиаденилирования

Для исследования регуляторных элементов, ответственных за полиаденилирование вирусных транскриптов KSHV, мы проанализировали фланкирующие последовательности (± 50 нт.) Всех 67 идентифицированных сайтов pA.Распространенность каждого нуклеотида в индивидуальном положении была рассчитана, после чего был проведен анализ мотивов с использованием программного обеспечения WebLogo (рис. 4A). Выявлена ​​высокая распространенность остатков «А» между 10 и 30 нуклеотидами перед сайтом расщепления, что представляет собой сигнал полиаденилирования, богатый A / U, расположенный выше по течению. Сам сайт расщепления также был обогащен остатками A, за которыми следовал элемент длиной ~ 30 н., В основном богатый U. Такое распределение цис-элементов РНК вокруг вирусных сайтов pA согласуется с тем, что было обнаружено в человеческих транскриптах [16].Чтобы лучше понять роль цис-элементов в регуляции полиаденилирования KSHV, мы выполнили аналогичный анализ отдельно для трех групп сайтов pA с узким, широким или широким пиком (рис. 4A). Профили сайтов pA с узким и широким пиком показали наибольшее сходство с каноническим сайтом pA с определенным расположенным выше A-богатым и нижележащим U-богатым элементами. Сайты pA с широким пиком также демонстрируют богатую ураном область выше по течению. Однако после сайта pA с широким пиком нет значительного богатого ураном элемента, а также нельзя увидеть другие мотивы последовательности.Эти различия в контексте последовательности, окружающей сайты pA с разными пиками, могут быть связаны с их заметным обилием связанных транскриптов, и были дополнительно подтверждены анализом 10 верхних сайтов pA с наибольшим числом считываний последовательности и нижних 10 сайтов pA с наименьшим числом. считываний последовательности среди всех 67 сайтов pA. Как показано на фиг. 4B, верхние 10 сайтов pA показывают высококонсервативные сигналы полиаденилирования выше по течению и богатую U область ниже по течению. Напротив, нижние 10 сайтов pA обнаруживают только менее консервативные сигналы полиаденилирования и не имеют области, богатой U ниже по ходу цепи.

10.1371 / journal.ppat.1003749.g004 Рисунок 4 Последовательный ландшафт вокруг участков КШВ ПА.

(A) Частота (%) каждого A, U, C, G (верхняя часть каждой панели) в области ± 50 нц картированных сайтов pA (стрелки) была рассчитана либо для всех картированных сайтов pA, либо для подгруппы нанесены на карту узкие, широкие или широкие узлы pA. В нижней части каждой панели представлены мотивы, идентифицированные Weblogo. (B) Консервация нуклеотидов в одной и той же области наиболее часто используемых верхних 10 и менее используемых нижних 10 сайтов pA.

Анализ силы вышестоящего поли (A) сигнала (PAS) сайтов KSHV pA еще раз подтвердил этот вывод. Канонический (AAUAAA) и неканонический (NNAUNA) PAS были идентифицированы в пределах 50 нт. Выше картированных 59 сайтов pA (рис. 5A, таблица S9). Два наиболее распространенных PAS в KSHV, как видно из полиаденилирования человека, — это канонический AAUAAA (69%), за которым следует AUUAAA (9%). Использование других неканонических PAS для полиаденилирования вирусной РНК колеблется от 1% до 3% (рис. 5A, таблица S10). Подобно человеческим транскриптам [20], около 12% сайтов pA, картированных в этом исследовании, не имеют PAS.Неожиданно мы обнаружили, что большинство неканонических PAS были связаны с узким пиком и низким уровнем экспрессии. Напротив, широкие и широкие пики используют преимущественно канонические AAUAAA и AUUAAA PAS. Это стало еще более очевидным, когда PAS вверху и внизу использовал сайты 10 pA. Мы обнаружили, что все 10 верхних сайтов pA, но только 60% нижних 10 сайтов pA содержат канонический AAUAAA (рис. 5B, таблица S10).

10.1371 / journal.ppat.1003749.g005 Рисунок 5 Поли (A) сигнал (PAS) и полиаденилирование вирусной РНК.

Регион 50 (AAUAAA) или неканонический PAS. Круговые диаграммы, показывающие процентное соотношение каждого PAS, идентифицированного во всех картированных сайтах pA или в подгруппе сайтов pA (узких, широких или широких) (A) и в 10 наиболее часто используемых и 10 менее используемых сайтах pA (B). ND, не обнаруживается. На диаграммах ниже представлена ​​консервация нуклеотидов в идентифицированных PAS, созданных Weblogo.

Экспериментальная проверка выбранных сайтов pA KSHV

Учитывая, что сайты pA, полученные с помощью PA-seq, в целом, показали высокую корреляцию с ранее картированными сайтами pA KSHV, мы провели серию экспериментов, чтобы подтвердить несколько новых сайтов pA, обнаруженных в этом исследование от 3 ′ RACE.К ним относятся сайт pA ниже ORF27, сайт pA, картированный в кодирующей области ORF61, альтернативные сайты pA ниже ORF54 и T1.5 и кластер из 5 неназначенных сайтов pA ниже внутренних повторов vnct, в дополнение к известные сайты pA и неизвестные альтернативные сайты pA K11, K2 / vIL6 и K12. Большинство выбранных сайтов pA, определенных с помощью PA-seq, были проверены путем секвенирования ожидаемых продуктов 3 ‘RACE в предсказанном размере (ах) (фиг. 6, таблица S11). Альтернативный сайт pA на nt 25192 в пределах T1.5 lncRNA не была экспериментально подтверждена из-за ее использования <1% среди транскриптов T1.5 и отсутствия доступного для поиска PAS в восходящем направлении, ни альтернативных сайтов pA на nt 17227 для K2 / vIL6 и на nt 117868 для K12 из-за их более низкого уровня использования . Мы также не смогли обнаружить какой-либо продукт 3'RACE в прогнозируемых размерах с пяти сайтов pA ниже внутренних повторов vnct, несмотря на их умеренное использование, основанное на количестве связанных счетчиков чтения. Эти сайты pA, идентифицированные с помощью PA-seq, находятся рядом с участком коротких внутренних повторов из 13 п.н. «vnct» между нуклеотидами 29775 и 29942 генома KSHV.Стоит отметить, что четыре из пяти сайтов pA не имеют детектируемого PAS в восходящем направлении, а сайт pA на nt 29615 имеет неканонический PAS AAUAUA. Сообщенный сайт pA в нуклеотиде 18200 для антисмысловой РНК к K2 (vIL6) [29], [31], который не был обнаружен с помощью PA-seq, также не был обнаружен с помощью 3'-RACE в этом исследовании (рис. 6).

10.1371 / journal.ppat.1003749.g006 Рисунок 6 Подтверждение выбранных вирусных сайтов pA с помощью 3 ‘RACE.

Диаграммы над каждым гелем отображают направление транскрипции гена с картированным сайтом (ами) pA в положительной (красный) или отрицательной (синий) цепи.Под каждой диаграммой представлены продукты 3’RACE от амплификации каждым ген-специфическим олиго (дополнительная таблица S11) общей РНК, экстрагированной из клеток TREx-RTA, индуцированных доксицилином в течение 48 часов. Сравнение последовательностей картированных сайтов pA, определенных с помощью PA-seq и 3’RACE, показано под каждым агарозным гелем, с числами, указывающими положения нуклеотидов картированных сайтов pA (черные стрелки) в геноме KSHV.

Мы дополнительно проверили PA-seq-идентифицированные сайты pA из мРНК, антисмысловых по отношению к ORF21, ORF34 и ORF K8 с помощью 3′-RACE, и подтвердили продукцию антисмысловых РНК в В-клетках во время литической вирусной инфекции (фиг. 7A).Обилие считывания этих новых сайтов pA, связанных с каждой антисмысловой РНК, коррелировали, как и предполагалось, с количеством (измеренным по интенсивности полосы) продуктов 3 ‘RACE, полученных из соответствующего транскрипта РНК (фигура 7B).

10.1371 / journal.ppat.1003749.g007 Рисунок 7 Проверка антисмысловых РНК, идентифицированных PA-seq, к ORF21, ORF34 и ORF K8 с помощью 3′-RACE.

(A) Стратегия 3 ‘RACE, продукт RACE и результат секвенирования антисмысловой РНК к ORF21, ORF34 или ORF K8. См. Рисунок 6 для получения более подробной информации.(B) Обнаружение продуктов 3’-RACE коррелирует с количеством считываний PA-seq, полученных из специфических антисмысловых РНК, в отдельных линиях В-клеток с латентной и литической инфекцией KSHV.

Альтернативное полиаденилирование РНК KSHV T1.5

РНК KSHV T1.5 представляет собой длинную некодирующую РНК, которая транскрибируется с нуклеотида 24243 в геноме KSHV, рядом с левым литическим центром репликации (ori L ) (рис. 8А). Экспрессия РНК T1.5 сильно индуцируется вирусным трансактиватором RTA [32].Хотя экспрессия T1.5 необходима для репликации вирусной ДНК, его функциональные характеристики остаются неизвестными [33]. Наше исследование показало, что РНК T1.5 является одним из наиболее распространенных транскриптов, экспрессируемых при инфекции KSHV. 3′-конец T1.5 РНК был картирован на nt 25440 [34], и мы картировали его на nt 25441 с помощью PA-seq и 3’RACE (Рисунок 6). Кроме того, мы обнаружили, что около 10% транскриптов T1.5 также были полиаденилированы с двух дополнительных сайтов pA перед сайтом pA nt 22541 (фигура 8A), что привело к продукции на ~ 300 нуклеотидов более коротких транскриптов, что подтверждено анализом Нозерн-блоттинга. общей РНК BCBL-1 (фиг. 8B).Поскольку антисмысловой зонд, используемый в анализе, был получен из области, расположенной выше по течению от картированных сайтов pA, этот зонд мог обнаруживать все транскрипты, проходящие по этой области: сильная полоса, соответствующая заявленному размеру индуцибельной РНК T1.5, меньшего размера полоса (~ 1,2 т.п.н.) с более слабой интенсивностью, представляющая альтернативно полиаденилированные транскрипты Т1.5 и гораздо больший транскрипт Т6.1. РНК T6.1 не использует сайты pA T1.5 [34], а скорее сайт PAN pA для своей экспрессии (рис. 1A).

10.1371 / journal.ppat.1003749.g008 Рисунок 8 Субклеточная локализация днРНК KSHV T1.5 в клетках PEL.

(A) Диаграмма, отображающая генную структуру локуса T1.5 с кластером сайтов pA, идентифицированных с помощью PA-seq (красные треугольники). Синие линии представляют зонды, используемые для нозерн-блоттинга (NB) и РНК FISH. P – промотор, ori L, –литический ориджин репликации. (B) Нозерн-блоттинг общей (T) или фракционированной (C-цитоплазматической, N-ядерной) РНК, выделенной из клеток BCBL-1 через 24 часа после индукции 1 мМ вальпроатом натрия (VA).В качестве зонда использовали меченный 32 P антисмысловой олиго, специфичный к T1.5, PAN, GAPDH или U6. (C и D) Анализ РНК FISH проводили в клетках TREx BCBL1-RTA, индуцированных 0,1 мкг / мл доксициклина в течение 24 часов. После индукции клетки фиксировали и гибридизовали с меченными Alexaflour антисмысловыми РНК-зондами, полученными путем транскрипции in vitro из плазмид, содержащих фрагменты ДНК KSHV, соответствующие Т1,5 (красный) или PAN (зеленый) РНК. Ядра клеток контрастировали красителем Hoechst DNA. Субклеточные распределения T1.5 и PAN РНК в клетках TREx BCBL1-RTA исследовали с помощью конфокальной микроскопии (C). Количество B-клеток с коэкспрессией и субклеточных (C, цитоплазматических; N, ядерных) T1.5 и / или PAN РНК суммировано на диаграммах Венна (D).

РНК T1.5 содержит несколько коротких ORF и может кодировать небольшие пептиды [34]. Таким образом, мы предположили, что T1.5 может быть экспортирован в цитоплазму. Как и ожидалось, мы продемонстрировали с помощью Нозерн-блоттинга его частичное присутствие в цитоплазме (рис. 8B).Анализы РНК FISH также показали распределение РНК T1.5 как в цитоплазме, так и в ядре клеток PEL, инфицированных KSHV, с использованием антисмыслового зонда РНК на 3′-конце T1.5 (фигура 8A, фигура S5). В этих двух анализах ядерная РНК PAN служила контролем (рис. 8B – C, рис. S5) и, как и ожидалось, отображалась преимущественно в ядре, перекрывающемся с окрашиванием ДНК Hoechst [8], [35]. Интересно, что ядерная коэкспрессия T1.5 и PAN РНК оказывается взаимоисключающей. Мы обнаружили, что клетки экспрессируют высокий уровень ядерного Т1.5 РНК отображают гораздо меньше ядерной РНК PAN или наоборот (рис. 8C). По сравнению с профилем субклеточного распределения РНК PAN, мы видели больше В-клеток с цитоплазматическим и ядерным распределением РНК T1.5 во время литической инфекции вируса (рис. 8D).

Применение PA-seq для изучения экспрессии IL6-хозяина и РНК GAPDH в B-клетках с литической инфекцией KSHV

Полезность PA-seq была дополнительно расширена для изучения экспрессии нескольких генов-хозяев с целью его возможного применения для выявления сайта pA ландшафт генома хозяина до и после литической инфекции KSHV.Первоначально были выбраны человеческий IL6 (hIL6) и GAPDH, потому что B-клетки с литической инфекцией KSHV демонстрируют повышенную экспрессию человеческого IL6 [36], [37], но сниженную экспрессию GAPDH (рис. 8B). Как показано на фиг. 9, результаты PA-seq для GAPDH и hIL6 были сопоставимы с результатами RT-qPCR. Снижение экспрессии РНК GAPDH может быть обнаружено обоими методами во всех трех тестируемых линиях В-клеток с литической инфекцией KHSV и значительное увеличение экспрессии hIL6 в клетках TREx BCBL-1 с литической инфекцией KSHV.Однако ни в одном из этих методов мы не наблюдали увеличения экспрессии hIL6 в клетках JSC-1 с литическими коинфекциями KSHV и EBV, индуцированными бутиратом (очень мощным индуктором), но наблюдали повышенную экспрессию hIL6 в клетках BCBL-1 с вальпроатом (слабый индуктор) -индуцированной литической KSHV-инфекции с помощью RT-qPCR. Человеческий IL6 представляет собой цитокин, высокочувствительный (уязвимый для) деградации РНК, и PA-seq обнаруживает транскрипты, несущие интактный 3′-концевой поли (A) хвост, тогда как RT-qPCR обнаруживает только небольшую область РНК IL6.Таким образом, множественные факторы могут способствовать вариациям в обнаружении экспрессии гена hIL6 от одной клеточной линии к другой.

10.1371 / journal.ppat.1003749.g009 Рисунок 9 Применение PA-seq для изучения экспрессии хозяина IL-6 и GAPDH во время литической инфекции KSHV.

Гистограммы и таблицы под каждой гистограммой показывают количественные уровни РНК GAPDH и человеческого IL6 (hIL6).

Обсуждение

В этом отчете мы представляем первый ландшафт вирусного генома сайтов полиаденилирования из трех клеточных линий PEL с латентной или литической инфекцией KSHV.Исчерпывающий ландшафт сайтов pA для всего генома KSHV был выявлен с помощью модифицированной стратегии PA-seq, которая передает разрешение отдельных нуклеотидов и специфичность цепи [24], [25]. Картированные сайты pA были аннотированы для всех известных генов KSHV и четырех предполагаемых новых генов в геноме KSHV. Уровень устойчивой экспрессии каждого гена в геноме KSHV от вирусной латентной до литической инфекции количественно оценивали с помощью считывания PA-seq, связанного с каждым картированным сайтом pA, и использовали для различения вирусных латентных генов от литических генов.Путем анализа фланкирующих последовательностей каждого картированного сайта pA мы определили регуляторные элементы, управляющие полиаденилированием вирусной РНК и экспрессией генов. Что еще более важно, мы идентифицировали несколько вирусных генов, использующих альтернативное полиаденилирование в качестве механизма их экспрессии во время инфекции KSHV. В целом, картированные сайты вирусного pA в этом исследовании имеют высокую точность как с точки зрения положения нуклеотидов, так и ориентации цепи по сравнению с известными вирусными сайтами pA, идентифицированными стандартными методами (таблица S3) [8], [34], [ 38] — [42].Однако нам не удалось проверить несколько сайтов pA, о которых ранее сообщалось в других исследованиях, включая сайт pA на nt 124061 для C-концевого усеченного LANA [43] и pA-сайт на nt 18200 (+) для экспрессии 0,7 транскрипт kb антисмысловой к K2 (vIL-6) [29], [31]. Транскрипт размером 0,7 т.п.н. был обнаружен с использованием специально изготовленных тайлинговых массивов, покрывающих весь геном KSHV [29], [31] и праймера T7-Oligo (dT) для синтеза кДНК образца. Вероятность внутреннего праймирования олигопраймера, используемого в исследовании, может создать аберрантный синтез зондов кДНК, гибридизующихся с мозаичными массивами.В нашем исследовании обнаружения любых сайтов псевдо-pA, возникающих в результате внутреннего прайминга, в значительной степени удалось избежать за счет исключения считывания последовательности выше A-участка в геноме KSHV. Стоит отметить, что экспрессия антисмыслового транскрипта 0,7 т.п.н. к K2 была первоначально обнаружена только в литически инфицированных вирусами эндотелиальных клетках iSLK.219, происходящих из саркомы Капоши, но не обнаружена в B-клетках, полученных из PEL [29]. В дополнение к отнесению известных сайтов pA и многих новых вирусных сайтов pA из этого исследования к ранее аннотированным генам KSHV, мы также идентифицировали несколько новых вирусных сайтов pA (таблица S3), которые не могли быть отнесены к каким-либо известным генам KSHV.Эти неназначенные сайты pA часто находятся в цепи, противоположной известным генам KSHV, включая ORF8, ORF21, ORF34, K8 и ORF50. Некоторые из этих антисмысловых транскриптов были описаны в других отчетах [29], и существование этих РНК, антисмысловых по отношению к транскриптам ORF21, ORF34 и ORF K8, могло быть подтверждено 3′-RACE в этом исследовании (фиг. 7). Их потенциальная роль в биологии KSHV сейчас активно исследуется.

KSHV был разработан для использования одного сайта pA для экспрессии нескольких генов во многих областях генома.Подтверждая это мнение, наш анализ PA-seq выявил многочисленные области генома KSHV с несколькими вирусными генами (до 5 генов), имеющими общий сайт pA (рис. 1B). Как следствие, многие гены KSHV экспрессируются в виде бицистронных или полицистронных транскриптов с длинной 3′-UTR, покрывающей кодирующую область (и) нижележащего (ых) гена (ов). Эти структуры РНК уязвимы для вирусных и клеточных miRNA [44] — [46], и все транскрипты из областей кластера генов могут регулироваться даже с помощью одной miRNA.Другие могли бы избежать этой регуляции с помощью сплайсинга РНК нижележащих ORF, как показано в ORF50 / K8 / K8.1 и транскрипте K1 [28], [47], [48]. Таким образом, понимание организации гена и положения сайта pA имеет решающее значение для исследований с выключением или выключением различных вирусных генов из генома KSHV, чтобы сделать соответствующую интерпретацию функции отдельных вирусных генов в кластерной области.

Использование каждого картированного сайта pA в этом исследовании определялось путем подсчета считываний последовательностей, связанных с каждым сайтом pA, для приближения к устойчивому уровню экспрессии соответствующего гена (ов).Когда считывание последовательности данного сайта pA при вирусной литической инфекции сравнивали с таковым при латентной вирусной инфекции, мы могли отличить использование сайта pA от вирусных литических генов до вирусных латентных генов. Сайт pA для экспрессии литического гена может использоваться в 100 раз больше при литической инфекции, чем при латентной инфекции, тогда как использование сайта pA для экспрессии латентного гена показывает лишь небольшое увеличение (менее чем в 10 раз) при литической инфекции. Два сайта pA ниже K12, классического латентного гена вируса, могли быть исключением, потому что оба показали повышенное использование при вирусной литической инфекции.Увеличение использования двух сайтов рА K12 согласуется с открытием, что литически индуцибельный промотор может быть активирован для экспрессии K12 [49]. Анализ использования сайта pA при литической вирусной инфекции также подтвердил, что РНК PAN является чрезвычайно многочисленным видом РНК, при этом количество считываний последовательностей в картированном сайте pA в нуклеотиде 29740 (+) только от вирусной литической инфекции составляет более 80% от общей последовательности. -читывает для всех pA сайтов.

Более того, в этом исследовании было обнаружено, что эффективная экспрессия вирусных РНК-транскриптов связана с размером пика сайта pA.Следует отметить, что каждая запись могла вызвать только одно чтение в PA-seq. Таким образом, количество считываний в пике PA просто отражает количество соответствующего транскрипта. Фактически не ожидается, что большее количество считываний последовательностей приведет к увеличению размера пика PA, особенно когда события расщепления pA точны. Таким образом, наблюдаемая нами положительная корреляция между размерами пиков PA и уровнями экспрессии соответствующих транскриптов может указывать на некоторую степень «проскальзывания» в полиаденилировании вирусных транскриптов для обеспечения высокого уровня экспрессии на литической стадии.По сравнению с сайтами pA, попадающими в широкий или широкий пик, транскрипт РНК, несущий сайт pA с узким пиком, был менее экспрессирован, с меньшим количеством считываний последовательности PA-seq. Хотя это различие в сайтах pA с узким пиком может частично объясняться частым использованием неканонических PAS, должны быть другие неизвестные механизмы, управляющие использованием сайта pA с узким пиком, отличные от канонических и неканонических. PAS как таковой. Предыдущие сообщения показали, что сила PAS напрямую влияет на общий уровень зрелых транскриптов [50], [51] и определяется консервативностью цис-элементов РНК UGUAN выше по течению и движением U / G ниже по течению от PAS AAUAAA.Например, наличие более слабого раннего PAS SV40 приводит к более низкой экспрессии репортерного гена, чем конструкция, содержащая более сильный поздний PAS SV40, когда оба управляются одним и тем же промотором [52]. Следовательно, сила PAS, регулирующая полиаденилирование отдельных вирусных транскриптов, может обеспечивать дополнительный уровень регуляции для точной настройки их правильной экспрессии во время вирусной инфекции. Кроме того, длина 3′-UTR может быть другим фактором, влияющим на уровень экспрессии РНК. Более короткие 3′-UTR в транскриптах KSHV д. Обеспечивать преимущество экспрессии вирусных генов при уходе от опосредованной miRNA деградации РНК [53], [54].

Недавние исследования выявили широко распространенное альтернативное полиаденилирование РНК в различных организмах и его важную роль в регуляции экспрессии генов [23]. Мы идентифицировали несколько генов KSHV, включая как некодирующие, так и белок-кодирующие гены, демонстрирующие альтернативное полиаденилирование РНК (Таблица S4). Эти альтернативные сайты pA ранее игнорировались из-за их относительно низкой распространенности и концептуальной предвзятости в отношении самых длинных обнаруживаемых транскриптов. Все альтернативные сайты pA, идентифицированные в нашем исследовании, были расположены в 3′-UTR соответствующих транскриптов, и, таким образом, их использование не влияет на кодирующий потенциал этих вариантных транскриптов.Примечательно, что альтернативное полиаденилирование было идентифицировано в двух наиболее распространенных вирусных днРНК PAN и T1.5, каждая из которых содержит три альтернативных сайта pA. Мы экспериментально проверили два альтернативных сайта pA для экспрессии соответствующих транскриптов T1.5 в B-клетках с вирусной литической инфекцией (рисунки 6, 8). Кроме того, в нашем более раннем исследовании сообщалось об альтернативном полиаденилировании экспрессии РНК PAN [35]. Следовательно, роль альтернативного полиаденилирования в экспрессии PAN и T1.5 станет привлекательной темой для лучшего понимания функции PAN и T1.5 днРНК.

Два необычных кластера сайтов pA, расположенных ниже областей внутренних повторов, были идентифицированы с помощью PA-seq, но не могли быть подтверждены с помощью 3’RACE в этом исследовании. Первый кластер расположен в минус-цепи генома KSHV, ниже повторов «vnct» из 13 п.н. и состоит из 5 отдельных сайтов pA в области ∼250 п.о. от нуклеотидов 29376 (-) до 29615 (-). Второй кластер из трех сайтов pA от 118012 (-) до 118087 (-) также расположен в минусовой цепи ниже повторяющейся области «zppa», содержащей два повтора из 23 пар оснований (рис. 1A).Эти сайты pA расположены в кодирующей области K12, но в предыдущих исследованиях не было обнаружено транскриптов, связанных с этими картированными сайтами pA [40]. Ни у одного из них нет канонического апстрима PAS. Считывания последовательности, обнаруживаемые с помощью PA-seq, более вероятно связаны с криптической транскрипцией из внутренних областей [55]. Однако эти транскрипты нестабильны, и их деградация клеточной экзосомой инициируется добавлением короткого хвоста pA, который опосредуется неканонической полимеразой pA и, следовательно, не зависит от PAS [56].Эти транскрипты с быстрым оборотом не могут быть обнаружены 3’RACE, но могут быть обнаружены нашим высокочувствительным PA-seq.

Материалы и методы Cells

Клеточные линии первичной эффузионной лимфомы (JSC-1 [KSHV +, EBV +], BCBL-1 [только KSHV +] и TREx BCBL-1-вектор и –RTA [полученные из BCBL-1]) [57], [58] В этом исследовании использовали литическую репликацию вируса в течение 48 часов с помощью 3 мМ бутирата натрия (Bu) для клеток JSC-1, 0,6 мМ вальпроата натрия (VA) для клеток BCBL-1 или 1 мкг / мл доксициклина (DOX). как для TREx BCBL-1-вектора, так и для клеток –RTA.Тотальную РНК выделяли с помощью TRIzol (Invitrogen), и загрязнение геномной ДНК удаляли с помощью набора RNeasy Mini (Qiagen), используя стадию расщепления ДНКазой I на колонке.

PA-seq

3′-концевая библиотека для каждого образца была сконструирована с использованием модифицированной стратегии PA-seq [25], [24]. Вкратце, 10 мкг свободной от ДНК тотальной РНК из каждого образца, описанного выше, разрезали на фрагменты по 200–300 нуклеотидов путем нагревания (94 ° C в течение 3 минут) с магнием. После осаждения была проведена обратная транскрипция с использованием модифицированного олиго (dT) праймера (5′-bio-T 16 dUTTTVN-3 ‘,’ bio ‘обозначает двойную группу биотина,’ dU ‘обозначает дезоксиуридин,’ V ‘обозначает любой нуклеотид, кроме Т и «N» означает любой нуклеотид).После синтеза второй цепи полученная дцДНК была удалена с помощью Dynabeads MyOne C1 (Invitrogen) и дефосфорилирована с помощью термолабильной щелочной фосфатазы APex (Epicenter), что обеспечило специфичность цепи ПЦР для селективного лигирования адаптера. Дефосфорилированная дцДНК высвобождалась из гранул ферментным расщеплением USER (NEB) и ремонтировалась по концам с последующим добавлением основания «А» на концах. Примечательно, что только первая кДНК содержит 5’-фосфат и, таким образом, может быть лигирована с Y-линкером Illumina с парным концом со штрих-кодом без разрыва.Использование dUTP в праймере олиго (dT) и на этапе дефосфорилирования усиливают специфичность цепи и позволяют точно картировать сайт расщепления pA при разрешении по одному основанию. Продукты лигирования между 250 и 450 п.н. очищали на геле, и библиотеки PA-seq генерировали с помощью 16-цикловой ПЦР с высокоточной ДНК-полимеразой Phusion Hot Start (Finnzymes). Полученные библиотеки были подвергнуты секвенированию в двух повторностях на секвенаторе Illumina HiSeq2000.

Анализ последовательности

Полученные необработанные считывания сначала сравнивали с геномом KSHV (GenBank, код U75698.1), геном штамма EBV B95-8 (GenBank в соответствии с номером V01555.2) и геном человека (версия UCSC hg19) с помощью инструмента выравнивания Берроуза-Уиллера (BWA) [59], допускающего два несоответствия, и обрабатываемого SAMtools [60]. Все уникально картированные пары последовательностей, специфичные для KSHV, использовали для последующего анализа. Сначала с помощью браузера генома IGV (www.broadinstitute.org/igv/) было визуализировано распределение полученных прочтений по геному KSHV, чтобы убедиться в их пригодности для анализа сайтов pA. Затем были определены отдельные сайты pA KSHV путем определения пиков с использованием программы F-Seq [26] в объединенных библиотеках.Пики PA-seq выше порога в 50 считываний считались истинными пиками. Пики были дополнительно уточнены путем удаления сайтов псевдо-pA, возникающих в результате «внутреннего праймирования» из-за постоянного «A-растяжения» в шаблоне. После вызова пика считывания последовательности были снова присвоены отдельным образцам для получения счетчиков считываний как для скрытой, так и для литической инфекции. Чтобы получить относительный уровень экспрессии, общее количество считываний было нормализовано на миллион к общему количеству считываний, сопоставленных как с KSHV, так и с человеком [61].

Анализ мотивов последовательностей

Последовательность, окружающая картированные сайты pA, была покрыта от 50 нуклеотидов выше и 50 нуклеотидов ниже каждого идентифицированного сайта pA для анализа мотивов. Процент встречаемости для каждого нуклеотида был рассчитан, нанесен на график и сглажен с помощью функции лесса в программном обеспечении R (R версия 2.12.1). Сигналы полиаденилирования (PAS), возникающие в пределах 50 нт. Выше сайта pA, были назначены вручную. Графическое представление сохранения последовательности было создано с помощью Weblogo v3 (http: // weblogo.berkeley.edu/) [62], [63].

3′-конец 3′-конца транскрипта RACE

идентифицировали с помощью набора для амплификации кДНК SMARTer RACE (Clontech). Последовательности праймеров, используемые в 3’RACE, перечислены в таблице S11. Полученные продукты 3’RACE секвенировали непосредственно или после клонирования в векторе pCR2.1-TOPO (Invitrogen).

Нозерн-блот

. Тотальную РНК выделяли с использованием реагента TRIzol. Цитоплазматическую и ядерную фракции РНК выделяли, как описано [64]. Полученную РНК (5 мкг) разделяли на агарозном геле и анализировали методом Нозерн-блоттинга с использованием 32 P меченых олигозондов: oVM 208 (5′-CGTGGCTGTGCTTCTCATCAT-3 ‘) для T1.5 днРНК, oJM7 (5’-GTTACACAACGCTTTCACCTACA-3 ‘) для днРНК PAN, oZMZ270 (5′-TGAGTCCTTCCACGATACCAAA-3′) для GAPDH и oST197 (5’-AAAATACGGA-3’CTTC) для UCA-AAAATATGGAACGNATC).

РНК FISH

Зонды одноцепочечной смысловой и антисмысловой РНК получали с помощью набора FISH Tag RNA Multicolour Kit (Invitrogen) путем транскрипции in vitro с использованием фрагмента ДНК генома KSHV (нуклеотиды 24906–25375 для T1.5 и нуклеотиды 29018–29481 для днРНК PAN). как шаблоны. Гибридизацию проводили, как описано ранее [65]. После иммобилизации клетки фиксировали 2% параформальдегидом, проницаемым с помощью 0.5% Triton X-100 и блокировали гибридизационным буфером (50% формамид, 5 × SSC, 0,1% Tween-20, 50 мкг / мл гепарина, 100 мкг / мл ДНК лосося). Гибридизацию проводили в течение ночи при 55 ° C. Ядра контрастировали красителем Hoechst. Снимки были получены с помощью лазерного сканирующего микроскопа Zeiss LSM510 META (Zeiss).

RT-qPCR

. Общую клеточную РНК, выделенную с помощью TRIzol (Invitrogen), обрабатывали ДНКазой, не содержащей Turbo ДНК, для удаления ДНК. Пять микрограммов общей клеточной РНК использовали для синтеза кДНК с использованием SuperScript First-Stand Synthesis System (Invitrogen).Уровни транскриптов GAPDH и человеческого IL6 (hIL6) определяли с помощью RT-qPCR с использованием метода ΔC t [44], [66], [67].

% PDF-1.7 % 5723 0 объект > / Метаданные 174 0 R / Контуры 202 0 R / Страницы 5722 0 R / StructTreeRoot 214 0 R / Тип / Каталог >> эндобдж 174 0 объект > поток 2021-05-22T23: 21: 15-07: 002020-06-15T18: 14: 18-04: 002021-05-22T23: 21: 15-07: 00Adobe Acrobat Pro DC 20.6.20034application / pdf

  • Yu, Lulu ( NIH / NCI) [F]
    • uuid: 42abba99-58ed-4415-ab50-c55985250bd9uuid: 67fcae76-1dd2-11b2-0a00-aa00d8c3d3ff Adobe Acrobat Pro DC 20.6.20034 конечный поток эндобдж 202 0 объект > эндобдж 5722 0 объект > эндобдж 214 0 объект > эндобдж 217 0 объект > эндобдж 215 0 объект > эндобдж 216 0 объект > эндобдж 428 0 объект > 418 0 R] / P 278 0 R / Pg 36 0 R / S / Link >> эндобдж 429 0 объект > 420 0 R] / P 278 0 R / Pg 36 0 R / S / Link >> эндобдж 430 0 объект > 423 0 R] / P 279 0 R / Pg 41 0 R / S / Link >> эндобдж 431 0 объект > 415 0 R] / P 225 0 R / Pg 213 0 R / S / Link >> эндобдж 403 0 объект > эндобдж 404 0 объект > эндобдж 2599 0 объект > эндобдж 2600 0 объект > эндобдж 2601 0 объект > эндобдж 2602 0 объект > эндобдж 2603 0 объект > эндобдж 2604 0 объект > эндобдж 2605 0 объект > эндобдж 2606 0 объект > эндобдж 2607 0 объект > эндобдж 2608 0 объект > эндобдж 2609 0 объект > эндобдж 2610 0 объект > эндобдж 2611 0 объект > эндобдж 2612 0 объект > эндобдж 2613 0 объект > эндобдж 2614 0 объект > эндобдж 2615 0 объект > эндобдж 2616 0 объект > эндобдж 2617 0 объект > эндобдж 2618 0 объект > эндобдж 2619 0 объект > эндобдж 2620 0 объект > эндобдж 2621 0 объект > эндобдж 2622 0 объект > эндобдж 2623 0 объект > эндобдж 2624 0 объект > эндобдж 2625 0 объект > эндобдж 2626 0 объект > эндобдж 2627 0 объект > эндобдж 2628 0 объект > эндобдж 2629 0 объект > эндобдж 2630 0 объект > эндобдж 2631 0 объект > эндобдж 2632 0 объект > эндобдж 2633 0 объект > эндобдж 2634 0 объект > эндобдж 2635 0 объект > эндобдж 2636 0 объект > эндобдж 2637 0 объект > эндобдж 2638 0 объект > эндобдж 2639 0 объект > эндобдж 2640 0 объект > эндобдж 2641 0 объект > эндобдж 2642 0 объект > эндобдж 2643 0 объект > эндобдж 2644 0 объект > эндобдж 2645 0 объект > эндобдж 2646 0 объект > эндобдж 2647 0 объект > эндобдж 2648 0 объект > эндобдж 2649 0 объект > эндобдж 2650 0 объект > эндобдж 2651 0 объект > эндобдж 2652 0 объект > эндобдж 2653 0 объект > эндобдж 406 0 объект > эндобдж 407 0 объект > эндобдж 408 0 объект > эндобдж 2654 0 объект > эндобдж 2655 0 объект > эндобдж 2656 0 объект > эндобдж 2657 0 объект > эндобдж 2658 0 объект > эндобдж 2659 0 объект > эндобдж 2660 0 объект > эндобдж 2661 0 объект > эндобдж 2662 0 объект > эндобдж 2663 0 объект > эндобдж 2664 0 объект > эндобдж 2665 0 объект > эндобдж 410 0 объект > эндобдж 411 0 объект > эндобдж 2666 0 объект > эндобдж 2667 0 объект > эндобдж 2668 0 объект > эндобдж 2669 0 объект > эндобдж 2670 0 объект > эндобдж 2671 0 объект > эндобдж 2672 0 объект > эндобдж 2673 0 объект > эндобдж 2674 0 объект > эндобдж 2675 0 объект > эндобдж 2676 0 объект > эндобдж 2677 0 объект > эндобдж 413 0 объект > эндобдж 166 0 объект > / MediaBox [0 0 792 612] / Parent 156 0 R / Resources> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text] >> / Rotate 0 / StructParents 42 / Tabs / S / Type / Page >> эндобдж 5738 0 объект [5742 0 R] эндобдж 5739 0 объект > поток H̗ [ܶ ϯ [8: UR% qAH> mw $ rrZ5` [/} 诏 ˇuW ﮆ ~? ^ W {sɏCЩuwFzroF! M7 /; ¯5w ^} uwjam ݿ βw n ~ u / ΎFĝ ܰ McR> v d $ aa ه sC Ճ ‘& үApuZS ښ | K.圸 —Keɠz \] \

    Экспрессия

    c-Kit в гладкомышечных клетках снижает бремя атеросклероза у мышей с гиперлипидемией

    Основные моменты

    •

    c-Kit, известный маркер стволовых клеток, играет важную роль в гладкомышечные клетки.

    •

    Дефицит c-Kit увеличивает миграцию гладкомышечных клеток к атеросклеротическим поражениям.

    •

    Дефицит c-Kit увеличивает образование пенистых клеток на основе гладкомышечных клеток.

    •

    Экспрессия c-Kit снижает атеросклероз в отличие от других рецепторных тирозинкиназ.

    Реферат

    Предпосылки и цели

    Повышенная активность рецепторной тирозинкиназы (RTK) исторически была связана с атеросклерозом. Парадоксально, но недавно мы обнаружили, что глобальный дефицит функции c-Kit увеличивает атеросклероз у мышей с гиперлипидемией. Это исследование было направлено на изучение того, зависит ли такой необычный атеропротекторный фенотип от функции c-Kit в гладкомышечных клетках (SMC).

    Методы

    Мы изучали атеросклероз у мышей с условным нокаутом SMC (набор SMC ) и контрольных однопометников. Мышей, которым вводили тамоксифен (ТАМ) и носитель, давали диету с высоким содержанием жиров в течение 16 недель перед оценкой атеросклероза всей аорты с использованием окрашивания масляным красным. Гладкомышечные клетки отслеживали в синусе аорты мышей с условным отслеживанием c-Kit (набор SMC eYFP) и их контрольных однопометников (набор WT eYFP) с помощью иммунофлуоресцентной конфокальной микроскопии.Затем мы выполнили секвенирование РНК на первичных SMC от мышей с дефицитом c-Kit и контрольных мышей и идентифицировали значительно измененные гены и пути в результате дефицита c-Kit в SMC.

    Результаты

    Атеросклероз значительно увеличился у мышей Kit SMC по сравнению с контрольными группами. Кроме того, потеря c-Kit в SMC увеличивала размер бляшки и площадь некротического ядра в синусе аорты у мышей с гиперлипидемией. Клетки гладких мышц мышей Kit SMC eYFP были более склонны к миграции и экспрессии маркеров пенистых клеток (например,g., Mac2 и MCAM), чем у контрольных однопометных животных. Анализ RNAseq показал значительную активацию генов, связанных с пролиферацией, миграцией, метаболизмом липидов и воспалением, вторичным по отношению к потере функции Kit в первичных SMC.

    Выводы

    Потеря c-Kit увеличивает миграцию SMC, пролиферацию и экспрессию маркеров пенистых клеток в атеросклеротических бляшках гиперлипидемических мышей.

    Ключевые слова

    Атеросклероз

    Клетки гладкой мускулатуры

    c-Kit

    Foam cell

    Рецептор тирозинкиназы

    Atheroprotective

    Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

    Просмотреть полный текст Else

    V.

    Рекомендуемые статьи

    Цитирование статей

    Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

    Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

    Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

    PEDF и пептид 44-мер, производный от PEDF, защищают кардиомиоциты от апоптоза и некроптоза, вызванного гипоксией, за счет антиоксидантного эффекта

    Реагенты

    Приобретены тельца против расщепленной каспазы-3 (№ 9664), анти-β-актина (№ 13E5) от Cell Signaling Technology, Inc. (Cell Signaling, Массачусетс). Тела Anti-RIP 3 (# ab56164) были приобретены у Abcam, Inc. (Abcam, Cambridge, UK). Моноклональные анти-актиновые (α-саркомерные) антитела (# A2172), некростатин-1 (# N9037), Hoechst 33258 (# 861405) и диацетат 2 ‘, 7’-дихлорфлуоресцина (DCFH-DA; # D6883) были приобретены у Sigma. -Aldrich Co (St.Луи, Миссури). Набор для определения гибели клеток in situ (№ 11684795910) был приобретен у Roche Ltd (Roche, США). Набор для обнаружения супероксиддисмутазы (SOD; # A001-1), малонового альдегида (MDA; # A002-1) и каталазы (CAT; # A007-1) был приобретен в JIANCHENG Bioengineering Institute (Нанкин, Китай). Набор для анализа клеточной глутатионпероксидазы (GPx; # S0056) и ингибитор каспаз Z-VAD-FMK (# C1202) были приобретены в Институте биотехнологии Beyotime (город Наньтун, Китайская Республика).

    Препараты белка и пептидов PEDF

    Рекомбинантный PEDF был синтезирован CUSABIO BIOTECH CO., ООО Синтетические пептиды 34-мер и 44-мер были сконструированы из аминокислотных положений 44–77 (DPFFKAPVNKLAAAVSNFGYDLYRLRSGAVSTGN) и 78–121 (ILLSPLSVATALSALSLGAEQRTESVIHRALYYDLINNPDIHST, соответственно, последовательный номер доступа в гене крысы GenBocPED79TM) (шанхайский номер доступа к PED79TM) (шанхайский номер доступа). очистка жидкостной хроматографией высокого давления (чистота> 90%) и определение амино-концевой последовательности. Полученные пептиды растворимы в водных растворах.

    Культура клеток и гипоксия

    Клетки H9c2, полученные из эмбрионального сердца крысы, культивировали в среде DMEM (Gibco) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (Gibco), антибиотиков (50 Ед / мл пенициллина и 50 мкг / мл стрептомицина) при 37 °. C в атмосфере, состоящей из 95% воздуха и 5% CO 2 .Субконфлюэнтные клетки (70 ~ 80%) субкультивировали 1: 4. Клетки трипсинизировали, высевали (10000 ~ 12000 клеток / см 2 ) в чашки диаметром 60 мм для анализа активности расщепленной каспазы 3 и RIP3 или в 48-луночный культуральный планшет (Corning, США) для иммунофлуоресцентного окрашивания и выращивали в течение 24 часов перед лечение гипоксии. Гипоксия была достигнута путем культивирования клеток в жидкости Д-Хэнка с депривацией глюкозы в трехгазовом инкубаторе (Heal Force, Шанхай, Китай), насыщенном 5% CO 2 /1% O 2 при 37 ° C для указанные периоды времени.

    Первичные культуры кардиомиоцитов крыс

    Новорожденных крыс Sprague-Dawley (SD) (возраст 1-3 дня, вес 5-7 г, среднее значение 6,1 ± 0,7 г) были получены из Центра экспериментальных животных Медицинского колледжа Сюйчжоу. Все эксперименты проводились в соответствии с соответствующими инструкциями и правилами. Протокол исследования был одобрен местным институциональным наблюдательным советом в учреждении, аффилированном с авторами, 32 . Кардиомиоциты желудочков от 1–3-дневных постнатальных крыс SD выделяли и культивировали, как описано, с небольшими модификациями.Вкратце, после анестезии диэтиловым эфиром новорожденных крыс стерилизовали, затем вырезали сердца, измельчали ​​и обрабатывали трипсином. Диссоциированные клетки предварительно засевали в течение 1 часа в присутствии 0,1 ммоль / л бромдезоксиуридина (BRDU, Sigma) для селективного обогащения кардиомиоцитами. Включение BRDU привело к ингибированию роста сердечных фибробластов. Полученную суспензию клеток (10000 ~ 12000 клеток / см 2 ) помещали на 48-луночный культуральный планшет в культуральной среде. Более 90% клеток были кардиомиоцитами, что оценивалось с помощью непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания моноклональным антиактиновым (α-саркомерным) антителом (A2172, Sigma).

    Двойное мечение с иммунофлуоресценцией расщепленной каспазы 3 и окрашивание по TUNEL

    Клетки высевали в 48-луночные планшеты (Corning, США). После гипоксии клетки обрабатывали 4% параформальдегидом в течение 10 мин при комнатной температуре, а затем трижды промывали PBS, pH 7,4. Затем клетки инкубировали с 1% козьей сывороткой, разведенной в PBS, в течение 1 часа при комнатной температуре, а затем инкубировали с антителом против расщепленной каспазы 3 в буфере для разведения (1% бычий сывороточный альбумин, 0,1% в PBS) в течение ночи при 4 ° C.Клетки инкубировали с антимышиным вторичным антителом (Abcam) 1: 200 в PBS в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем проводили окрашивание dUTP-меткой ник-конца (TUNEL), опосредованное терминальной дексинуклеотидилтрансферазой (TUNEL), с использованием определения гибели клеток in situ набор (Roche, США) согласно протоколу производителя. Клетки инкубировали с реакционным буфером, содержащим раствор фермента и раствор метки с отношением фермента к метке 1: 9 при 37 ° C в течение 1 ч 33 . Клетки контрастировали с использованием красителя Hoechst (Sigma-Aldrich; St.Луи, Миссури). Клетки наблюдали под флуоресцентным микроскопом (Olympus, Япония).

    Вестерн-блоттинг-анализ

    Для вестерн-блоттинга клетки солюбилизировали в буфере для лизиса (100 ммоль / л трис-HCl, 4% SDS, 20% глицерин, 200 ммоль / л DTT и ингибиторы протеазы, pH 6,8). Общий клеточный белок денатурировали кипячением в течение 10 мин с равным объемом 2 × трис-глицинового SDS-буфера. Белок разделяли 10% SDS-PAGE и переносили на нитроцеллюлозную мембрану (Millipore, США).После блокирования с помощью 5% обезжиренного молока / PBS-T в течение 3 часов при комнатной температуре мембраны инкубировали с козьим антителом против расщепленной каспазы 3 (Cell Signaling, MA) и козьим антителом против RIP 3 (Abcam, UK) соответственно. Затем добавляли флуоресцентно меченное вторичное антитело (Rockland, США) на 1 ч и затем сканировали с помощью системы инфракрасной визуализации Odyssey (Li-Cor Biosciences, США).

    Обнаружение образования внутриклеточных ROS

    Генерацию внутриклеточных ROS измеряли путем мониторинга возрастающей флуоресценции 2’7′-дихлорфлуоресцеина (DCF).2’7′-дихлородигидорофлуоресцеина диацетат (DCFH-DA; Sigma, Сент-Луис, Миссури) проницаем для клеток, он может проникать в клетку, где внутриклеточные эстеразы отщепляют диацетатную группу. Образующийся DCFH удерживается в цитоплазме и окисляется до DCF под действием ROS. 5 × 10 4 клеток H9c2 высевали в каждую лунку 48-луночного планшета. После 24-часовой гипоксии с PEDF и 44mer или без них клетки промывали один раз средой, не содержащей фенолового красного, и инкубировали в 200 мкл рабочего раствора DCFH-DA (20 мкМ) при 37 ° C в течение 30 минут.Клетки наблюдали под флуоресцентным микроскопом (Olympus, Япония). Флуоресценцию DCF контролировали при длинах волн возбуждения и испускания 485 нм и 530 нм.

    Измерение T-SOD, MDA, CAT и GPx

    Активности T-SOD, MDA, GPx и CAT измеряли с использованием соответствующих наборов для обнаружения в соответствии с инструкциями производителей. Активность Т-СОД исследовали ксантиноксидазным методом. Уровни MDA исследовали методом TBA. Активность GPx исследовали методом ультрафиолетовой спектрофотометрии.Активность CAT проверяли колориметрическим методом. Данные наблюдали с помощью многорежимного ридера для микропланшетов (Synergy 2, Bio-Tek, США).

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *